一、~(60)Co辐照血红细胞CR_1分子数目的变化（论文文献综述）
汤万波[1]（2021）在《Hlf标记的胚胎新生造血干细胞的功能及命运研究》文中进行了进一步梳理造血干细胞是包括髓系细胞和淋系细胞在内的多种成熟血细胞的主要来源。小鼠胚胎发育过程中,造血干细胞主要起源于胚胎期第10.5天（embryonic day,E10.5）的主动脉-性腺-中肾区（aorta-gonad-mesonephros region,AGM）区,此时主动脉内皮经过内皮造血转化过程产生造血细胞。在该过程中,一小群特化的生血内皮细胞的形态逐渐由内皮细胞样的扁平转变为造血细胞样的圆形,并通过出芽的方式集结形成造血簇。簇中包含了造血干细胞前体,它们最终会发育为成熟造血干细胞并迁移至胎肝扩增,随后定植到骨髓。在胚胎造血干细胞发育过程中,由于缺乏特异性表面标志分子,一直无法精确捕获造血干细胞及其相关群体。我们前期研究筛选获得高特异性表面标志,结合单细胞诱导移植体系,首次在单细胞水平高效富集造血干细胞前体,并结合单细胞转录组测序,系统解析了造血干细胞发育全程的单细胞动态分子表达特征。本课题进一步挖掘造血干细胞发育全程的单细胞转录组数据,针对胚胎期早期内皮细胞、造血干细胞前体、胎肝和成体造血干细胞群体的单细胞分子表达特征进行分析,得到造血干细胞特化过程中表达上调的基因集合,从中筛选出从造血干细胞前体到造血干细胞阶段逐渐上调并显着高表达在造血干细胞中的Hlf基因（hepatic leukemia factor,Hlf）。新近研究显示Hlf分子特异性的表达在胎肝及成体造血干细胞中,提示Hlf分子亦可能特异性标记胚胎早期的造血干细胞前体和造血干细胞,为此我们构建了 Hlf-tdTomato荧光报告小鼠和Hlf-CrexER谱系示踪小鼠。我们针对新构建的Hlf-tdTomato荧光报告小鼠进行表达图谱的鉴定,组化染色结果显示:在E10.5 AGM区中共表达RUNX1和CD31的造血相关群体表达Hlf-tdTomato,而CD31+的内皮层细胞基本不表达Hlf-tdTomato。流式结果也表明,E10.5 AGM 区内皮细胞群体（CD31+CD41-CD43-CD45-）不表达 Hlf-tdTomato,造血簇（CD31+Kit+）中有超过40%的细胞表达Hlf-tdTomato;E11的AGM区中有接近40%的CD45-造血干细胞前体和几乎所有的CD45+造血干细胞前体都表达Hlf-tdTomato。我们进一步通过诱导移植实验发现:在E10.5的CD31+CD45+Kit+群体中,仅Hlf-tdTomato+亚群在诱导/移植后3到4周存在髓系和淋系重建,而CD31+CD45-Kit+群体中,Hlf-tdTomato+和 Hlf-tdTomato-亚群在移植后3到4周均出现髓系和淋系重建,表明Hlf表达能特异性富集功能性CD45+造血干细胞前体。此外,E11造血簇细胞（CD3 1+Kit+）进行体外孵育后的产物分析结果显示:只有Hlf+细胞能产生造血干细胞表型样的细胞。以上功能实验表明Hlf-tdTomato表达能进一步有效富集CD45+造血干细胞前体。继而,利用新构建Hlf-CrexER与ROSA26报告小鼠杂交,通过在早期胚胎发育的不同时间点进行诱导,对表达Hlf-CrexER的细胞群体进行谱系示踪,以探究早期胚胎Hlf-CrexER阳性细胞对胎肝各造血干祖细胞群体和成体外周血贡献的动力学变化。使用 Lin-Sca-1+Mac-1lowCD201+（LSM201）、CD45+CD201+CD48-CD150+（ESLAM）和 Lin-Sca-1+Kit+CD48.CD150+（LSKSLAM）的表面标志组合进行胎肝造血干细胞的分析,我们发现E8.5诱导后,胎肝造血干细胞基本未被标记上,而E9.5、E10.5、E11.5和E13.5诱导后,胎肝造血干细胞标记比例呈现逐步上升,尤其E9.5和E10.5诱导后,标记比例均值出现跃升。对诱导后出生的成年小鼠外周血各谱系标记比例的持续检测发现,E9.5诱导后外周血各谱系标记比例均值约2%,显着低于E10.5诱导后（约20%）,表明该时间段随着Hlf表达强度的逐渐上升,可能充分标记了 AGM区的造血干细胞前体及造血干细胞群体。因为AGM区造血干细胞前体及造血干细胞群体起源于内皮细胞,我们进一步通过Tie2-Dre与Hlf-CrexER进行交配得到组成型小鼠,再与ROSA26报告小鼠杂交,即可将Hlf标记更加特异性的限定在早期内皮细胞。通过胎肝造血干细胞检测,我们发现组成型小鼠在胎肝造血干细胞中的标记比例不如诱导型中E13.5中造血干细胞标记比例高,并且通过对出生后小鼠外周血各谱系示踪记录比较,发现组成型小鼠外周血各谱系标记比例也低于诱导型小鼠外周血各谱系的标记比例。总之,本研究通过单细胞转录组分析,筛选到在造血干细胞前体、胎肝造血干细胞和成体造血干细胞中特异性表达的Hlf分子,并构建了 Hlf-tdTomato荧光报告小鼠和Hlf-CrexER谱系示踪小鼠。通过荧光报告小鼠模型我们对胚胎早期造血干细胞前体进行了进一步标记分析,并利用谱系示踪模型揭示了不同发育时间点Hlf分子表达标记细胞的造血命运以及对胎肝造血干细胞贡献的动力学变化。并且构建的小鼠模型可与多种基因型小鼠联合使用,谱系示踪小鼠与Confetti小鼠的联合使用能对造血干细胞的起源异质性进行研究,利用荧光报告小鼠可以探究造血干细胞在骨髓微环境中的定位及其与其他分子间相互作用的机制,这对研究造血干细胞的起源及其应用具有重要的借鉴意义。
曾丽玲[2]（2020）在《高脂血症基因表达谱及其不同中医体质人群miRNA表达差异性》文中研究表明目的:1.初步分析高脂血症人群的临床特征并探寻高脂血症与非高脂血症对照人群外周血单核细胞的基因表达谱特征,筛选与高脂血症形成相关的差异表达基因,并深入探讨与其相关的细胞生物功能和信号通路;2.初步分析高脂血症不同体质人群的临床特征并探寻高脂血症不同体质人群血清中差异表达的miRNAs,深入探寻高脂血症不同中医体质形成及其与动脉粥样硬化性疾病相关的信号通路。方法:第一部分研究方法:研究采用的是横断面研究设计,于2017年对广东省村落地区人群进行筛查,根据纳入和排除标准,运用简单随机抽样方法,最终纳入20例高脂血症及19例非高脂血症对照人群,对所有受试者进行临床生化检测,收集人口学资料及临床资料进行临床特征分析。对临床数据资料采用SPSS软件（version 17,SPSS Inc.,Chicago,IL,USA）分析。由于本研究总样本量为39,即n<40,对性别、吸烟史、饮酒史及体质类型等定性料则用Fisher精确概率法,以均值和百分比（N（%））表示;对于年龄、体重指数及临床生化指标等计量资料,满足正态分布且方差齐性检验则用独立样本t（Student’s t-test）检验分析,以均数和标准差（mean±SD）表示,若满足正态分布但方差不齐时则采用t’检验,若不符合正态分布的计量资料则用非参数检验,以中位数和四分位间距M（P25～P75）表示。假设检验统一使用双侧检验,均列出检验统计量及P值,以P值<0.05作为差异有统计学意义的标准。此外,还收集所有受试者的外周血单核细胞（PBMC）样本,采用Agilent SurePrint G3 Human Gene Expression v3 Microarray 基因芯片技术进行全基因表达检测:提取总RNA并质检,参照芯片标准流程进行反转录合成cDNA,再进一步合成用Cyanine-3-CTP（Cy3）标记的cRNA,标记好的cRNA样品片段化后和芯片杂交,洗脱后利用 Agilent Scanner G2505C（Agilent Technologies）扫描得到原始图像。再通过Feature Extraction软件处理原始图像提取原始数据,生成的原始数据文件经Genespring软件进行quantile标准化后进行后续的数据分析。通过表达谱芯片质控探针的中位变异系数值（Median CV）和样本的检出率,结合芯片数据箱线图对基因芯片实验及数据进行质控。采用样本聚类分析、样本相关性分析及主成分分析（PCA）对PBMC样本芯片数据进行分组评估,剔除极端离群样本,进一步对生物样本进行质控和筛选,纳入具有生物学重复性的样本,最终纳入19例高脂血症和8例非高脂血症对照组人群的基因芯片数据进行后续基因表达谱分析。对芯片数据的分析,采用Fold-change（表达差异倍数）以及T检验（Student’s t-test）统计学方法进行差异基因筛选,依据fold change≥2或≤0.5且P<0.05的筛选标准确定高脂血症及非高脂血症对照组人群间的差异表达基因。并用散点图,火山图和聚类分层图对差异表达基因筛选结果进行直观展示。再运用DAVID 6.8.