一、带脂肪皮肤移植的实验研究与临床应用（论文文献综述）
吴航飞,王康淳,潘崎,程颖[1]（2022）在《小鼠羊水间充质干细胞的分离、培养及鉴定》文中进行了进一步梳理目的探讨小鼠羊水间充质干细胞（AF-MSC）的分离、培养及鉴定。方法在无菌条件下获取孕鼠子宫,收集羊水后进行过滤和离心,对沉淀细胞团进行培养并传代。观察AF-MSC的形态,分析AF-MSC的增殖特点,采用流式细胞术鉴定AF-MSC的表面标志物,检测AF-MSC的三系分化能力及冷冻复苏后的细胞活力。结果小鼠AF-MSC呈典型的梭形,融合度>80%时会出现典型的漩涡状结构。小鼠AF-MSC传代培养无明显潜伏期,培养2～3 d进入对数增长期,增长速度最快,之后增殖速度减慢,进入平台期。AF-MSC表达干细胞抗原（Sca）-1、CD29、CD44,不表达CD34、CD45。小鼠AF-MSC成骨分化后,矿化结晶被茜素红染成深红色的点状;成软骨分化后,分泌的酸性粘多糖被阿利新蓝染成淡蓝色;成脂分化后,胞质脂滴被油红O染成红色。细胞冷冻复苏后存活率>95%,生长状态良好,6 d时增殖能力高于冻存前（P<0.05）,其他时间增殖能力与冻存前比较,差异无统计学意义（均为P>0.05）。结论本实验成功分离了小鼠AF-MSC,过程简便、成本低,且分离的细胞可随传代次数的增加而纯化,冻存不影响其增殖能力。
刘学磊[2]（2021）在《仿生电磁场在癌症及糖尿病治疗中的应用研究》文中研究指明癌症与糖尿病在国内外都有着很高的发病率,已经成为全球严重的公共卫生问题,严重威胁着人民的健康,给患者及其家庭造成了沉重的负担。目前,主流的癌症治疗手段包括化学疗法、放射疗法和外科手术。这些传统的治疗方法不但会引起诸多的副作用,还常常伴随着较高的复发率;另一方面,目前治疗II型糖尿病（T2DM）主要依赖改善生活习惯,使用降糖药,以及补充外源性胰岛素的方法控制病情进展。但是,治疗效果并不理想,只有一半接受治疗的患者血糖水平得到了有效控制。随着电力工业的发展,电磁场的生物效应越来越受到人们的关注。1979年,Wertheimer调查了超高压电站对儿童白血病发病率的影响。由此开启了近代生物电磁学的研究高潮。早期的研究者更多地关注人工电磁场对人体健康的负面影响,为电磁场阈值的制定提供科学依据。近年来,越来越多积极的电磁场生物效应被研究者们所发现,包括电磁场对癌症、糖尿病、神经系统疾病、免疫系统疾病、皮肤伤口愈合、肌肉骨骼系统疾病等疾病的治疗作用以及抗氧化等健康增强功能。与传统的疾病治疗手段相比较,电磁治疗还具有安全、无痛、无创、无副作用等优点。电磁治疗方法还处于发展的初期,虽然具有诸多的优势,同时也存在一些明显的问题。例如:1)生物电磁效应机制尚未明确;2)存在许多不能成功复现甚至相互冲突的实验结果;3)治疗用电磁场参数选择的盲目性。这些问题的存在阻碍了电磁治疗方法在临床上的应用。虽然已经有多个生物电磁效应机制被提出,如:自由基对理论、生物化学热力学模型、离子振荡模型等,但这些理论仍然在遭受质疑,没有被证实。生命系统的复杂性以及生物学和物理学之间的巨大鸿沟,限制了对磁接收机理的研究进展。生物电磁效应机制研究的突破有赖于生物物理学和相关技术的发展。存在许多不能成功复现甚至相互冲突的实验结果,这是生物电磁学领域一个非常突出的问题。通过文献调研发现,虽然方向性是电磁场等矢量场的一个重要特征,非常多的研究却忽视了电磁场方向性对生物电磁效应的影响。本文以细胞内ATP水平为检测指标,考察了竖直、水平以及倾斜方向电磁场的影响。实验结果证实了电磁场的生物效应具有方向性。这为早期互相冲突研究文献的校验以及未来生物电磁效应研究实验的开展提供了非常有价值的指导。在电磁治疗中,选择合适的电磁场参数（包括频率、强度、波形等）是非常关键的一步。然而,在缺乏明确生物电磁效应机制的情况下,大多数研究只能随意地选取这些参数,这导致很差的治疗效果以及很长的实验周期。在这种情况下,本文提出使用仿生学方法来指导疾病治疗用电磁场参数的选择。仿生学是一种从自然界获取灵感,用于指导人类生活和工业生产的方法学。人类在一个充满了电磁场（如地球磁场、舒曼共振等）的自然环境中生存、进化,已经适应了地球上的自然电磁环境。有研究表明,自然电磁场有利于人体健康,甚至能够辅助某些疾病的治疗。因此,本文提倡模拟自然电磁场的参数来设计人造电磁场,用于疾病的治疗,并把这种模拟自然电磁场设计的人造电磁场叫做仿生电磁场（Bioinspired electromagnetic field,BIEMF）。本文选择了Magna Field（?）作为试验研究的BIEMF发射仪器。其可以发射强度与地球磁场相当,频率与大多数自然电磁场相近的仿生电磁场。首先,利用结晶紫染色实验,证实了0.5 Hz BIEMF具有抑制宫颈癌细胞（Hela）增殖的能力。当细胞密度增高到一定程度,BIEMF对Hela细胞的增殖抑制作用消失。对BIEMF抑制Hela细胞增殖机理的初步研究发现BIEMF似乎通过干扰细胞有丝分裂及触发细胞凋亡抑制Hela细胞的增殖。然后,通过细胞实验,发现在高葡萄糖浓度培养条件下,10 Hz BIEMF能够促进肝癌细胞对葡萄糖的吸收,而不影响细胞的数目。并且,BIEMF结合降糖药物联合使用,比BIEMF单独使用具有更加显着的促葡萄糖吸收效果。这表明10 Hz BIEMF具有治疗Ⅱ型糖尿病的潜力。通过以上细胞实验,本文验证了BIEMF确实具有治疗癌症及T2DM的潜力。这证实了仿生学方法应用于疾病治疗电磁场参数选择的可行性。为了将BIEMF更好地应用于临床治疗,本文设计了一款可穿戴的BIEMF发射端。在本文中BIEMF发射端被设计成了硬币大小的独立单元体,实际治疗时,多个发射端组合使用。经ANSYS Maxwell软件仿真计算,所设计扁平空心圆环状电磁场发射线圈的最佳尺寸为:厚度3 mm,内径4 mm,外径10 mm。相较于矩阵形排列的电磁场发射端,按照蜂窝状排列方式组合的发射端所发射的磁场强度更为均匀。最后,通过制作BIEMF发射端实物和搭建BIEMF发射系统,实际检测的磁场强度结果与仿真结果基本一致。论文的最后,为了研究BIEMF是否能够穿透各层人体组织到达靶组织或者靶器官,进行了理论及仿真研究。首先,利用Creo软件建立了人体上腹部及肝脏的三维模型,然后利用ANSYS Maxwell软件模拟了10 Hz BIEMF对人体腹部组织的穿透情况。经理论分析及ANSYS Maxwell软件仿真计算,所设计按照蜂窝状排列的扁平圆环状BIEMF发射端所发射的BIEMF能够顺利穿透人体腹壁各组织,并且在肝脏内形成了较为均匀的电磁场分布区域,实现了最初的设计要求,证明其具备作为可穿戴BIEMF治疗仪发射端的能力。