在线平台对差异表达基因进行 GO（Gene Ontology）功能注释和 KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）通路富集分析。并参考String数据库,利用cytoscape软件（Version 3.7.2）分别绘制上调基因间和下调基因间相互作用网络图。最后结合文献,挑选表达差异倍数较大且差异具有统计学意义的基因进行验证,依据本研究高脂血症和非高脂血症对照组的纳入和排除标准,通过随机抽样方法,再次纳入研究对象,进一步扩大样本量,收集受试者的PBMC样本,提取总RNA,利用qRT-PCR（Quantitative Real-time-PCR）方法对选取的差异表达基因进行验证。第二部分研究方法:研究采用的是横断面研究设计,运用分层抽样的方法,于2017年对广东村落地区人群进行筛查,根据诊断、纳入和排除标准筛选出347例高脂血症病例,依据体质类型进行分层,其中高脂血症平和质234例、高脂血症实性体质53例及虚性体质60例。再采用简单随机抽样的方法从高脂血症平和质、高脂血症实性体质及虚性体质人群中各抽出10例受试者参与本研究,对所有受试者进行临床生化检测,收集人口学资料及临床资料并进行分析。对三组不同体质高脂血症人群的临床数据资料的比较,采用SPSS软件（version 17,SPSS Inc.,Chicago,IL,USA）分析。由于本研究中总样本量为24,n<40,对于性别、吸烟史、饮酒史、糖尿病史、高尿酸血症病史、慢性炎症性疾病史及慢性肾功能不全病史等定性资料的比较采用Fisher精确概率法,并用Bonferroni法校正P值对分布差异的变量进行两两比较,以均值和百分比（N（%））表示;连续性变量符合正态分布则采用方差分析,并用Bonferroni法进行多重比较,以均数和标准差（mean±SD）表示。假设检验统一使用双侧检验,列出检验统计量及P值,以P值<0.05作为差异有统计学意义的标准。并收集每例受试者的血清样本,提取总RNA并进行质控,运用qPCR原理,使用针对miRNA的反转录试剂盒QIAGEN miScript Ⅱ RT Kit对提取的总RNA进行反转录形成cDNA,运用miScript miRNA PCR Array芯片并结合miScript SYBR Green PCR Kit按照生产厂商规定的标准操作流程进行qPCR试验,检测miRNA表达,得到miRNA PCR Array芯片数据。用R软件的princomp函数进行主成分（PCA）分析筛选生物芯片样本,剔除极端离群样本,进一步对生物样本进行质控和筛选,纳入具有生物学重复性的样本,最终分别纳入高脂血症平和质9例、实性体质7例及虚性体质8例样本的miRNA芯片数据进行后续miRNA表达差异性分析。将miRNA PCR array检测的原始数据导入QIAGEN公司提供的在线平台（QIAGEN 3.5）,采用中位值对miRNA芯片原始信号值进行标准化后,进行差异表达miRNA分析及靶基因预测。计算两两组的每个基因的2^(-Avg.（Delta（Ct））,采用Fold-change（表达差异倍数）以及T检验（Student’s t-test）统计学方法对差异表达miRNA进行筛选,计算Fold change值和P值。依据Fold change≥2或≤0.5且P<0.05作为确定组间差异表达miRNA的标准。样本聚类分析是采用层次聚类,以欧式距离作为聚类指标。对每组差异筛选结果绘制散点图,火山图和聚类分层图。用DAVID 6.8在线平台对靶基因进行KEGG pathway富集分析;用Venny分析在线平台对特定差异表达miRNA进行维恩分析;并根据KEGG数据库,利用cytoscape软件（Version 3.7.2）分别绘制miRNA与富集通路之间的相互作用网络图。结果:第一部分研究结果:高脂血症与非高脂血症对照组临床资料分析结果显示,两组之间性别、吸烟史、饮酒史及体质类型的分布差异无统计学意义（P>0.05）;高脂血症人群比非高脂血症对照人群年龄及体重指数偏高（P<0.05）,且高脂血症人群中超敏C反应蛋白及血糖水平均较高（P<0.05）。其他促甲状腺激素、游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）、游离四碘甲状腺原氨酸（FT4）、降钙素原、血白细胞数、血红细胞数、血小板、肾小球滤过率、血红蛋白量、血尿酸、血肌酐等在两组间的差异无统计学意义（P>0.05）。基因芯片数据分析结果显示高脂血症与非高脂血症人群PBMC样本基因表达谱具有明显差异性,共检测出4795差异表达基因,其中在高脂血症组中有2101个基因表达上调,2694个基因表达下调。对差异表达基因进行GO功能注释及KEGG通路富集分析,结果显示共富集了 3242条失调的GO功能和18条KEGG信号通路,根据P值由小到大的顺序筛选出前40位的GO条目,分子功能相关的条目主要涉及到趋化因子受体活性（chemokine receptor activity）、G蛋白偶联趋化因子受体活性（G-protein coupled chemoattractant receptor activity）等;细胞组成主要涉及特异性颗粒内腔（specific granule lumen）等;生物学过程主要涉及到趋化因子介导信号通路（chemokine-mediated signaling pathway）、中性粒细胞激活（neutrophil activation）、中性粒细胞介导的免疫（neutrophil mediated immunity）等。富集的18条KEGG信号通路主要涉及单纯疱疹病毒1型感染通路（Herpes simplex virus 1 infection）、细胞因子受体相互作用（Cytokine-cytokine receptor interaction）等。富集显着的GO生物功能和KEGG信号通路大部分均与感染免疫和炎症相关,提示高脂血症形成的分子机制可能主要与免疫炎症相关的生物功能和信号通路失调相关。通过扩大样本量,选取表达差异倍数较大的17个基因利用qRT-PCR方法进行验证,结果显示 ATP1A1、DFNB31、FAM53B、HBEGF、MAPK14、PIK3CB、ABCA1 基因在高脂血症与对照组中表达差异性具有统计学意义（P<0.05）。根据基因功能和通路富集分析结果显示这些差异表达基因可能参与高脂血症形成的生物过程包括:ATP1A1调控的机械刺激反应（response to mechanical stimulus）、FAM53B 正向调控 Wnt信号通路、ABCA1调控环嘌呤核苷酸代谢过程（cyclic purine nucleotide metabolic process）、HBEGF 调控上皮细胞迁移（epithelial cell migration）。第二部分研究结果:高脂血症平和质组、实性体质组和虚性体质组三组临床资料分析结果显示,糖尿病史、高尿酸血症病史、FT3、血尿酸水平、血白细胞计数、血红细胞数及血红蛋白量在三组中的差异具有统计学意义（P<0.05）。对定性资料利用Bonferroni法校正检验效能,将糖尿病和高尿酸血症病史采用Fisher精确概率法进行两两比较,结果表明高脂血症实性体质患者比高脂血症虚性体质和平和质患者更常伴有糖尿病和高尿酸血症（P<0.05）。对定量资料FT3、血尿酸水平、血白细胞计数、血红细胞数及血红蛋白量采用Bonferroni法进行方差分析多重比较,结果显示高脂血症虚性体质血FT3水平较其他两种体质均显着降低（P<0.05）,提示血FT3水平下降可能是高脂血症虚性体质人群特征性表现之一;高脂血症虚性体质组血红细胞数及白细胞数均较平和质组低（P<0.05）;高脂血症虚性体质组血红蛋白量较实性体质组低（P<0.05）;高脂血症实性体质组血尿酸水平较虚性体质组升高（P<0.05）。MiRNA芯片数据分析结果显示,与高脂血症平和质组相比,高脂血症实性体质组有25个下调的差异表达miRNA,高脂血症虚性体质组有8个差异表达miRNA（7个上调,1个下调）;高脂血症实性体质组与虚性体质组相比,有6个下调的差异表达miRNA。将两两组间差异表达miRNA进行维恩分析,结果显示hsa-miR-338-3p是高脂血症三种体质共有的差异表达miRNA,在三种体质相互间的表达差异均有统计学意义（P<0.05）,hsa-miR-338-3p在高脂血症实性体质中相对其他两种体质均表达下调,在高脂血症虚性体质中相对其他两种体质均表达上调,在平和质中相对实性体质表达上调而相对虚性体质表达下调。hsa-miR-338-3p鉴别高脂血症三种体质的ROC曲线（受试者工作特征曲线）显示,hsa-miR-338-3p从高脂血症三种体质中鉴别实性体质,虚性体质及平和质的AUC（曲线下面积）分别为0.908,0.992和0.607,P值均<0.05,表明hsa-miR-338-3p鉴别高脂血症实性体质、虚性体质及平和质均具有一定准确性,尤其是鉴别高脂血症实性体质和虚性体质具有较高准确性。通路富集分析显示,三种体质共有的差异表达miRNA,hsa-miR-338-3p,预测了198个靶基因并富集了 11条信号通路,富集的通路主要与炎症反应及糖、脂代谢相关,如 Ras signaling pathway,Insulin secretion,Glycerophosphol ipid metabolism等,hsa-miR-338-3p下调会促进这些通路过表达,可能是高脂血症人群继发动脉粥样硬化性疾病的可能机制之一。此外,我们还发现hsa-miR-145-5p、hsa-miR-183-3p、hsa-miR-210-3p是虚性体质特有的差异表达miRNA,相比于高脂血症平和质和实性体质,这三个差异表达miRNA在高脂血症虚性体质中均表达上调（P<0.05）,鉴别虚性体质的 ROC 曲线显示:hsa-miR-145--5p（AUC=0.813,P=0.014）,hsa-miR-183--3p（AUC=0.969,P<0.001）,hsa-miR-210-3p（AUC=0.984,P<0.001）,表明 hsa-miR-145-5p、hsa-miR-183-3p、hsa-miR-210-3p从三种体质中鉴别虚性体质有很高的准确性,可能是鉴别高脂血症虚性体质潜在的血清分子标志物。结论:1.年老、高体重指数、高水平的超敏C反应蛋白及血糖可能是高脂血症形成的危险因素;高脂血症和非高脂血症对照人群PBMC样本之间基因表达特征存在明显的差异性,这些差异性基因可能是通过调控免疫炎性相关生物功能和信号通路参与高脂血症的形成和发展过程;2.ATP1A1、DFNB31、FAM53B、HBEGF、MAPK14、PIK3CB、ABCA1 基因参与调控的生物过程可能是高脂血症形成的分子机制之一;3.高脂血症三种不同中医体质人群间存在明显的差异表达miRNA,其中hsa-miR-338-3p可能是鉴别高脂血症实性体质,虚性体质和平和质潜在的血清分子标志物,且可能通过负调控免疫炎性及糖脂质代谢等相关通路参与高脂血症患者形成动脉粥样硬化性血管疾病过程;4.hsa-miR-145-5p、hsa-miR-183-3p、hsa-miR-210-3p 可能是鉴别高脂血症虚性体质潜在的血清分子标志物;5.高脂血症实性体质人群存在多种促进动脉粥样硬化性疾病的危险因素包括糖尿病、高尿酸血症及hsa-miR-338-3p表达下调,实性体质可能是高脂血症人群易感动脉粥样硬化性疾病的预警因子。
张鹏飞[3]（2019）在《基于生物表面展示策略的功能化纳米载体的构建和应用》文中研究说明在过去几十年,各种配体修饰的纳米载体已经被开发出来。众所周知,纳米材料的表面修饰可以极大地拓展纳米材料的功能和生物相容性,纳米载体的功能化一般需要将功能配体修饰在纳米颗粒的表面,从而赋予材料独特的靶向性、长循环稳定性、酶催化能力、生物治疗、免疫逃逸和生物传感等功能。用于纳米载体表面功能化的配体分子通常包括酶、多肽、适配体、多糖、抗体以及其他生物活性小分子等。其中,抗体等蛋白配体因其高亲和力和独特的生物活性,作为一类较为重要的配体,被研究人员偶联在不同类型的纳米粒子上,以实现功能化纳米粒子的肿瘤靶向运输及诊断。传统的配体修饰方法包括物理吸附和化学共价偶联等方法。然而,蛋白配体在与纳米粒子之间发生化学共价偶联反应的过程中可能会引发敏感性蛋白配体（如抗体、酶）的生物活性的损失并且难以控制配体的空间朝向,因此容易造成纳米材料功能化的效率低下等问题。理想的、针对蛋白配体的纳米偶联方法应该能够保证被连接配体的最优空间朝向、可接近性、体内循环稳定性以及良好的生物活性。开发出针对于蛋白配体的、纳米偶联的新方法,并且保证被偶联蛋白的正确朝向和生物活性,对于促进纳米医药以及纳米功能化的发展有着重大的意义。在另一方面,生物表面展示技术也在不断蓬勃发展。该技术主要是通过运用基因工程的手段在类病毒颗粒、病毒、酵母、细菌、噬菌体、铁蛋白或蛋白笼等生物载体的表面上展示各种多肽、重组蛋白、多糖等生物活性元件。目前,生物表面展示策略已经广泛地应用于微生物学、疫苗学、分子生物技术等领域,并产生了巨大的临床应用价值。此外,仿生策略被广泛地应用于纳米材料的开发,以赋予纳米材料更优越的独特功能,如生物相容性、免疫逃逸、细胞特异性的靶向能力、长循环稳定性或细胞独有的其他生物学功能。这一策略也通常涉及到生物来源的活性蛋白（病毒表面蛋白或多肽）或细胞组分（如细胞膜或细胞器）对纳米载体表面的修饰及功能化。综上所述,为了克服非特异性共价偶联方法的缺点并且开发出理想的、针对于蛋白配体的、纳米表面功能化的方法,在本研究中,本人通过结合生物表面展示技术以及细胞仿生策略,开发出了一种纳米载体功能化的新方法,并且制备了三种功能化的纳米载体（如:展示蛋白的病毒拟态纳米囊泡、外泌体拟态纳米囊泡与细胞膜包裹的纳米粒子）,这些载体在关于疫苗抗原投递、肿瘤靶向的药物运输和肿瘤免疫治疗的三个实验评估中都取得了良好的疾病治疗效果,充分证明了该新型生物功能化的纳米系统的优越性能以及该纳米偶联方法的普适性。本研究的主要工作以及创新包含以下四个方面:1、开发出了一种新型的基于纳米囊泡载体的蛋白展示技术（即纳米囊泡表面展示技术）,该技术可以在源自细胞膜的、纳米囊泡的表面,定向表达各种靶向抗体、病毒抗原蛋白、酶复合体等生物活性蛋白,从而赋予纳米囊泡与外泌体相似的功能。2、基于纳米囊泡表面展示技术以及病毒仿生策略,流感病毒包膜蛋白（血凝素蛋白HA）首先被基因工程改造后定向表达在哺乳动物细胞膜的表面,通过加入表面活化剂,诱导细胞膜出芽,从而分泌出了可以展示流感病毒HA膜蛋白的纳米囊泡。本实验证明了该流感病毒拟态纳米囊泡具有与天然流感病毒相似的大小、形貌、免疫原性和凝血活性,并且可以在小鼠体内诱导出高滴度的中和抗体,以抵御致死性流感病毒的感染,进而证明了这一病毒拟态纳米囊泡可以作为一种直接、有效和通用的疫苗研发平台,有利于开发出针对各种包膜病毒的疫苗。3、基于纳米囊泡表面展示技术,我们将肿瘤靶向的表皮生长因子或纳米抗体affibody分别定向表达在囊泡的表面,并在囊泡的内部装载治疗性的药物分子,因此赋予了纳米囊泡特异性识别肿瘤的功能,使得药物分子高浓度地聚集在肿瘤部位,从而达到了良好的肿瘤治疗效果。4、通过将囊泡表面展示技术和膜包裹纳米颗粒的方法有机地结合,PD-L1抗体先被定向表达在细胞膜囊泡的外表面,在细胞膜囊泡与氧化锰纳米颗粒经过微孔滤膜的共挤压后,本人成功制备出了一种可以展示PD-L1抗体的、细胞膜包裹的氧化锰纳米颗粒,该氧化锰纳米颗粒能够被细胞膜以及其上的PD-L1抗体有效的修饰及功能化,同时该系统可以将负载的免疫刺激分子靶向递送到肿瘤微环境,实现对肿瘤的放疗与免疫联合治疗。此外,我们发现该新型膜包裹纳米系统能够有效地在小鼠肿瘤模型中诱导全身的抗肿瘤免疫反应（远端效应）,成功地抑制了未辐照肿瘤的生长。
王群[4]（2018）在《抗肿瘤药物SAHA耐药机制的研究以及新型标记和追踪突变克隆的嵌合体分析方法》文中指出在生物体发育过程中,遗传信息的改变产生嵌合体,其中部分突变使细胞获得生长优势,导致肿瘤等疾病的发生。肿瘤异质性是肿瘤的重要特征之一,使肿瘤对药物的敏感性不同。组蛋白去乙酰化酶抑制剂是一类新型的抗肿瘤药物,其中,SAHA已被FDA批准用于皮肤T细胞淋巴瘤临床治疗,但SAHA在抗实体瘤肿瘤治疗中的效果却与预期相差甚远。因此,深入理解SAHA耐药性的分子机制可为临床应用中更好地进行病人筛选和增强治疗效果提供依据。本研究中,我们发现结肠癌患者肿瘤组织中HDAC6高水平表达与K-ras基因突变存在相关性,成纤维细胞中表达活化的K-ras可提高HDAC6和c-myc的表达。通过细胞生长抑制实验和克隆形成实验,我们发现含有激活K-ras突变的细胞更能耐受SAHA对生长的抑制作用。相反,K-ras抑制剂则使K-ras突变的肺癌细胞株对SAHA诱导的生长抑制更加敏感。我们还发现,突变的K-ras基因上调HDAC6表达依赖于丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）途径。我们的研究结果表明,可将SAHA和K-ras抑制剂联合使用,用于克服SAHA耐药性,增强临床治疗效果。通过小鼠嵌合体分析,可追踪肿瘤的发生发展过程,用于肿瘤异质性的研究,从而为临床治疗靶点和用药的选择提供理论依据。嵌合体分析是指通过诱导使一个或几个细胞产生不同于其他大部分野生型细胞的基因型,并将这些突变的细胞进行特异的遗传标记,用于追踪和观察,适用于在复杂的多细胞系统中研究基因突变对细胞自发行为和功能的影响。传统基于有丝分裂过程中染色体同源重组的嵌合体分析方法,重组效率低、应用有限。我们建立了一种新型高效的分析方法,即通过诱导可以使少数细胞产生突变并表达遗传标记报告基因ZsGreen,同时使少量野生型细胞表达tdTomato标记作为内部对照,即可在同一个体内同时标记和追踪细胞克隆,而且这个系统可与任何条件性基因敲除结合,用于基因功能的研究,具有广泛的应用价值。我们利用该系统发现Tet2缺失诱导髓系细胞和B细胞克隆增殖,从而验证了 Tet2突变在促进血液相关肿瘤发生中的作用。同时,我们研究了 Id3在肠道免疫细胞发育中作用,实验结果显示Id3在调节肠道巨噬细胞稳态中扮演重要角色。总之,我们的嵌合体分析系统提供了一个能够广泛用于研究不同基因突变或者不同基因组合突变对细胞自身功能影响的有效方法。