曹茂盛[3]（2021）在《脂肪间充质干细胞外泌体改善大鼠多囊卵巢综合征的分子机制》文中研究表明多囊卵巢综合征（Polycystic ovary syndrome,PCOS）是育龄妇女最常见的内分泌代谢紊乱疾病,在育龄妇女中发病率约为6%至10%之间。PCOS的临床表现具有多样性和异质性的特点,主要临床特征是慢性不排卵、月经稀发或闭经、卵巢超声检查下有多个囊性卵泡、高雄激素血症、不孕。除了生殖异常,PCOS患者经常观察到肥胖,伴有代偿性高胰岛素血症的胰岛素抵抗,血脂异常,2型糖尿病和心血管疾病风险增加的特性。在家畜中,卵泡囊肿是常见的繁殖障碍性疾病,直接造成母畜群繁殖力下降,其发病原因复杂,发病机制尚不清楚,缺乏有效的防治方法,因而成为家畜养殖业的重要瓶颈之一。随着脂肪间充质干细胞（Adipose-derived mesenchymal stem cells,AMSC）的发现,其在再生医学的研究也越来越多。许多临床前及临床研究发现,AMSC可用于治疗目前临床上一些复杂性疾病。AMSC可以分泌多种与代谢和免疫相关的细胞因子,参与机体代谢调节。同时,AMSC在提高雌性动物生殖中的应用越来越多,AMSC可以提高卵母细胞质量、促进颗粒细胞增殖,在恢复卵巢功能中发挥着重要作用。近年的研究发现,AMSC在组织和器官修复中也发挥着重要作用。AMSC分泌的外泌体（AMSC-EXO）可在多种组织器官的修复中发挥有效作用。然而,目前关于AMSC和AMSC-EXO在PCOS中的作用尚无报道。本研究构建PCOS大鼠模型,使用大鼠AMSC和AMSC-EXO对PCOS大鼠进行处理,从代谢水平、生育率水平、组织水平对其治疗效果进行评估,同时为了深入揭示AMSC-EXO治疗PCOS的分子机制,本实验使用miRNA丰度测序、RNAseq测序技术,将miRNA-m RNA进行联合分析,并使用大鼠肝细胞系（BRL-3A）进行体外验证。其主要研究内容及结果如下:1.PCOS大鼠模型构建本实验采用脱氢表雄酮（dehydroepiandrosterone,DHEA）方法构建PCOS大鼠模型。对照组:选取21日龄的雌性大鼠,将芝麻油注射到大鼠皮下（0.1mL/只）,连续注射23天;PCOS模型组:选取21日龄的雌性大鼠,将溶解在芝麻油中的DHEA（6mg/100g）注射到大鼠皮下（0.1mL/只）,连续皮下注射23天。结果:皮下注射DHEA处理后,对照组和PCOS模型组的体重没有显着差异、PCOS模型组出现葡萄糖耐受和胰岛素抵抗现象、PCOS模型组出现发情周期紊乱,PCOS模型组肝脏组织中出现脂肪变性,卵巢组织中囊状卵泡数目明显增加,黄体数目明显减少。以上这些数据表明使用DHEA成功构建PCOS大鼠模型,可以用于后续实验。2.大鼠脂肪间充质干细胞对PCOS大鼠的作用研究PCOS模型构建成功后,首先探究了脂肪间充质干细胞是否能够对DHEA诱导的PCOS大鼠模型有治疗作用。实验动物分3组,其中PCOS模型大鼠分为2组,分别是PCOS组和AMSC治疗组,第3组是正常大鼠对照组,每组12只。结果发现,AMSC治疗组在使用大鼠脂肪间充质干细胞治疗3周后,相对于PCOS组,从发情周期、葡萄糖耐受水平、胰岛素耐受水平以及产仔数水平方面都有显着性的改善（p<0.05）。除此之外,AMSC治疗组肝脏组织中没有出现脂肪变性现象,卵巢组织中囊状卵泡数目明显减少,黄体数目明显增加。ELISA检测显示,AMSC治疗组睾酮（T）水平下调（p<0.05）,脂联素水平上调（p=0.085）。3.大鼠脂肪间充质干细胞外泌体对PCOS大鼠的作用研究为了进一步探索大鼠脂肪间充质干细胞治疗PCOS大鼠的治疗机制,本实验提取了AMSC的外泌体（AMSC-EXO）。实验分3组:正常对照组、PCOS组和AMSC-EXO治疗组,每组12只。使用AMSC-EXO治疗PCOS大鼠3周后,在发情周期、葡萄糖耐受水平以及产仔数水平方面都有显着性的改善。除此之外,AMSC治疗组肝脏组织中没有出现脂肪变性现象,卵巢组织中囊状卵泡数目明显减少,黄体数目明显增加。ELISA检测显示,AMSC-EXO治疗组T水平显着下调（p<0.05）,脂联素水平上调（p=0.066）。同时观察到AMSC-EXO在SD大鼠体内主要分布位置是肝脏组织。4.大鼠脂肪间充质干细胞外泌体对大鼠肝细胞（BRL-3A）的作用研究为了进一步探索大鼠脂肪间充质干细胞外泌体治疗PCOS大鼠的治疗机制,本实验对AMSC-EXO进行miRNA丰度测序,结果发现miR-21-5p的丰度最高。同时,提取了对照组、PCOS组和AMSC-EXO治疗组肝脏的总RNA,通过RNAseq测序后,找到了68个差异基因,通过基因联合分析找到于miR-21-5p靶向的Btg2基因。为了验证miR-21-5p和Btg2基因之间的关系,使用大鼠肝细胞（BRL-3A）进行分子机制研究。结果发现,AMSC-EXO可以增强BRL-3A对葡萄糖的摄取能力,IRS/AKT磷酸化水平显着升高（p<0.05）;外源过表达miR-21-5p可以靶向Btg2基因增强BRL-3A对葡萄糖的摄取能力,AKT磷酸化水平显着升高（p<0.05）;内源性去除AMSC-EXO中miR-21-5p,靶向Btg2基因减弱BRL-3A对葡萄糖的摄取能力（p<0.05）,AKT磷酸化水平显着降低（p<0.05）。综上所述,本研究发现,使用DHEA可以成功构建PCOS大鼠模型。大鼠AMSC及其分泌的外泌体都可以改善PCOS大鼠模型出现的不育、发情周期紊乱、肝脏组织出现脂肪变性、卵巢组织多囊等症状的变化。但相对于AMSC,没有观察到AMSC-EXO改善PCOS大鼠出现的胰岛素抵抗现象。进一步研究发现,AMSC-EXO通过miR-21-5p靶向Btg2基因促进了肝细胞对葡萄糖的摄取能力。本研究为利用大鼠脂肪干细胞及其分泌的外泌体治疗PCOS提供了理论基础,为PCOS的治疗提供新的策略。
张景楠[4]（2021）在《α-Galcer不同的注射方式影响小鼠iNKT细胞及亚群变化的研究》文中认为目的组织器官中iNKT细胞不同亚群在同一器官不同疾病以及同一疾病不同阶段发挥着不同的作用,有效调控iNKT细胞不同亚群的激活,获取具有特定表型及功能的iNKT细胞及亚群,可为相关疾病的细胞治疗提供基础性的研究数据。方法6-8周龄C57BL/6雄性小鼠随机分组,分别进行α-Galcer腹腔、皮下注射、静脉注射。选取多个时间点动态观察并与健康组对比α-Galcer对小鼠不同器官iNKT细胞及亚群变化的影响,动态观察α-Galcer不同注射途径对小鼠iNKT细胞及亚群变化的影响。结果1、胸腺:与对照组相比,腹腔注射和皮下注射α-Galcer胸腺iNKT细胞频率明显降低,静脉注射α-Galcer胸腺iNKT细胞频率明显升高;三种注射方式均提高胸腺iNKT1亚群水平;腹腔注射和皮下注射α-Galcer胸腺iNKT2亚群降低,静脉注射α-Galcer胸腺iNKT2亚群2天达到高峰,随后围绕正常水平上下波动;腹腔注射α-Galcer胸腺iNKT17亚群6天、10天低于正常水平,8天高于正常水平,皮下注射和静脉注射α-Galcer胸腺iNKT17亚群均降低。2、脾脏:与对照组相比,腹腔注射α-Galcer脾脏iNKT频率明显升高,除8天外;皮下注射α-Galcer脾脏iNKT频率呈现先抑后扬趋势,其中6天降低至谷底;静脉注射α-Galcer脾脏iNKT频率全程降低;三种注射方式脾脏iNKT1亚群均明显低于正常水平,α-Galcer注射前期（2天、3天）脾脏iNKT2亚群均高于正常水平,脾脏iNKT17亚群均明显低于正常值（除静脉注射α-Galcer6天外）。3、肝脏:与对照组相比,腹腔注射α-Galcer肝脏iNKT频率在6天时出现高峰,其余均明显低于正常水平;皮下注射和静脉注射α-Galcer前期（2-3天）肝脏iNKT细胞频率均明显高于正常水平;三种注射方式肝脏iNKT1亚群均明显低于正常水平（除腹腔注射α-Galcer4天外）;腹腔注射α-Galcer后肝脏iNKT2亚群围绕正常水平上下波动,皮下注射α-Galcer提高肝脏iNKT2亚群,静脉注射α-Galcer前期（4天前）肝脏iNKT2亚群高于正常水平,2天达到高峰,后期降低;腹腔注射和静脉注射α-Galcer肝脏iNKT17亚群均明显低于正常水平（除腹腔注射α-Galcer4天外）,皮下注射α-Galcer肝脏iNKT17亚群高于正常水平。4、淋巴结:与对照组相比,腹腔注射α-Galcer前期（2天）淋巴结iNKT细胞总频率高于正常水平,皮下注射和静脉注射α-Galcer淋巴结iNKT频率均明显低于正常水平;三种注射方式淋巴结iNKT1和iNKT17亚群均明显低于正常水平,腹腔注射α-Galcer4d、10d后淋巴结iNKT2亚群高于正常水平,其余时间点均明显低于正常水平,静脉注射α-Galcer可提高淋巴结iNKT2亚群。