赵丽阳[5]（2016）在《猪链球菌溶血素介导的补体逃逸机制研究》文中研究说明补体系统由广泛存在于血清、组织液和细胞膜表面的30多种可溶性蛋白和膜结合蛋白组成,补体系统是天然免疫的重要组成部分,不仅参与炎症反应还能够提高适应性免疫应答。补体系统可以快速识别病原微生物并通过免疫效应细胞的调理吞噬作用和杀伤作用清除病原体,但病原微生物也进化出多种机制逃逸补体系统的攻击,即补体逃逸。猪链球菌（Streptococcus suis）是一种重要的人兽共患病原菌,有33种血清型,其中2型（SS2）流行最广,致病性最强,可以逃逸补体的杀伤而在动物血液或组织中存活较长时间,但补体逃逸机制尚不清楚。补体C3a和C5a是重要的趋化因子,在炎症和调理吞噬作用中发挥重要作用。本研究分别以它们的受体C3aR和C5aR为诱饵,筛选出多个能够与C3aR和C5aR结合的SS2的分泌蛋白和膜蛋白,其中SS2的毒力因子溶血素（Suilysin,SLY）能与C3aR和C5aR互作。进一步研究发现SLY能够竞争性抑制C3a和C5a与其受体的结合,从而抑制趋化作用。主要研究结果如下:1.C3aR和C5aR结合蛋白的筛选:以C3aR和C5aR为诱饵,通过细菌双杂交实验筛选出多个能够与C3aR和C5aR结合的SS2的分泌蛋白和膜蛋白,其中SS2的毒力因子溶血素（Suilysin,SLY）能与C3aR和C5aR互作。2.C3aR、C5aR与SLY相互作用的验证:通过Far westen blot的方法对SLY与C3aR、C5aR之间的相互作用进行了验证。3.C3aR、C5aR与SLY互作结构域的鉴定:通过ELISA鉴定出C3aR的第二个胞外环（C3aR e2）与SLY之间有相互作用,而C3aRe2是C3a结合C3aR的主要片段。4.重组蛋白SLY对趋化作用的影响:人类急性单核白血病细胞（THP-1）作为C3a与C5a趋化的对象,首先通过流式细胞术确定了 C3a受体与C5a受体在THP-1细胞表面表达,之后用不同浓度的SLY与细胞孵育后观察细胞数目,发现1μM以下的SLY并不会使细胞数目产生变化,可以确保趋化结果的有效性,而随SLY浓度的增加,C3a与C5a的趋化能力降低。这说明SLY对C3a与C5a的趋化具有抑制作用。5.SLY突变株对趋化作用的影响:通过野生株与SLY突变菌株生长曲线的比较,发现sly基因缺失后,对细菌的生长无明显影响。故将野生株与突变株上清液孵育THP-1细胞,再用趋化因子C3a、C5a做趋化实验。结果发现,猪链球菌的上清蛋白并不会使细胞数目产生变化,可以确保趋化结果的有效性,SLY突变株与野生株相对比,由于SLY突变株不分泌SLY蛋白,因此SLY突变株对趋化的抑制作用明显减弱。
乔宁宁[6]（2016）在《红细胞补体受体1基因单核苷酸多态性及表达水平与骨关节结核的相关性研究》文中进行了进一步梳理第一部分骨关节结核患者红细胞表面免疫分子及T细胞亚群检测目的:研究红细胞表面免疫分子及T细胞亚群在骨关节结核患者与健康体检者之间的差异及临床意义。方法:采用流式细胞仪抗体双标法检测110例骨关节结核患者（骨关节结核组）及104例健康体检者（对照组）外周静脉血红细胞表面免疫分子（CD35、CD44、CD55、CD58、CD59）和T细胞亚群（CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/8+）的表达,比较两组间红细胞表面免疫分子及T细胞亚群水平的差异,分析骨关节结核患者红细胞表面免疫分子与T细胞亚群的相关性,以探讨其在骨关节结核发病机制中的作用及相关关系。结果:（1）骨关节结核组患者红细胞表面免疫分子CD35、CD44、CD59表达低于对照组（P<0.05）,骨关节结核组患者CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/8+水平明显低于对照组（P<0.05）,CD8+明显增高（P<0.05）。（2）骨关节结核组红细胞表面免疫分子CD35与CD3+、CD4+呈正相关（P<0.05）,而与CD8+、CD4+/CD8+无明显相关性（P>0.05）。结论:骨关节结核患者红细胞免疫功能存在紊乱和低下,T细胞亚群比例失调。推测红细胞免疫和淋巴细胞免疫共同参与了骨关节结核的发病过程。第二部分红细胞补体受体1基因单核苷酸多态性与骨关节结核易感性的关系目的:探讨红细胞补体受体1基因单核苷酸多态性与骨关节结核易感性的关系及其与红细胞cr1水平的关系。方法:采用单碱基延伸聚合酶链式反应（polymerasechainreaction-singlebaseextension,pcr-sbe）和dna直接测序法检测110例骨关节结核患者（骨关节结核组）及104例健康体检者（对照组）红细胞cr1基因的5个标签snp位点（rs11118167c/t、rs2274567g/a、rs2296160g/a、rs4844600g/a、rs9429945c/t）的单核苷酸多态性,统计各个位点的基因型和等位基因的分布频率,分析各个位点基因型及等位基因与骨关节结核易感性之间的关系。结合已经检测的红细胞cr1水平,探讨红细胞cr1基因多态性与红细胞cr1水平的关系。结果:（1）cr1基因rs4844600g/a和rs9429945c/t位点骨关节结核组与对照组各基因型及等位基因频率分布差异有统计学意义（p<0.05）:与非携带者比较,rs4844600g/a-gg基因型（χ2=8.026,or=2.262,95%ci=1.275-4.013）及g等位基因（χ2=5.054,or=1.565,95%ci=1.058-2.314）增加骨关节结核的易感性;rs9429945c/t-cc基因型（χ2=7.249,or=2.067,95%ci=1.197-3.568）及c等位基因（χ2=4.280,or=1.550,95%ci=1.022-2.352）增加骨关节结核的易感性。rs11118167c/t、rs2274567g/a、rs2296160g/a位点骨关节结核组与对照组各基因型及等位基因频率分布差异无统计学意义（p>0.05）。（2）cr1基因rs4844600g/a和rs9429945c/t位点g-c单倍型可增加骨关节结核的发病风险（or=1.541,95%ci=1.042-2.280）,a-t单倍型可降低骨关节结核的发病风险（or=0.620,95%ci=0.407-0.943）。（3）在骨关节结核组中,cr1基因rs11118167c/t、rs2274567g/a、rs2296160g/a、rs4844600g/a、rs9429945c/t位点多态性与红细胞cr1水平无关（p>0.05）;在对照组中,cr1基因rs11118167C/T-TT基因型（F=27.700,P<0.05）、rs2274567 G/A-AA基因型（F=24.034,P<0.05）和rs2296160 G/A-AA基因型（F=15.939,P<0.05）均可引起红细胞CR1水平增高,rs4844600 G/A、rs9429945 C/T位点多态性与红细胞CR1水平无关（P>0.05）。结论:（1）CR1基因rs4844600 G/A基因多态性与骨关节结核发病相关,G等位基因及GG基因型是骨关节结核的危险因素。（2）CR1基因rs9429945 C/T基因多态性与骨关节结核发病相关,C等位基因及CC基因型是骨关节结核的危险因素。（3）CR1基因rs11118167C/T、rs2274567 G/A、rs2296160 G/A位点多态性与骨关节结核没有显着关联。（4）CR1基因rs4844600 G/A和rs9429945 C/T位点G-C单倍型可增加骨关节结核的发病风险,携带G-C单倍型的人群罹患骨关节结核的风险较高;A-T单倍型可降低骨关节结核的发病风险,携带A-T单倍型的人群罹患骨关节结核的风险较低。（5）CR1基因rs11118167 C/T、rs2274567 G/A、rs2296160 G/A、rs4844600 G/A和rs9429945 C/T位点多态性与骨关节结核患者红细胞CR1水平无关。
崔姣艳[7]（2015）在《猪红细胞免疫粘附受体的鉴定与检测》文中研究表明目的：为深入研究动物红细胞免疫粘附功能的分子基础,本试验以猪红细胞为研究对象设计实验,对猪红细胞免疫粘附受体进行鉴定分析,以期为课题组后期试验提供理论数据。方法：运用荧光细胞化学法检测猪CR1-like分子；运用猪细胞免疫粘附新鲜血清或EDTA血清致敏的GFP-E.coli和乳胶颗粒复合物,及抗猪CR1-like单抗阻断免疫粘附的方法验证猪红细胞免疫粘附分子CR1-Like的存在；采用免疫共沉淀的方法纯化猪CR1-like抗原,利用还原和非还原SDS-PAGE电泳及WB实验,得出猪红细胞CR1-Like的分子大小及二硫键数量。结果：荧光细胞化学法检测猪CR1-like分子实验可观察到猪红细胞与抗猪CR1-like McAb及Goat anti-mouse IgG-FITC发生免疫反应；在荧光显微镜下观察到,猪红细胞可以粘附新鲜血清致敏的GFP-E.coli;猪红细胞不粘附EDTA血清致敏和未致敏的GFP-E.coli;抗猪CR1-like单抗预孵育猪红细胞不粘附致敏的GFP-E. coli;同型抗体预孵育猪红细胞粘附致敏的GFP-E.coli。猪红细胞免疫粘附致敏乳胶颗粒及单抗阻断免疫粘附结果同GFP-E.coli实验结果一致。免疫共沉淀洗脱目的蛋白SDS-PAGE电泳及WB实验结果表明,猪红细胞CR1-like以135KD和200KD两种形式存在,CR1-like分子内部含有2或3个二硫键,二硫键断裂后裂解为70KD、50KD、15KD三种支链蛋白,其中以50KD和15KD的支链蛋白发挥免疫反应。结论：猪红细胞表面存在起免疫粘附作用的CR1-like分子；猪红细胞表面CR1-like以135KD和200KD两种形式存在,在还原条件下,CR1-like裂解为70KD、50KD、15KD三种小分子蛋白,CRl-like分子内部含有2或3个二硫键,在免疫反应中主要以50KD和15KD两个支链蛋白发挥作用。
石磊[8]（2015）在《CD47在自身免疫肾炎中的作用及炎症条件下SIRPα的表达对吞噬作用的影响》文中提出本论文分为两个部分,分别为CD47在系统性红斑狼疮中的作用、炎症条件下调节SIRPα对吞噬作用的影响。一、CD47在自身免疫肾炎的作用:CD47是一种机体用于自身识别的标志物,在调节天然免疫和获得性免疫中都发挥着重要的作用。在自身免疫疾病,例如系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus,SLE）中,CD47对自身抗体的产生,以及对自身反应T淋巴细胞和B淋巴细胞的激活,这些都研究的不是很清楚。为此,我们获得了CD47-/--Faslpr小鼠,检测了其肾脏病理改变、累积生存率、蛋白尿、脾脏肿大程度以及自身抗体的产生等生化指标。我们发现CD47-/--Faslpr小鼠与Faslpr小鼠相比生存时间更长,肾小球细胞增生,急性肾小管萎缩和液泡化等自身免疫狼疮肾炎的症状并不明显。CD47-/--Faslpr小鼠产生了低水平的蛋白尿,脾肿大程度也大大减轻。在CD47基因敲除后,Faslpr小鼠血清中抗核抗体（antinuclearantibodies,ANAs）以及抗双链 DNA 抗体（anti-double-stranded DNA anti-dsDNA antibodies,anti-dsDNA）发生了显着的降低。与FasIpr小鼠相比,CD47-/--Faslpr小鼠肾小球C3和C1 q沉淀以及IgG沉淀显着减少,但是IgM沉淀没有受到影响。通过机制研究我们发现,在用抗原免疫小鼠以后,CD47敲除会影响高亲和力IgG抗体的产生,但是不影响IgM的产生。这是由于二级淋巴器官中,滤泡T淋巴细胞产生减少了,导致了生发中心发育受损。总而言之,我们的结果首次证明了 CD47敲除能够降低Faslpr小鼠自身IgG抗体的产生,缓解狼疮肾炎的症状。二、炎症条件下调节SIRPα对吞噬作用的影响SIRPα（signal-inhibitory regulatory protein α）属于信号转导蛋白家族（Signal-regulatory protein family）,是 immunoglobulin superfamily（IgSF）免疫球蛋白超家族中的一种细胞表面跨膜糖蛋白,胞外有三个特征性的同源IgSF区域。研究表明SIRP 在细胞分化、增殖、迁移、凋亡中都起到非常重要的作用,LPS能够诱导巨噬细胞SIRPα蛋白表达的降低,这是通过miRNA的调控来实现了,而我们之前发现IL-17A能够升高巨噬细胞SIRPα蛋白的表达,这些均表明巨噬细胞中SIRPα蛋白表达是可以被调控的。本论文通过研究发现SIRPα在体内受到各种细胞因子的调控,这种调控能够影响巨噬细胞对自身细胞甚至是肿瘤细胞的吞噬。揭示了其在免疫系统特别是天然免疫系统中可能的作用。我们以 LPS 作为阳性对照,使用 IL-1β、IL-6、IFNγ、IL-4、IL-10、IL-17A和TNFα等细胞因子来刺激巨噬细胞,检测巨噬细胞内SIRPα蛋白水平的表达,发现SIRPα蛋白水平能够被细胞因子调控,主要通过NFκB、MAPK以及JAK-STATs信号通路来实现,而miR-17、miR-20a和miR-106a参与了这一过程。但是这种转录后水平的调控不依赖于c-myc的表达,受到c-myc的负反馈调节。IL-1β、IL-6、IFNγ、IL-4、IL-10、IL-17A 和 TNFα 通过 MAPK、NFκB 和 JAK-STAT调节c-myc以及miR-17、miR-20a和miR-106a的水平进而对SIRPα蛋白水平的表达进行调控。并且,SIRPα蛋白水平的变化并不影响巨噬细胞对E.coli、Zymosan和凋亡细胞的吞噬,而且与巨噬细胞ROS的产生并无明显的关联。但是,SIRPα蛋白表达降低能够促进巨噬细胞对正常血红细胞以及肿瘤细胞的吞噬,并且显着增强肿瘤特异性抗体介导的吞噬作用。总而言之,我们成功的实现了对SIRPα蛋白水平的调控,了解了其调节的信号通路,分析了 SIRPα蛋白水平降低对巨噬细胞免疫应答的影响。而巨噬细胞表面SIRPα蛋白水平的降低促进了巨噬细胞对CD47+细胞的吞噬,为治疗肿瘤提供了新的可能。
冉媛媛[9]（2015）在《龙血竭及其提取物的药效作用和机制研究》文中认为龙血竭（Dragon’s Blood， DB）是从百合科植物剑叶龙血树Dracaenacochinchinesis（Lo ur） S. C. Chen的含脂木材中提取的红色树脂，主要产于广西和云南等地区。龙血竭是一个传统的“活血化瘀”的名贵中药，现代药理研究发现，DB具有抗炎症发生、抗氧化损伤、提高免疫力和促进血液循环等多种生物活性。由于DB具有生物利用度低，服用剂量高和药物黏度高等缺点，本课题组采用醇提水沉工艺获得龙血竭提取物（Dragon’s Blood extract，DBE），其中酚类化合物（白藜芦醇、紫檀芪、龙血素A和龙血素B）为DB和DBE的活性成分。研究发现，许多天然存在的多酚类化合物，如茶多酚和白藜芦醇等，具有减少辐射诱导的氧化应激损伤、细胞DNA损伤、炎症反应以及造血损伤等作用，而且我们课题组以前的研究发现DB能够减轻辐射诱导的脑损伤和胃肠损伤，因此本文研究了DB和DBE对辐射造血损伤的保护作用及其机制。此外，我们以前的研究还发现DB可促进大鼠周围神经损伤的早期再生，减少大鼠的局灶性脑缺血损伤，以及抑制辐射诱导的海马神经元凋亡。因此，本文进一步探讨了DB和DBE的抗抑郁作用及其机制。基于以上分析，从促进骨髓造血和抗抑郁两个方面揭示DB和DBE的药效作用和相关机制。本研究主要包括两部分内容，第一部分是DB和DBE对辐射造血损伤的防护作用及其机制研究，以γ射线辐射雄性成年BALB/c小鼠建立骨髓抑制模型（4Gy或5Gy60Co-γ射线一次性全身照射），观察DB和DBE对骨髓抑制小鼠外周血细胞、骨髓病理、造血祖细胞、染色体畸变、微核率、细胞因子和氧化应激水平等的影响。为了进一步研究DBE的促造血机制，采用GM-CSF因子饥饿Mo7e细胞（人巨核细胞白血病细胞系）模型，观察DBE对细胞存活率、细胞周期、细胞凋亡以及相关信号通路蛋白表达的影响。第二部分是DB和DBE对抑郁模型大鼠行为学及海马神经发生的影响，以连续28天慢性轻度不可预见性应激方法建立大鼠抑郁模型，观察DB和DBE对抑郁模型大鼠行为学（糖水消耗实验、旷场实验、强迫游泳实验和新奇抑制摄食实验），海马齿状回神经发生和迁移，海马中Ngn2、DCX、神经营养信号通路（BDNF/ERK1/2/CREB）和长时程记忆信号通路（NMDAR/CAMKIV/CREB）中相关蛋白水平的影响，以探讨DB和DBE治疗抑郁症的可能机制。