5、肺:与对照组相比,腹腔注射α-Galcer肺iNKT频率前期（2天）高于正常水平,随后低于正常水平,皮下注射α-Galcer肺iNKT频率2天、3天高于正常水平,6天后低于正常水平,静脉注射α-Galcer肺iNKT频率全程降低;腹腔注射和皮下注射α-Galcer肺iNKT1亚群明显降低,静脉注射α-Galcer肺iNKT1亚群均明显升高（除6天外）,腹腔注射α-Galcer肺iNKT2亚群升高,皮下注射和静脉注射α-Galcer肺iNKT2亚群明显降低,腹腔注射和皮下注射α-Galcer肺iNKT17亚群均明显升高,皮下注射α-Galcer肺iNKT17亚群后期（4天后）高于正常水平。6、外周血血清细胞因子:α-Galcer注射2天后,与对照组相比,腹腔注射α-Galcer血清中IL-4水平明显升高,皮下和静脉注射α-Galcer血清中IL-4无明显变化,腹腔注射和静脉注射α-Galcer血清中IFN-γ水平明显升高,皮下注射α-Galcer血清中IFN-γ水平明显降低,三种注射方式血清中IL-17A水平均明显降低;α-Galcer注射6天后,与对照组相比,三种注射方式血清中IL-4均明显降低,腹腔注射α-Galcer后IFN-γ明显升高,皮下注射和静脉注射α-Galcer后IFN-γ明显降低,三种注射方式IL-17A均低于正常水平,以皮下注射α-Galcer变化更明显;α-Galcer注射8天后,与对照组相比,三种注射方式血清中IL-4均低于正常水平,以皮下注射更明显,三种注射方式血清中IFN-γ水平升高,IL-17A水平明显降低。结论1、同种注射方式对不同器官iNKT频率和亚群的影响存在差异;不同注射方式对相同器官iNKT频率和亚群的影响存在差异;不同注射方式对不同器官相同时间点iNKT频率及亚群存在差异。2、文献报道α-Galcer对胸腺iNKT影响甚微。但我们发现不同注射方式（尤其是静脉注射α-Galcer）对胸腺iNKT细胞频率和亚群均有影响,其机制值得进一步探讨。3、肝脏是iNKT细胞主要的定居场所,基于iNKT细胞的肝脏相关疾病治疗可以通过选择不同注射方式实现。4、三种注射方式均能增加肺脏iNKT17亚群频率,因此采用α-Galcer治疗要密切关注肺部可能出现的自身免疫病风险。5、α-Galcer注射引起血清中细胞因子变化,提示注射α-Galcer可影响机体整体免疫状态。
莫丽莎[5]（2021）在《温肺化纤汤通过AMPK/SIRT3通路干预氧化应激模型下LMSCs线粒体功能障碍及代谢失衡的机制研究》文中研究说明随着老龄化社会的到来,特发性纤维化（Idiopathic pulmonary fibrosis,IPF）的患者不断增加。现已证实,氧化应激诱导的细胞氧化/抗氧化失衡是促使肺纤维化形成及进展的关键,而且氧化应激导致的线粒体功能障碍、能量代谢（氧化磷酸化和有氧糖酵解）的改变均和IPF的发生密切相关。目前IPF尚无根治的办法。因此揭示其发病机制,开发更安全、有效的药物或治疗策略迫在眉睫。中医认为该病属于“肺痿”的范畴,基本病机为阳虚寒凝、痰滞血瘀,而肺阳虚是IPF病机的关键。温阳散寒、涤痰行瘀是治疗IPF的基本大法。依据国医大师洪广祥教授的“治肺不远温”学术思想,团队提出“全程温法治疗肺间质纤维化”的观点,并在经典名方——阳和汤的基础上创制了温肺化纤汤。经过近二十年的临床实践与观察,温肺化纤汤在治疗IPF的临床应用中取得了良好的效果。为了进一步阐明温肺化纤汤的作用机制,团队进行了大量的基础研究。在中医理论研究上,我们认为肺间充质干细胞（Lung mesenchymal stem cells,LMSCs）是肺中之阳,线粒体是能量代谢的中心,为“阳中之阳”。有氧糖酵解除了快速产生ATP为细胞提供能量外,还可以使营养物质转化为线粒体生物合成的前体。据此我们认为有氧糖酵解在功能上亦属于肺阳的一部分。温肺化纤汤可通过温肺之阳（线粒体及有氧糖酵解）从而起到治疗IPF的作用。在基础实验研究上,团队发现温肺化纤汤具有抗氧化的功效。中医重视整体观和辨证论治,中药复方蕴含多种物质基础从而具有多靶点、多途径的网络作用效应。因此,为了进一步深入了解温肺化纤汤的作用靶点,本研究采用过氧化氢（Hydrogen peroxide,H2O2）干预LMSCs建立氧化应激模型以模拟肺部微环境的改变,以期揭示温肺化纤汤治疗IPF的作用机制。目的以体外氧化应激模型下小鼠LMSCs为研究对象,AMPK/SIRT3通路为切入点,围绕线粒体功能和能量代谢两方面探讨温肺化纤汤对氧化应激模型下LMSCs的保护机制,为临床治疗IPF提供有效的理论支持。方法1.梯度密度离心法分离提取C57BL/6小鼠LMSCs。流式鉴定细胞的表面标志物,并进行成骨、成脂、成软骨的诱导分化实验。采用H2O2干预法建立LMSCs氧化应激损伤的模型,MTT法筛选温肺化纤汤的作用浓度;EDU法检测温肺化纤汤对LMSCs增殖的影响;酶标仪检测温肺化纤汤对H2O2诱导的LMSCs胞内超氧化物岐化酶（Superoxide dismutase,SOD）、丙二醛（Malondialdehyde,MDA）水平的影响。2.不同浓度的温肺化纤汤干预LMSCs 24小时后建立氧化应激模型,运用流式检测各组活性氧（Reactive oxygen species,ROS）的水平;荧光显微镜观察温肺化纤汤对H2O2诱导的LMSCs线粒体膜电位、线粒体数量、线粒体通透性转换孔（Mitochondrial permeability transition pore,m PTP）的影响;Seahorse XFe24检测温肺化纤汤对LMSCs氧消耗速率（Oxygen consumption rate,OCR）的保护效应;RT-PCR检测PGC-1?和SOD2的m RNA水平;Western blot检测AMPK、SIRT3、PGC-1?、SOD2的表达水平。沉默SIRT3 24小时后给予温肺化纤汤（400?g/ml）作用24小时再进行H2O2造模,流式检测各组ROS水平;Seahorse XFe24检测OCR的变化;Western blot检测AMPK/SIRT3及其通路蛋白的表达水平。温肺化纤汤（400?g/ml）联合AMPK激活剂（CC）或抑制剂（AICAR）干预LMSCs 24小时后进行H2O2造模,流式检测各组ROS水平;Seahorse XFe24检测各组的OCR是否发生变化;Western blot检测AMPK/SIRT3通路蛋白的表达情况。3.不同浓度的温肺化纤汤干预LMSCs 24小时后给与H2O2造模6小时,评估氧化应激模型下温肺化纤汤对LMSCs有氧糖酵解的影响。采用酶标仪检测该条件下的葡萄糖含量和乳酸水平;Seahorse XFe24检测细胞外酸化速率（Extracellular acidification rate,ECAR）;RT-PCR检测有氧糖酵解相关酶HK2、PKM2的m RNA水平;Western blot检测HK2、PKM2蛋白表达水平。沉默SIRT3表达后温肺化纤汤是否依旧能发挥保护效应,即在该条件下各组ECAR的情况及HK2、PKM2蛋白表达水平。温肺化纤汤（400?g/ml）联合AMPK激活剂（CC）或抑制剂（AICAR）干预LMSCs 24小时后进行H2O2造模,Seahorse XFe24检测各组ECAR情况,Western blot检测有氧糖酵解酶的表达水平。结果1.流式鉴定显示:LMSCs免疫表型特征为Sca-1、CD44、CD90、CD54和CD105阳性,CD11b、CD45、CD31阴性。进一步对LMSCs进行了多项分化诱导实验,证实了LMSCs能够在体外分化为成骨细胞、成软骨细胞、成脂肪细胞,符合MSCs的特征。EDU法显示:在25、100、400?g/ml浓度的温肺化纤汤干预下,体外培养的LMSCs可以实现增殖。