具体结果如下：第一部分：DB和DBE对辐射造血损伤的防护作用及其机制研究1DB和DBE对辐射诱导的骨髓抑制小鼠的造血保护作用1)DB和DBE明显促进外周血细胞水平的恢复。在4Gy60Co-γ辐射小鼠模型中，DB和DBE（0.075，0.15，0.3g/kg b.wt.）显着促进辐射后小鼠外周血白细胞的恢复，且DBE在辐射后的28d促白细胞恢复到正常水平；DB和DBE可明显促进红细胞水平的恢复；DB和DBE组中的血红蛋白含量也呈显着性的恢复，且DBE在辐射后的28d促血红蛋白含量恢复到正常水平；DB和DBE明显减小血小板的下降幅度，加快血小板的恢复，其中DBE在辐射后的14d促血小板恢复到正常水平，DB在辐射后的第21d恢复到正常水平；DB和DBE还明显促进淋巴细胞的恢复。在5Gy60Co-γ辐射小鼠模型中，DBE也可以显着地促进白细胞、红细胞、血小板及淋巴细胞水平的恢复。在两个模型促外周血细胞恢复的结果中，DB和DBE对血小板的恢复作用最为明显。2)DB和DBE改善骨髓和脾脏病理形态学。在4Gy60Co-γ辐射小鼠模型中，DB和DBE明显减少骨髓的脂肪细胞组织增生，调整造血细胞比例，促进骨髓造血细胞的增加。DB和DBE还能明显改善脾脏髓外造血，促进白髓淋巴细胞增加，提高机体免疫力。在5Gy60Co-γ辐射小鼠模型中，DBE也明显改善骨髓组织形态学。3)DB和DBE促进骨髓造血祖细胞集落形成。在4Gy60Co-γ辐射小鼠模型中，DBE在辐射后的第7，14和21d明显促进粒-单系CFU-GM，红系CFU-E和BFU-E，巨核系CFU-Meg三系骨髓造血祖细胞集落的形成，DB在辐射后的第7，14和21d显着增加巨核系祖细胞的集落（CFU-Meg）产率，DB对红系造血祖细胞的集落（CFU-E和BFU-E）形成也有明显促进作用。其中，但DB和DBE对巨核系祖细胞的促进作用最为明显。4)DB和DBE不能促进成纤维细胞集落形成。在4Gy60Co-γ辐射小鼠模型中，DB和DBE在辐射后的7，14和21d对骨髓基质细胞的形态和成纤维细胞集落（CFU-F）形成没有明显影响。5)DB和DBE减轻骨髓细胞周期阻滞。在4Gy60Co-γ辐射小鼠模型中，DB和DBE明显改善骨髓抑制小鼠的细胞周期阻滞，减少骨髓细胞G0/G1期的细胞比例，增加S期和G2/M期的细胞比率。说明DB和DBE显着促进骨髓细胞从静止期进入细胞周期，加速DNA合成，促进有丝分裂过程和骨髓细胞增殖，加快造血损伤的恢复。6)DB和DBE减少骨髓细胞DNA损伤。在4Gy60Co-γ辐射小鼠模型中，DB和DBE显着减少骨髓细胞的多种染色体畸变，如染色单体断裂、染色体断裂、碎片、成环、双着丝粒、多倍体和严重受损细胞（sever damage cell，SDC），以及明显降低发生畸变的细胞比率。DB和DBE还可以显着性的降低嗜多染红细胞微核率（MNPCE）、正染红细胞微核率（MNNCE）的水平，明显增加PCE/（PCE+NCE）比率。证明DB和DBE明显降低辐射诱导的DNA损伤，减少辐射小鼠骨髓细胞基因组的不稳定性，促进骨髓造血恢复。7)DB和DBE降低骨髓抑制小鼠血清细胞因子水平。在4Gy60Co-γ辐射小鼠模型中，DB和DBE对血清细胞因子IL-6，TNF-α和IFN-γ分泌水平具有较好的调节作用，使三者的水平维持在适当的范围内，减少炎症发生，维持造血微环境的稳定，促进造血损伤的恢复。8)DB和DBE减轻骨髓抑制小鼠血清和脾脏氧化应激损伤。在4Gy60Co-γ辐射小鼠模型中，DB和DBE明显增加血清和脾脏中抗氧化物酶（超氧化物歧化酶SOD和过氧化氢酶CAT）的活性，提高抗氧化分子谷胱甘肽（GSH）的水平，以及减少脂质过氧化产物丙二醛（MDA）的水平。DB和DBE可以显着性的降低辐射引起的氧化应激损伤。2DBE对因子饥饿巨核系Mo7e细胞增殖的研究1)DBE（10，50μg/mL）对因子（GM-CSF）饥饿Mo7e细胞的细胞存活率有显着的提升作用。2)DBE明显减轻因子饥饿诱导的Mo7e细胞的周期阻滞，降低Mo7e细胞G0/G1期细胞比率，增加S期及G2/M期细胞比率。说明DBE可明显加速DNA合成和有丝分裂的进程，促进Mo7e细胞的增殖。3)DBE明显减少因子饥饿诱导的Mo7e细胞的早期凋亡和总凋亡。4)DBE显着降低促凋亡蛋白Bax的水平，增加抗凋亡蛋白Bcl-2的水平，并明显降低Bax/Bcl-2的比值。DBE还可以显着性的抑制caspase-3的活化水平。5)DBE可诱导因子饥饿Mo7e细胞中ERK1/2的磷酸化激活，但不能诱导Akt磷酸化激活。用Wortmannin（PI3-K抑制剂）和Imatinib mesylate（酪氨酸激酶抑制剂）预处理Mo7e细胞后，DBE对细胞内Akt的磷酸化水平也没有影响。表明DBE能够诱导ERK1/2激活，而不是Akt，参与促进细胞的存活和增殖。第二部分的研究DB和DBE对抑郁模型大鼠行为学及海马神经发生的研究1)DB和DBE明显改善抑郁模型大鼠的行为学水平。DB（2g/kg b.wt.）和DBE（0.3g/kg b.wt.）明显提高抑郁模型大鼠的糖水消耗量，增加大鼠旷场试验中的水平穿越次数和直立次数，减少强迫游泳不动时间和新奇抑制摄食潜伏期。2)DB和DBE影响海马齿状回神经发生和迁移。DB和DBE促进抑郁模型大鼠海马齿状回BrdU阳性细胞数量增加，其中DB显着促神经细胞增殖。DB和DBE组也明显促进抑郁模型大鼠海马齿状回中DCX蛋白表达增加，促进新生神经细胞的迁移。3)DB和DBE促进海马中相关蛋白水平的增加。DB和DBE明显促进抑郁模型大鼠海马中Ngn2和DCX，神经营养信号通路中BDNF和p-CREB，长时程记忆信号通路中NMDAR和p-CAMKIV蛋白表达水平增加。DB还可以显着促进海马中ERK1/2的活化。综上所述，DB和DBE能促进辐射后小鼠的外周血细胞的恢复、骨髓病理形态的改善及骨髓造血祖细胞的增殖，其防护机制可能与抗DNA损伤、抗凋亡、抗氧化应激和抗炎症的作用相关。首次发现DBE还可以明显提高因子饥饿巨核系Mo7e细胞的存活和增殖，抑制细胞周期阻滞和细胞凋亡，其保护机制可能与降低Bax/Bcl-2比例，抑制caspase-3活化以及激活ERK1/2信号通路相关，但与Akt信号通路无关。同时，DB和DBE可以改善抑郁模型大鼠的行为学，其抗抑郁作用可能与促进海马齿状回神经细胞增殖、迁移，海马神经元可塑性调节以及神经营养信号通路（BDNF/CREB）和长时程记忆信号通路（NMDAR/CAMK IV/CREB）的活化有关。
赵学涛,杨从容,任晓亮,李明,解晓元,巨红妹[10]（2014）在《铯137辐照对库存红细胞表面分子CD35、CD47的影响》文中研究说明目的探讨铯137(137Cs)辐照对库存红细胞表面分子红细胞1型补体受体（complement receptor type1,CR1 or CD35）及CD47分子的影响。方法采集60例健康献血者静脉血,制备去白细胞的悬浮红细胞,并将其分为2组各30例,未辐照组常规4℃保存,辐照组采用25Gy137Cs辐照后4℃保存。分别于第0、7、14、28、35天收集2mL,样本。采用直标法流式细胞术检测红细胞表面分子CD35、CD47。结果辐照组和未辐照组红细胞CD35、CD47的表达均随着4℃保存时间的延长而减少,2组的时点间以及组间·时点间交互作用比较差异均有统计学意义（P<0.01）,但组间差异无统计学意义（P>0.05）。结论 25Gy137Csγ射线辐照对保存期内红细胞CD35、CD47表面分子表达无明显影响。
二、~(60)Co辐照血红细胞CR_1分子数目的变化（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、~(60)Co辐照血红细胞CR_1分子数目的变化（论文提纲范文）
（1）Hlf标记的胚胎新生造血干细胞的功能及命运研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 造血干细胞前体特征基因的筛选及小鼠构建 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 实验设计 |
| 1.3 实验材料 |
| 1.3.1 实验动物 |
| 1.3.2 实验试剂与抗体 |
| 1.3.3 仪器和耗材 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.4.1 小鼠胚胎发育节点划分 |
| 1.4.2 小鼠胚胎取材及解离成单细胞 |
| 1.4.3 流式分析和分选 |
| 1.4.4 实验用溶液配制 |
| 1.5 实验结果 |
| 1.5.1 造血干细胞前体中特异表达基因的筛选 |
| 1.5.2 构建Hlf-tdTomato和Hlf-CrexER小鼠模型 |
| 第二章 HIf表达群体的造血干细胞潜能 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验设计 |
| 2.3 实验材料 |
| 2.3.1 实验动物 |
| 2.3.2 实验试剂与抗体 |
| 2.3.3 仪器和耗材 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.4.1 小鼠胚胎发育节点划分 |
| 2.4.2 小鼠胚胎取材及解离成单细胞 |
| 2.4.3 流式分析和分选 |
| 2.4.4 试剂配制 |
| 2.4.5 免疫组织化学 |
| 2.4.6 OP9-DL1共培养 |
| 2.4.7 孵育产物分析 |
| 2.4.8 尾静脉移植 |
| 2.4.9 移植受体小鼠外周血嵌合检测 |
| 2.4.10 基因型鉴定 |
| 2.4.11 凝胶电泳 |
| 2.5 实验结果 |
| 2.5.1 利用Hlf-tdTomato小鼠进行Hlf基因的表达图谱鉴定 |
| 2.5.2 E10.5时期Hlf-tdTomato小鼠对造血干细胞前体富集检测 |
| 2.5.3 E11时期Hlf-tdTomato小鼠对造血干细胞前体的富集检测 |
| 第三章 表达Hlf的造血干细胞对胚体发育中造血贡献的动力学研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验设计 |
| 3.3 实验材料 |
| 3.3.1 实验动物 |
| 3.3.2 实验试剂与抗体 |
| 3.3.3 仪器与耗材 |
| 3.4 实验方法 |
| 3.4.1 小鼠胚胎发育节点划分 |
| 3.4.2 小鼠胚胎取材及解离成单细胞 |
| 3.4.3 流式分析 |
| 3.4.4 试剂配制 |
| 3.4.5 免疫组织化学 |
| 3.4.6 全胚胎免疫荧光 |
| 3.4.7 外周血5系检测 |
| 3.4.8 小鼠给药方式 |
| 3.4.9 基因型鉴定 |
| 3.4.10 凝胶电泳 |
| 3.5 实验结果 |
| 3.5.1 对新构建Hlf-CrexER遗传谱系示踪小鼠进行表达谱鉴定 |
| 3.5.2 胚胎早期Hlf表达细胞在E10.5、E11.5造血事件中的贡献 |
| 3.5.3 绘制胚胎早期不同时间点Hlf表达细胞对胎肝中造血干细胞贡献的动力学研究 |
| 3.5.4 描绘胚胎早期不同时间点Hlf标记细胞对成体外周血中各血系贡献的动力学特点 |
| 第四章 利用双谱系示踪系统研究胚胎期造血发育 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验设计 |
| 4.3 实验材料 |
| 4.3.1 实验动物 |
| 4.3.2 实验试剂与抗体 |
| 4.3.3 仪器与耗材 |
| 4.4 实验方法 |
| 4.4.1 小鼠胚胎发育节点划分 |
| 4.4.2 小鼠胚胎取材及解离成单细胞 |
| 4.4.3 流式分析 |
| 4.4.4 试剂配制 |
| 4.4.5 外周血各系检测 |
| 4.4.6 基因型鉴定 |
| 4.4.7 凝胶电泳 |
| 4.5 实验结果 |
| 4.5.1 利用双谱系示踪系统小鼠研究Hlf在早期胚胎中的造血贡献 |
| 4.5.2 利用双谱系示踪系统小鼠研究Hlf在胎肝中的造血贡献 |
| 4.5.3 利用双谱系示踪系统小鼠研究Hlf在外周血中的造血贡献 |
| 第五章 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 作者在学期间取得的学术成果 |
| 主要简历 |
| 致谢 |
（2）高脂血症基因表达谱及其不同中医体质人群miRNA表达差异性（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 第一节 中医体质学说研究概况 |
| 一、中医体质的概念 |
| 二、中医体质形成的因素 |
| 三、中医体质分类 |
| 四、中医体质与疾病的关系 |
| 第二节 高脂血症研究现状 |
| 一、高脂血症中医、西医认识 |
| 二、高脂血症人群与中医体质分布特点研究现状 |
| 三、高脂血症基因表达谱及miRNA差异表达研究进展 |
| 四、高脂血症不同体质人群分子生物学研究现状 |
| 五、高脂血症与动脉粥样硬化性心脑血管疾病相关性研究 |
| 第二章 高脂血症基因表达谱研究 |
| 第一节 研究设计与研究内容 |
| 一、研究设计 |
| 二、主要研究内容 |
| 第二节 样本量估算 |
| 第三节 研究对象 |
| 一、人群纳入标准 |
| 二、排除标准 |
| 第四节 研究方法 |
| 一、研究分组 |
| 二、评价指标 |
| 三、实验方法 |
| 四、数据统计与分析 |
| 第五节 实验结果 |
| 一、研究对象及生物样本纳入情况 |
| 二、一般临床资料 |
| 三、实验数据质量控制结果 |
| 四、基因表达谱分析 |
| 五、差异表达基因qRT-PCR实验验证 |
| 第六节 讨论 |
| 一、高脂血症人群临床特点分析 |
| 二、高脂血症差异表达基因分析 |
| 三、高脂血症差异表达基因GO功能注释和KEGG通路富集分析 |
| 第三章 高脂血症不同中医体质人群MIRNA表达差异性研究 |
| 第一节 研究设计与研究内容 |
| 一、研究设计 |
| 二、主要研究内容 |
| 第二节 样本量估算 |
| 第三节 研究对象 |
| 一、人群纳入标准 |
| 二、排除标准 |
| 第四节 研究方法 |
| 一、研究分组 |
| 二、评价指标 |
| 三、实验方法 |
| 四、统计分析 |
| 第五节 研究结果 |
| 一、病例纳入情况 |
| 二、人口学特征及一般临床资料 |
| 三、血清样本总RNA的抽提质检结果 |
| 四、miRNA PCR Array芯片实验分析 |
| 第六节 讨论 |
| 一、高脂血症不同体质人群临床特点分析 |
| 二、高脂血症三种不同体质类型共有的差异表达miRNA及其靶基因和富集通路分析 |
| 三、高脂血症虚性体质特有差异表达miRNA及其靶基因和富集通路分析 |
| 四、高脂血症两种体质人群间特有差异表达miRNA及其靶基因和富集通路分析 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 附件 |
（3）基于生物表面展示策略的功能化纳米载体的构建和应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 序言 |
| 1.1 纳米材料概述 |
| 1.2 功能化纳米粒子简介 |
| 1.2.1 功能化纳米粒子的用途 |
| 1.2.2 功能化纳米粒子上偶联配体的种类 |
| 1.3 纳米材料功能化及其表面修方法概述 |
| 1.3.1 表面包被法 |
| 1.3.2 物理吸附法 |
| 1.3.3 化学偶联法 |
| 1.3.4 针对蛋白配体的纳米偶联方法 |
| 1.4 纳米仿生材料综述 |
| 1.4.1 病毒拟态纳米材料 |
| 1.4.2 细胞拟态纳米材料 |
| 1.4.3 细菌拟态纳米材料 |
| 1.4.4 其他生物拟态纳米材料 |
| 1.5 生物表面展示技术的概述 |
| 1.5.1 微生物表面展示系统 |
| 1.5.2 细胞表面展示系统 |
| 1.5.3 蛋白纳米笼表面展示系统 |
| 1.6 选题的意义、目的和思路 |
| 第二章 病毒拟态纳米囊泡作为通用的疫苗抗原展示平台 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验仪器和试剂 |
| 2.2.1 实验仪器 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.2.3 实验质粒、细胞、菌株及小鼠 |
| 2.2.4 常用实验试剂的配制 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 常用的分子克隆实验方法 |
| 2.3.2 HA抗原基因的细胞转染 |
| 2.3.3 流感病毒血凝素蛋白HA在细胞膜上定位的鉴定 |
| 2.3.4 流感病毒拟态纳米囊泡的制备和纯化 |
| 2.3.5 流感病毒拟态纳米囊泡的材料学相关表征 |
| 2.3.6 流感病毒拟态纳米囊泡的凝血酶活性检测 |