为了进一步验证温肺化纤汤对细胞氧化应激损伤的保护作用,我们进行了胞内SOD、MDA的含量检测,结果显示:氧化损伤后LMSCs的SOD活性下降,MDA含量上升,25、100、400?g/ml温肺化纤汤均可增强SOD的活性（P<0.05）,下调MDA表达水平（P<0.05）。2.温肺化纤汤可下调H2O2诱导的LMSCs的胞内ROS水平（P<0.05）。荧光显微镜显示:温肺化纤汤可关闭LMSCs m PTP孔,并增强线粒体膜电位,增加线粒体的数量。温肺化纤汤可增强线粒体Basal OCR和ATP水平（P<0.05）。温肺化纤汤（25、100、400μg/ml）均可提升PGC-1?、SOD2逆转录表达水平（P<0.01）。温肺化纤汤（100、400μg/ml）均可明显提升SIRT3、PGC-1?、SOD2蛋白表达（P<0.05）,并抑制P-AMPK/APMK磷酸化水平（P<0.05）。沉默SIRT3表达后,LMSCs出现进一步的损伤,表现为ROS升高（P<0.05）;OCR进一步损伤但无明显统计学意义（P>0.05）;SIRT3、PGC-1?、SOD2蛋白水平则进一步下降（P<0.05）;但P-AMPK/AMPK无统计学意义（P>0.05）。与NC+WFHX组相比,SIRT3 si RNA+温肺化纤汤干预后线粒体Basal OCR水平有所提升,但无统计学意义（P>0.05）;同时降低ROS的水平（P<0.05）。SIRT3的敲低进一步降低了SIRT3 si RNA+温肺化纤汤组的SIRT3、PGC-1?、SOD2的蛋白表达（P<0.05）,P-AMPK/AMPK部分上调,但无统计学意义（P>0.05）。与模型组对比,温肺化纤汤（400?g/ml）联合AMPK抑制剂（CC）干预后可下调ROS表达（P<0.05）,增强线粒体Basal OCR和ATP水平（P<0.05）,促进SIRT3、PGC-1?、SOD2蛋白的表达（P<0.05）,减少AMPK的磷酸化水平（P<0.05）。加入AMPK激活剂AICAR干预后,细胞的氧化应激损伤进一步加重。与模型组对比,AICAR+温肺化纤汤（400?g/ml）可清除ROS（P<0.05）,上调线粒体的Basal OCR、ATP（P<0.05）,下调了P-AMPK/AMPK的水平（P<0.05）,并促进PGC-1?蛋白表达（P<0.01）,SIRT3和SOD2则无统计学意义（P>0.05）。3.LMSCs氧化应激损伤后导致葡萄糖摄取量和乳酸含量降低（P<0.01）,有氧糖酵解（Glycolysis ECAR）功能损伤（P<0.01）,HK2和PKM2的逆转录水平和蛋白表达均下降（P均<0.05）,温肺化纤汤（100、400?g/ml）均可上改善述指标（P<0.05）。沉默SIRT3的表达后,Glycolysis ECAR功能、HK2及PKM2的表达均进一步下降（P<0.05）。与NC+WFHX组相比,温肺化纤汤（400?g/ml）+SIRT3 si RNA可改善Glycolysis ECAR功能（P<0.05）,并促进HK2、PKM2的蛋白表达（P<0.05）。与模型组相比,CC联合温肺化纤汤（400?g/ml）增强了细胞的Glycolysis ECAR水平（P<0.01）,促进了HK2、PKM2的蛋白表达水平（P<0.05）;AICAR则进一步减弱有氧糖酵解的功能,AICAR联合温肺化纤汤（400?g/ml）增强了Glycolysis ECAR水平（P<0.01）,但对HK2、PKM2无明显促进作用（P>0.05）。结论（1）温肺化纤汤可通过温肺中之阳（LMSCs）,提升阳气（线粒体和有氧糖酵解）从而达到“扶正祛邪”的目的。（2）温肺化纤汤对H2O2诱导的LMSCs细胞损伤具有保护作用。（3）温肺化纤汤可通过AMPK/SIRT3途径减轻H2O2诱导的LMSCs线粒体功能障碍和代谢失衡。（4）温肺化纤汤可靶向AMPK/SIRT3信号通路增强LMSCs的有氧糖酵解功能,进而减轻氧化应激的损伤。
王高峰[6]（2021）在《皮肤微生物促进创伤后皮肤与毛囊再生的研究》文中研究表明背景和目的Wound induce hair Neogenesis（WIHN）.是哺乳动物罕见的创伤后皮肤与毛囊再生模型。在小鼠或兔子背部大面积的全层皮肤创伤及伤口愈合后,瘢痕中央会再生出具有完整结构与毛发周期的毛囊,而非只有瘢痕组织。这些毛囊会诱导周围产生脂肪细胞,使得伤口中央的皮肤恢复正常皮肤的结构与功能。研究此毛囊再生模型可以给人类皮肤再生医学带来新的见解。伤口愈合中重要的参与者:皮肤微生物对于皮肤再生的影响仍然缺乏研究。本课题通过不同梯度的皮肤微生物水平来研究其对皮肤与毛囊再生的影响,并揭示其内在的生物学机制,为创伤与秃发病人带来新的治疗方法与希望。方法1.皮肤微生物对于小鼠创伤后完全性皮肤与毛囊再生的影响使用不同皮肤微生物梯度的小鼠:①无菌（GF）小鼠、②无特定病原微生物（SPF）小鼠、③皮肤局部使用抗生素的小鼠、④外源性加入细菌小鼠的损伤后再生模型,来检测微生物对于皮肤再生的影响。使用16SrDNA测序检测小鼠皮肤微生物的α多样性,β多样性以及细菌的种属分类,筛选出诱导再生能力最强的菌群。2.皮肤微生物对于小鼠创伤后皮肤免疫微环境的影响使用流式细胞术检测上述不同皮肤微生物梯度小鼠伤口处免疫细胞特别是对于皮肤再生关键的YδT细胞,M2巨噬细胞浸润情况。检测关键的免疫信号Myd88,IL17来确定微生物是如何通过免疫微环境调控皮肤和毛囊再生的。3.皮肤微生物促进小鼠创伤后完全性皮肤与毛囊再生的生物学机制筛选微生物相关信号受体IL1R、IL36R、TLR2、TLR3的基因敲除鼠来确定皮肤微生物发挥促进再生的关键受体。筛选MyD88,IL-1α,IL-1β,IL17A基因敲除小鼠来确定促进再生的关键上下游信号。4.皮肤微生物对于人皮肤愈合的影响在6名志愿者的左右侧腘窝处皮肤创造小型伤口,并在一侧使用抗生素软膏另一侧使用凡士林进行对照。检测两侧伤口的愈合速度,微生物变化情况以及干细胞和再生信号的表达。结果1.皮肤微生物对于小鼠创伤后完全性皮肤与毛囊再生的影响与SPF小鼠对比,无菌小鼠的毛囊再生数量最少（倍数=-17.9,n=13,p=1.9×10-6）,皮肤局部使用抗生素小鼠的毛囊再生数量次少（倍数=-7.9,n=10,p=8.4×10-5）,外源性加入金黄色葡萄球菌小鼠的毛囊再生数量最多（倍数=3.3,n=12,p=7.5×10-5）。2.皮肤微生物对于小鼠创伤后皮肤免疫微环境的影响皮肤微生物的丰度与多样性的增加会增加伤口处γδT细胞与M2巨噬细胞的浸润,诱导免疫相关基因表达增高。Myd88和IL17信号能促进微生物诱导的免疫细胞的浸润但IL17信号对皮肤再生并不重要。3.皮肤微生物促进小鼠创伤后完全性皮肤与毛囊再生的生物学机制角质细胞依赖的IL1R基因敲除鼠,IL-1β基因敲除鼠和Myd88基因敲除鼠皮肤与毛囊再生能力减弱,且不能被外源性细菌促进再生。4.皮肤微生物对于人皮肤愈合的影响无污染伤口使用抗生素后愈合速度减慢,再生相关信号表达降低。结论1.皮肤微生物对于小鼠完全性皮肤和毛发再生有促进作用。2.皮肤微生物通过Myd88信号促进免疫微环境免疫细胞浸润。3.皮肤微生物通过IL-1β,角质细胞依赖的IL1R-Myd88信号促进再生。4.对于小的非感染伤口,常规性使用抗生素减缓伤口愈合速度。
韩月霞[7]（2021）在《脂肪源间充质干细胞体外对aGVHD患者T细胞亚群的影响及机制初探》文中提出目的:探讨脂肪源间充质干细胞（Adipose derived stem cells,ADSCs）对急性移植物抗宿主病（graft-versus-host disease,aGVHD）患者T细胞的功能影响及其发生机制。方法:分离培养健康人体的脂肪源干细胞,观察细胞形态,培养至第三代,应用流式细胞术进行表面标志物鉴定,同时进行成脂分化及成骨分化鉴定。选取于新疆医科大学第一附属医院血液病中心行造血干细胞移植的aGVHD患者,以健康体检者作为对照组,分离外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMC）,加入植物血凝素刺激PBMC增殖,与ADSCs共培养3天,PBMC:ADSCs=10:1,分为3组:（1）aGVHD患者的PBMC与ADSCs共培养,（2）健康体检者的PBMC与ADSCs共培养,（3）PBMC单独培养。共培养组应用PCR技术检测Th1、Th2亚群特异性转录因子表达水平及HES-1基因表达变化,应用流式细胞术分别检测三组的Th1、Th2亚群变化。结果:（1）吸脂术获取的ADSCs具有多向分化能力,表达CD29、CD44、CD105,而CD31、CD45,CD34弱表达。（2）流式细胞术检测aGVHD患者Th1亚群在CD4+T细胞中所占的比例较对照组高,差异有统计学意义。与ADSCs共培养后Th1亚群有降低趋势,Th2亚群有升高趋势,但无统计学意义。（3）与ADSC共培养后Th1转录因子表达减少,Th2转录因子表达升高,HES-1表达水平降低。结论:aGVHD患者存在Th亚群失衡,主要表现为Th1偏移,ADSCs可能通过减少Th1细胞分化、促进Th2细胞分化,下调Notch信号通路的表达从而纠正免疫失衡。
赵吉玲,余国龙,彭漪,肖轶,彭智勇[8]（2021）在《间充质干细胞调控炎性巨噬细胞极化的机制研究进展》文中研究指明间充质干细胞（MSCs）是具有多向分化潜能的干/祖细胞,广泛应用于再生医学试验过程中,其免疫调节和抗纤维化活性逐渐受到关注。在炎症反应中,移植的MSCs介导M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞转化,进而调控炎症反应、维持组织稳态、促进炎症反应组织修复和再生。MSCs通过白细胞介素-10、诱导型一氧化氮合酶、吲哚胺2,3-双加氧酶、前列腺素E2等途径,以旁分泌形式影响巨噬细胞极化;此外,转化生长因子-β1、肿瘤坏死因子-α刺激基因6、调节性T细胞、外泌体等途径亦参与巨噬细胞极化。
黄洁[9]（2020）在《骨髓间充质干细胞示踪及其对小鼠肺纤维化治疗作用的机制研究》文中研究指明研究背景矽肺是因长期大量吸入游离二氧化硅（Si O2）粉尘引起的以肺组织结节性纤维化改变为主要病理特征的全身性疾病。矽肺早期起病隐匿,中晚期进展迅速,目前尚无特效治疗方法。间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞。来源于骨髓的间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）具有获取方法简便,体外扩增培养稳定,免疫原性低等特点,成为适于多种疾病治疗的理想工程细胞。现有研究证实BMSCs能趋化归巢至损伤的肺部并通过分化参与组织修复,同时也可调节和平衡肺组织损伤伴随的局部和全身炎症反应和免疫紊乱。但目前对于BMSCs移植治疗肺纤维化疾病的最佳条件仍然未知。如何选择最佳移植时机;如何确定最佳移植数量和方式;外源输入的BMSCs在体内迁移、归巢、定植、分布及细胞转变情况如何。这些问题的阐明将协助我们制定和评估最佳的细胞治疗方案,帮助我们更深入探索干细胞治疗的具体机制,推进干细胞在肺纤维化治疗方向的临床转化。因此,本课题围绕BMSCs示踪及其在矽肺纤维化治疗中的应用展开,开发出一种具有良好生物相容性以及双模态成像能力的纳米材料,用于移植BMSCs的标记和体内无创、长时程示踪,并综合活体成像数据及组织学结果分析BMSCs治疗矽肺纤维化的可能机制,为干细胞治疗肺纤维化疾病提供理论基础和示踪方法。第一部分CT/NIRF双模态纳米示踪剂制备及BMSCs体外标记目标:制备一种适用于电子计算机扫描（Computed Tomography,CT）和近红外荧光（Near-infrared fluorescence,NIRF）双模态成像的金基纳米示踪剂,完成BMSCs的体外标记并评价该示踪剂体外标记对BMSCs生物学功能的影响。方法:以牛血清白蛋白（Bovine serum albumin,BSA）为模板还原氯金酸制备金纳米颗粒,通过静电吸附修饰以近红外染料吲哚菁绿（Indocyanine green,ICG）,最后包覆阳离子聚合物多聚赖氨酸（Poly-L-lysine,PLL）制备获得适用于双模态显像的纳米示踪剂AA@ICG@PLL。使用透射电子显微镜、动态光散射仪、紫外分光光度计检测该纳米粒的形貌、粒径大小、表面电位与ICG负载量;采用Micro-CT以及近红外荧光成像仪观察纳米示踪剂的体外成像能力;扩增培养人源BMSCs,将制备获得的纳米示踪剂AA@ICG@PLL与BMSCs共孵育进行细胞标记;通过影像学检查、共聚焦显微镜观察、流式细胞术检测、电感耦合等离子体-质谱法（Inductively coupled plasma mass spectrometry,ICP-MS）确定AA@ICG@PLL对BMSCs的最佳标记条件以及标记效率;通过CCK8、成骨诱导分化、成脂诱导分化实验检测AA@ICG@PLL标记对BMSCs生物学功能的影响。结果:1)制备合成的AA@ICG@PLL纳米示踪剂粒径分布均一,溶液稳定性良好,在保留近红外荧光成像特性的同时显示出相较于传统碘基造影剂更强的CT成像对比度;2)使用200μg/m L Au含量的AA@ICG@PLL与BMSCs共孵育24h在不影响细胞活力情况下可达到最佳标记效率;3)标记后的BMSCs迁移、增殖、分化功能正常,具备良好的CT和近红外体外成像效果。结论:本节研究制备的AA@ICG@PLL是一种具备良好生物安全性和优越成像能力的双模态纳米示踪剂。第二部分基于示踪剂探讨BMSCs在矽肺小鼠体内命运目标:探讨AA@ICG@PLL标记的BMSCs在矽肺小鼠体内长时程示踪的真实性、可靠性以及安全性。方法:单次Si O2暴露法建立小鼠矽肺模型,通过气管滴注将AA@ICG@PLL标记的BMSCs移植到造模后的小鼠肺部;使用Micro-CT和NIRF成像系统监测标记后的BMSCs在肺内分布情况及存留时间;肺组织切片荧光染色验证AA@ICG@PLL标记的BMSCs在体内示踪的真实性;观察记录细胞移植治疗后小鼠的生存状态、体重变化以及各主要脏器病理学改变从而评价AA@ICG@PLL标记的BMSCs体内移植的安全性。结果:1)通过Micro-CT和NIRF双模态成像可以完成对AA@ICG@PLL标记的BMSCs在矽肺模型小鼠肺内至少21天活体示踪;2)肺组织切片免疫荧光染色观察到纳米示踪剂中的ICG荧光与Di O标记的BMSCs存在共定位,证明AA@ICG@PLL标记的BMSCs在肺内示踪的真实性;3)标记后的BMSCs移植结论:AA@ICG@PLL标记的BMSCs移植安全可靠,通过双模态成像技术可对标记后的BMSCs进行至少21天的小鼠活体示踪定位。第三部分BMSCs移植对矽肺纤维化治疗作用及机制探讨目标:结合活体成像数据及组织学检查结果,探究BMSCs移植对小鼠矽肺纤维化的治疗作用并探究其可能的治疗机制。方法:通过肺部Micro-CT扫描评价BMSCs治疗后小鼠肺部纤维化改善情况;HE染色和天狼猩红染色进行肺组织病理学观察;酶联免疫吸附实验（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）测定小鼠肺泡灌洗液中IL6、TNFα、CXCL2蛋白浓度;实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR,RT-PCR）检测IL6、TNFα、CXCL2 m RNA表达情况;收集小鼠外周血进行整体水平羟脯氨酸含量测定;使用THP-1单核细胞系诱导的巨噬细胞建立Si O2刺激引起的巨噬细胞活化离体模型;收集BMSCs条件培养基（BMSCs conditioned medium,BMSC-CM）处理活化后的巨噬细胞,使用蛋白质印迹、细胞免疫荧光染色技术探究BMSCCM对巨噬细胞活化的影响;ELISA检测BMSC-CM中s TNFR1的含量;通过s TNFR1中和性抗体以及si RNA干扰技术下调BMSC-CM中s TNFR1的含量,进一步研究BMSCs分泌的s TNFR1在抑制巨噬细胞活化中的作用。结果:1)BMSCs移植治疗能够明显下调矽肺小鼠肺部炎症、改善纤维化程度;2)BMSCs治疗能够抑制Si O2诱导的巨噬细胞活化;3)BMSCs分泌s TNFR1经旁分泌机制部分抑制Si O2引起的M1型巨噬细胞活化。结论:BMSCs分泌s TNFR1经旁分泌机制抑制Si O2诱导的巨噬细胞活化,从而发挥矽肺纤维化治疗作用。第四部分锌指蛋白ZC3H4是BMSCs治疗矽肺的新型潜在靶点目标:基于前期工作证明ZC3H4参与巨噬细胞活化进程,探索ZC3H4影响巨噬细胞活化的具体机制,及BMSCs以其为治疗靶点的可行性。方法:在整体和离体水平检测Si O2刺激对肺泡巨噬细胞中ZC3H4表达的影响;使用CRISPR/Cas9技术特异性敲减肺泡巨噬细胞中ZC3H4表达,验证ZC3H4与巨噬细胞活化的关系;通过细胞划痕实验检测活化的巨噬细胞对下游成纤维细胞迁移能力的调控;结合药理学手段和分子生物学技术探索ZC3H4对巨噬细胞活化的具体影响机制;从整体和离体水平观察BMSCs治疗对巨噬细胞中ZC3H4表达的影响。结果:1)SiO2刺激可引起肺泡巨噬细胞活化并伴随ZC3H4表达升高;2)ZC3H4参与调节Si O2诱导巨噬细胞活化;3)ZC3H4通过内质网应激途径调节巨噬细胞活化;4)BMSCs移植可以下调巨噬细胞中ZC3H4表达。结论:BMSCs经ZC3H4途径阻断巨噬细胞活化,延缓肺纤维化进程,提示ZC3H4是BMSCs治疗矽肺的潜在作用靶点。
姚智华,彭敏,魏通坤,孔超,常东方[10]（2020）在《自体小柱形复合皮散布式种植治疗背部深度烧伤1例报道》文中指出目的探讨自体小柱形复合皮散布式种植治疗1例背部深度烧伤患者的临床效果。方法局部麻醉下在背部深度烧伤创面以2cm间距散布式环形钻孔,去除孔内坏死组织形成皮坑,在坑内种植2mm直径的自体小柱形复合皮,观察创面愈合情况。结果患者背部深Ⅱ度烧伤创面种植的自体小柱形复合皮全部存活,换药44d愈合;背部Ⅲ度烧伤创面种植的自体小柱形复合皮小部分存活,换药60d愈合。结论中小面积的深Ⅱ度烧伤创面可以采用自体小柱形复合皮散布式种植的方式修复,Ⅲ度烧伤创面采用自体小柱形复合皮散布式种植效果不佳。
二、带脂肪皮肤移植的实验研究与临床应用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、带脂肪皮肤移植的实验研究与临床应用（论文提纲范文）
（1）小鼠羊水间充质干细胞的分离、培养及鉴定（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物与试剂 |
| 1.2 AF-MSC分离与培养 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.3.1 AF-MSC生长曲线的绘制 |
| 1.3.2 AF-MSC表面标志物的鉴定 |
| 1.3.3 AF-MSC三系分化能力的检测 |
| 1.3.4 冻存AF-MSC的活力检测 |
| 1.4 研究内容 |
| 1.5 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 AF-MSC的形态学观察 |
| 2.2 AF-MSC的增殖特点 |
| 2.3 AF-MSC表面标志物检测 |
| 2.4 AF-MSC的三系分化 |
| 2.5 冻存AF-MSC复苏后的活力 |
| 3 讨论 |
（2）仿生电磁场在癌症及糖尿病治疗中的应用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.1.1 癌症治疗现状 |
| 1.1.2 糖尿病治疗现状 |
| 1.2 生物电磁学研究现状 |
| 1.2.1 生物电磁效应 |
| 1.2.2 生物电磁效应机制 |
| 1.2.3 电磁治疗 |
| 1.3 本文研究内容及意义 |
| 1.3.1 本文研究内容 |
| 1.3.2 本文研究意义 |
| 第2章 BIEMF及生物电磁效应方向性的研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 自然电磁场及仿生电磁场 |
| 2.2.1 地球磁场 |
| 2.2.2 舒曼共振 |
| 2.2.3 细胞脉动 |
| 2.2.4 脑电波 |
| 2.2.5 仿生电磁场(BIEMF) |
| 2.3 BIEMF发射仪器的选择与电磁场的表征 |
| 2.3.1 BIEMF发射仪器介绍 |
| 2.3.2 磁场检测系统的介绍 |
| 2.3.3 二氧化碳培养箱内磁场强度及方向测量结果 |
| 2.4 不同方向BIEMF对细胞ATP合成的影响 |
| 2.4.1 主要试剂及仪器 |
| 2.4.2 细胞培养 |
| 2.4.3 ATP检测实验 |
| 2.4.4 统计学分析 |
| 2.4.5 ATP检测实验结果 |
| 2.5 本章小结 |
| 第3章 BIEMF对Hela细胞增殖抑制作用的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 BIEMF对体外培养Hela细胞增殖的影响 |
| 3.2.1 主要试剂及仪器 |
| 3.2.2 细胞培养 |
| 3.2.3 结晶紫染色实验 |
| 3.2.4 统计学分析 |
| 3.2.5 BIEMF对不同浓度Hela细胞增殖抑制作用 |
| 3.2.6 BIEMF对 Hela细胞增殖抑制作用密度依赖性验证试验 |
| 3.3 BIEMF抑制Hela细胞增殖机理初步探究 |
| 3.3.1 主要试剂及仪器 |
| 3.3.2 细胞培养 |
| 3.3.3 细胞形态观察 |
| 3.3.4 DAPI染色实验 |
| 3.3.5 细胞有丝分裂染色实验 |
| 3.4 本章小结 |
| 第4章 BIEMF糖尿病治疗作用的研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 BIEMF对体外培养HepG2细胞葡萄糖消耗的影响 |
| 4.2.1 主要试剂及仪器 |
| 4.2.2 细胞培养 |
| 4.2.3 葡萄糖消耗检测实验 |
| 4.2.4 统计学分析 |
| 4.2.5 葡萄糖消耗检测结果 |
| 4.3 BIEMF对Beta-TC-6细胞胰岛素分泌的影响 |
| 4.3.1 主要试剂及仪器 |
| 4.3.2 细胞培养 |
| 4.3.3 葡萄糖刺激胰岛素分泌实验 |
| 4.3.4 统计学分析 |
| 4.3.5 胰岛素检测实验结果 |
| 4.4 本章小结 |
| 第5章 可穿戴BIEMF治疗仪发射端的设计与制作 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 BIEMF发射端的设计 |
| 5.2.1 单个BIEMF发射端的设计 |
| 5.2.2 BIEMF发射端组合方式的设计 |
| 5.3 BIEMF发射端的仿真 |
| 5.3.1 ANSYS Maxwell软件简介 |
| 5.3.2 有限元仿真的实现 |
| 5.3.3 仿真结果分析 |
| 5.4 BIEMF发射端的制作与检测 |
| 5.4.1 主要材料及仪器 |
| 5.4.2 BIEMF发射端的制作 |
| 5.4.3 BIEMF发射系统的搭建 |
| 5.4.4 BIEMF发射端的磁场检测 |
| 5.5 本章小结 |
| 第6章 BIEMF人体组织穿透能力的研究 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 电磁场在生物组织中衰减的理论分析 |
| 6.2.1 生物组织的电磁特性 |
| 6.2.2 电磁场在各组织中的衰减量计算 |
| 6.3 人体腹部及肝脏三维建模 |
| 6.3.1 PTC Creo软件简介 |
| 6.3.2 人体腹部及肝脏解剖学结构分析 |
| 6.3.3 人体腹部及肝脏三维模型创建 |
| 6.4 有限元仿真的实现 |
| 6.4.1 三维模型导入及线圈排布 |
| 6.4.2 设置各组织电磁特性参数 |
| 6.4.3 网格划分及求解设置 |
| 6.4.4 仿真结果分析 |
| 6.5 本章小结 |
| 第7章 结论与展望 |
| 7.1 结论 |
| 7.2 本文创新点 |
| 7.3 展望 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间取得的科研成果 |
| 致谢 |
（3）脂肪间充质干细胞外泌体改善大鼠多囊卵巢综合征的分子机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 绪论 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第1章 脂肪间充质干细胞 |
| 1.1 脂肪间充质干细胞的发现 |
| 1.2 脂肪间充质干细胞的作用 |
| 1.3 脂肪间充质干细胞与卵巢疾病 |
| 第2章 脂肪间充质干细胞外泌体的功能 |
| 2.1 外泌体的概述 |
| 2.2 间充质干细胞外泌体 |
| 2.3 脂肪间充质干细胞外泌体的应用 |
| 第3章 miRNA介导的干细胞外泌体功能 |
| 3.1 miRNA的概念 |
| 3.2 miRNA介导的干细胞外泌体功能应用 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第1章 DHEA构建多囊卵巢综合征大鼠模型 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 第2章 大鼠脂肪间充质干细胞对PCOS大鼠的作用研究 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第3章 大鼠脂肪间充质干细胞外泌体对PCOS大鼠的作用研究 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第4章 大鼠脂肪间充质干细胞外泌体中miR-21-5p通过靶向Btg2促进肝脏代谢 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 导师简介 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（4）α-Galcer不同的注射方式影响小鼠iNKT细胞及亚群变化的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 研究问题的提出 |
| 1.2 研究的目的与意义 |
| 1.3 国内外研究综述 |
| 1.3.1 新型免疫调节细胞-iNKT细胞 |
| 1.3.2 iNKT细胞的发育分化过程 |
| 1.3.3 iNKT细胞的组织分布特异性 |
| 1.3.4 iNKT细胞在不同疾病中的作用 |
| 1.3.5 iNKT细胞在疫苗方面的研究进展 |
| 1.3.6 α-Galcer(α-半乳糖苷神经酰胺)-iNKT细胞特异性激活剂 |
| 1.4 研究思路与方法 |
| 1.5 主要研究内容 |
| 1.6 创新点 |
| 第二章 实验研究 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 主要试剂的配制 |
| 2.2.2 实验动物分组及模型构建 |
| 2.2.3 小鼠外周血的获取 |
| 2.2.4 小鼠胸腺、脾脏、肝脏、淋巴结、肺中淋巴细胞的获取 |
| 2.2.5 小鼠胸腺、脾脏、肝脏、淋巴结、肺淋巴细胞中iNKT频率的检测 |
| 2.2.6 小鼠胸腺、脾脏、肝脏、淋巴结、肺淋巴细胞中iNKT亚群的检测 |
| 2.2.7 小鼠外周血血清IL-4、IFN-γ、IL-17A细胞因子的检测 |
| 2.2.8 统计学处理 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 不同注射方式引起小鼠胸腺iNKT细胞频率及亚群变化 |
| 2.3.2 腹腔注射和皮下注射α-Galcer前期均能提高脾脏 iNKT细胞数量,静脉注射α-Galcer全程降低脾脏 iNKT频率 |
| 2.3.3 皮下注射和静脉注射α-Galcer在一定时间内能够提高肝脏iNKT细胞数量 |
| 2.3.4 三种注射方式均降低腹股沟淋巴结iNKT细胞频率 |
| 2.3.5 腹腔注射和皮下注射在一定时间内能提高肺iNKT细胞数量,静脉注射全程降低肺iNKT细胞数量 |
| 2.3.6 不同注射方式对小鼠外周血IL-4、IFN-γ、IL-17A的影响 |
| 第三章 讨论 |
| 第四章 结论 |
| 参考文献 |
| 附表 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
（5）温肺化纤汤通过AMPK/SIRT3通路干预氧化应激模型下LMSCs线粒体功能障碍及代谢失衡的机制研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 注释表 |
| 引言 |
| 第一章 理论研究 |
| 第一节 肺阳虚理论在特发性纤维化中的运用 |
| 1 探源流,问古今,言肺阳虚 |
| 2 学经典,重实践,阐释病因 |
| 3 辨虚实,拨清源,倡导温法 |
| 4 察病因,用温法,组方遣药 |
| 第二节 特发性肺纤维化的发病机制 |
| 1 氧化应激是IPF的致病要素 |
| 2 细胞能量代谢的方式 |
| 3 氧化应激导致线粒体功能障碍 |
| 4 线粒体与细胞代谢的双向调控 |
| 5 线粒体调控能量代谢抗氧化的机制 |
| 6 间充质干细胞在IPF中的作用 |
| 第三节 研究目的和意义 |
| 第二章 实验研究 |
| 第一节 温肺化纤汤对H_2O_2诱导的LMSCs的保护作用 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 第二节 温肺化纤汤干预LMSCs的线粒体氧化应激损伤的效应及机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 第三节 温肺化纤汤对LMSCs有氧糖酵解的影响及其机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 第三章 结论与创新 |
| 第四章 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 答辩委员会名单 |
| 作者简介 |
（6）皮肤微生物促进创伤后皮肤与毛囊再生的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 皮肤微生物对于小鼠创伤后完全性皮肤与毛囊再生的影响 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二章 皮肤微生物对于小鼠创伤后皮肤免疫微环境的影响 |
| 引言 |
| 材料及方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三章 皮肤微生物促进小鼠创伤后完全性皮肤与毛囊再生的生物学机制 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第四章 皮肤微生物对于人皮肤愈合的影响 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 中英文缩略词对照表 |
| 攻读博士学位期间的成果 |
| 致谢 |
（7）脂肪源间充质干细胞体外对aGVHD患者T细胞亚群的影响及机制初探（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 研究内容与方法 |
| 1 研究对象 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 纳入标准 |
| 1.3 排除标准 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验方法 |
| 4 技术路线 |
| 5 统计学处理 |
| 结果 |
| 1.ADSC的生物学特性 |
| 2.流式细胞术检测Th亚群 |
| 3.共培养体系中PBMC增殖情况 |
| 4.患者的CD4+T细胞/CD8+T细胞比值 |
| 讨论 |
| 1.aGVHD的发病机制及治疗 |
| 2.间充质干细胞与aGVHD |
| 3.Notch信号通路与aGVHD |
| 小结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 脂肪间充质干细胞对不同免疫细胞的调节作用 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
| 新疆医科大学硕士研究生学位论文导师评阅表 |
（8）间充质干细胞调控炎性巨噬细胞极化的机制研究进展（论文提纲范文）
| 1 MSCs对巨噬细胞介导的炎症调节效应 |
| 1.1 炎症反应与M1/M2型巨噬细胞 |
| 1.2 炎症区域MSCs双重效应 |
| 1.3 MSCs介导单核/巨噬细胞表型转化 |
| 2 MSCs对巨噬细胞亚型转化机制及相关通路 |
| 2.1 细胞因子途径 |
| 2.1.1 TGF-β1及其相关通路 |
| 2.1.2 TSG-6及其相关通路 |
| 2.2 Treg细胞途径 |
| 3 小结 |
（9）骨髓间充质干细胞示踪及其对小鼠肺纤维化治疗作用的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩写词表 |
| 前言 |
| 文献综述(一) 骨髓间充质干细胞与矽肺纤维化的治疗研究进展 |
| 文献综述(二) 示踪技术在干细胞移植治疗应用的研究进展 |
| 主要实验仪器与试剂 |
| 实验部分 |
| 第一章 CT/NIRF双模态纳米示踪剂制备及BMSCs标记 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.3.1 AA@ICG@PLL纳米示踪剂合成与表征 |
| 1.3.2 AA@ICG@PLL纳米示踪剂的CT与NIRF成像能力 |
| 1.3.3 AA@ICG@PLL标记BMSCs最佳浓度、时间探索 |
| 1.3.4 AA@ICG@PLL标记BMSCs后体外成像 |
| 1.3.5 AA@ICG@PLL标记后的BMSCs生物学功能评价 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 结论 |
| 第二章 基于示踪剂探讨BMSCs在矽肺小鼠体内命运 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 小鼠矽肺模型建立 |
| 2.3.2 Micro-CT对 AA@ICG@PLL标记的BMSCs移植后体内示踪 |
| 2.3.3 NIRF对 AA@ICG@PLL标记的BMSCs移植后体内示踪 |
| 2.3.4 AA@ICG@PLL标记的BMSCs移植后在体内示踪的真实性 |
| 2.3.5 AA@ICG@PLL标记的BMSCs移植对小鼠生物安全性评价 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 第三章 BMSCs移植对矽肺纤维化治疗作用及机制探讨 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 BMSCs对SiO_2诱导的小鼠肺纤维化的治疗作用 |
| 3.3.2 BMSCs对矽肺小鼠肺部炎症的影响 |
| 3.3.3 BMSCs通过旁分泌作用参与抑制SiO_2诱导巨噬细胞活化 |
| 3.3.4 BMSCs分泌sTNFR1参与调节M1型巨噬细胞活化 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 结论 |
| 第四章 锌指蛋白ZC3H4是BMSCs治疗矽肺的新型潜在靶点 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 ZC3H4在矽肺小鼠巨噬细胞中高表达 |
| 4.3.2 ZC3H4参与调节SiO_2诱导巨噬细胞活化 |
| 4.3.3 ZC3H4通过内质网应激途径调节巨噬细胞活化 |
| 4.3.4 BMSCs可以抑制活化的巨噬细胞中ZC3H4表达 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 结论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
（10）自体小柱形复合皮散布式种植治疗背部深度烧伤1例报道（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 术前背部创面保痂 |
| 1.2.2 自体小柱皮种植手术 |
| 1.2.2. 1 右臀部制取自体小柱皮 |
| 1.2.2. 2 背部创面制备皮坑 |
| 1.2.2. 3 小柱皮种植 |
| 1.3 观察指标 |
| 2 结果 |
| 2.1 背部创面 |
| 2.2 供皮区 |
| 3 讨论 |
四、带脂肪皮肤移植的实验研究与临床应用（论文参考文献）
- [1]小鼠羊水间充质干细胞的分离、培养及鉴定[J]. 吴航飞,王康淳,潘崎,程颖. 器官移植, 2022(01)
- [2]仿生电磁场在癌症及糖尿病治疗中的应用研究[D]. 刘学磊. 吉林大学, 2021(01)
- [3]脂肪间充质干细胞外泌体改善大鼠多囊卵巢综合征的分子机制[D]. 曹茂盛. 吉林大学, 2021(01)
- [4]α-Galcer不同的注射方式影响小鼠iNKT细胞及亚群变化的研究[D]. 张景楠. 河北大学, 2021(09)
- [5]温肺化纤汤通过AMPK/SIRT3通路干预氧化应激模型下LMSCs线粒体功能障碍及代谢失衡的机制研究[D]. 莫丽莎. 江西中医药大学, 2021(01)
- [6]皮肤微生物促进创伤后皮肤与毛囊再生的研究[D]. 王高峰. 南方医科大学, 2021
- [7]脂肪源间充质干细胞体外对aGVHD患者T细胞亚群的影响及机制初探[D]. 韩月霞. 新疆医科大学, 2021(09)
- [8]间充质干细胞调控炎性巨噬细胞极化的机制研究进展[J]. 赵吉玲,余国龙,彭漪,肖轶,彭智勇. 医学综述, 2021(02)
- [9]骨髓间充质干细胞示踪及其对小鼠肺纤维化治疗作用的机制研究[D]. 黄洁. 东南大学, 2020
- [10]自体小柱形复合皮散布式种植治疗背部深度烧伤1例报道[J]. 姚智华,彭敏,魏通坤,孔超,常东方. 重庆医学, 2020(18)