| 2.3.7 小鼠的免疫及免疫效果的评价 |
| 2.4 实验结果与分析 |
| 2.4.1 激光共聚焦显微镜鉴定HA抗原的细胞定位 |
| 2.4.2 病毒拟态纳米囊泡的冷冻电镜成像 |
| 2.4.3 病毒拟态纳米囊泡的免疫共沉淀检测 |
| 2.4.4 凝血酶活性检测 |
| 2.4.5 小鼠免疫血清的总抗体滴度测定 |
| 2.4.6 中和抗体滴度检测 |
| 2.4.7 血凝抑制效果的测试 |
| 2.4.8 小鼠的攻毒实验 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 第三章 外泌体拟态纳米囊泡作为肿瘤靶向的药物递送平台 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验仪器和试剂 |
| 3.2.1 实验仪器 |
| 3.2.2 实验试剂 |
| 3.2.3 实验质粒、细胞、菌株及小鼠 |
| 3.2.4 常用实验试剂的配制 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 质粒构建及基因转染 |
| 3.3.2 靶向蛋白配体的细胞定位 |
| 3.3.3 外泌体拟态纳米囊泡的制备 |
| 3.3.4 外泌体拟态纳米囊泡的材料学表征 |
| 3.3.5 体外细胞靶向结合实验以及光热治疗 |
| 3.3.6 体外细胞毒性检测 |
| 3.3.7 小鼠肿瘤模型的建立 |
| 3.3.8 多模态分子成像及成像指导下的光热治疗 |
| 3.3.9 阿霉素药物的生物分布 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 质粒构建 |
| 3.4.2 改造后的hEGF的细胞定位 |
| 3.4.3 表面活化剂诱导细胞出芽产生微囊泡 |
| 3.4.4 不同表面活化剂对囊泡粒径的影响 |
| 3.4.5 外泌体拟态纳米囊泡的其他表征 |
| 3.4.6 外泌体拟态纳米囊泡的细胞靶性以及生物活性的检测 |
| 3.4.7 细胞的靶向光热治疗 |
| 3.4.8 肿瘤的多模态成像 |
| 3.4.9 成像指导下的活体光热治疗 |
| 3.4.10 HER2靶向的药物运输 |
| 3.4.11 HER2靶向的小鼠肿瘤治疗 |
| 3.4.12 小鼠各脏器的H&E染色 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 第四章 展示PD-L1抗体的、细胞膜包裹的氧化锰纳米粒子用作肿瘤的放疗与免疫联合治疗,以诱导远端效应 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验仪器和试剂 |
| 4.2.1 实验仪器 |
| 4.2.2 实验试剂及材料 |
| 4.2.3 实验质粒、细胞、菌株及小鼠 |
| 4.2.4 常用实验试剂的配制 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 MnO_2纳米粒子的合成 |
| 4.3.2 骨髓间充质干细胞的培养与基因工程修饰 |
| 4.3.3 骨髓间充质干细胞(MSC)来源的膜囊泡的提取 |
| 4.3.4 细胞膜包裹的氧化锰纳米粒子的制备 |
| 4.3.5 膜包裹氧化锰纳米粒子的表征 |
| 4.3.6 体外细胞实验 |
| 4.3.7 活体成像 |
| 4.3.8 肿瘤放疗与免疫治疗 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 PLV-aPD-L1质粒的构建 |
| 4.4.2 PD-L1 ScFv在细胞中的定位 |
| 4.4.3 透射电镜图 |
| 4.4.4 膜包裹氧化锰纳米颗粒的其他表征 |
| 4.4.5 体外细胞靶向性以及免疫激活 |
| 4.4.6 体外放疗增敏检测 |
| 4.4.7 放疗后的细胞杀伤效果 |
| 4.4.8 活体MR成像 |
| 4.4.9 活体荧光成像 |
| 4.4.10 远端效应的检测 |
| 4.4.11 放疗后细胞因子的检测 |
| 4.5 讨论与小结 |
| 第五章 总结和展望 |
| 附件 |
| 参考文献 |
| 缩写词 |
| 致谢 |
（4）抗肿瘤药物SAHA耐药机制的研究以及新型标记和追踪突变克隆的嵌合体分析方法（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词索引 |
| 抗肿瘤药物SAHA耐药机制的研究 |
| 1. 绪论 |
| 1.1 组蛋白去乙酰化酶 |
| 1.2 组蛋白去乙酰化酶HDAC6与肿瘤等疾病的发生有关 |
| 1.3 组蛋白去乙酰化酶抑制剂在肿瘤治疗中的应用及耐药性 |
| 1.4 原癌基因K-ras突变与肿瘤发生 |
| 2. 实验材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 常用仪器设备 |
| 2.1.2 常用实验耗材 |
| 2.1.3 主要实验试剂与抑制剂 |
| 2.1.4 常用抗体信息 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 K-ras稳转细胞系的构建 |
| 2.2.3 测序与K-ras突变的检测 |
| 2.2.4 免疫印迹(WB) |
| 2.2.5 荧光定量PCR |
| 2.2.6 细胞生长的检测 |
| 2.2.7 体外克隆形成实验 |
| 2.2.8 小鼠荷瘤实验 |
| 3. 实验结果与讨论 |
| 3.1 结肠癌病人中K-ras基因突变与HDAC6高表达相关 |
| 3.2 原癌基因K-ras突变诱导小鼠成纤维细胞中HDAC6和c-myc表达 |
| 3.3 原癌基因K-ras转化的细胞耐受SAHA诱导的生长抑制 |
| 3.4 抑制K-ras的活性使肿瘤细胞对SAHA诱导的抑制作用更敏感 |
| 3.5 原癌基因K-ras依赖于MAKP信号通路调节HDAC6和c-myc表达 |
| 3.6 总结与讨论 |
| 新型标记和追踪突变克隆的嵌合体分析方法 |
| 1. 嵌合体的研究背景 |
| 1.1 嵌合体现象在自然界中普遍存在 |
| 1.2 嵌合体在果蝇遗传学研究中的应用及发展 |
| 1.3 嵌合体分析在小鼠神经系统发育及肿瘤发生中的应用 |
| 2. 实验材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 常用仪器设备 |
| 2.1.2 常用实验耗材 |
| 2.1.3 主要试剂信息 |
| 2.1.4 流式抗体 |
| 2.1.5 免疫荧光抗体 |
| 2.1.6 引物信息 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 肠道固有层淋巴细胞的分离 |
| 2.2.2 荧光定量PCR |
| 2.2.3 H&E染色 |
| 2.2.4 细胞甩片和Giemsa染色 |
| 2.2.5 免疫荧光染色 |
| 2.2.6 流式染色及分析 |
| 3. 新型嵌合体分析系统 |
| 3.1 嵌合体分析系统的建立 |
| 3.2 嵌合体系统的基本表达模式 |
| 3.3 嵌合体表达模式维持稳定 |
| 3.4 嵌合体分析系统可有效诱导目的基因敲除 |
| 3.5 嵌合体分析系统的总结与讨论 |
| 4. 嵌合体分析系统在肿瘤研究中的应用 |
| 4.1 研究背景 |
| 4.1.1 DNA甲基化表观修饰 |
| 4.1.2 衰老导致的克隆增殖和肿瘤发生 |
| 4.1.3 Tet2突变与人类衰老和血液肿瘤发生有关 |
| 4.2 实验结果与讨论 |
| 5. 嵌合体分析系统在肠道免疫细胞发育研究中的应用 |
| 5.1 研究背景 |
| 5.1.1 肠道组成和功能多样性 |
| 5.1.2 肠道巨噬细胞的发育及其功能 |
| 5.1.3 转录调节因子Id3在免疫细胞发育中的作用 |
| 5.2 实验结果与讨论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 科研成果目录 |
（5）猪链球菌溶血素介导的补体逃逸机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语表(Abbreviation) |
| 1 文献综述 |
| 1.1 补体系统 |
| 1.1.1 补体系统的概述 |
| 1.1.2 补体激活途径 |
| 1.1.3 补体蛋白C3a和C5a |
| 1.1.4 补体蛋白C3a与C5a的受体 |
| 1.2 趋化作用 |
| 1.3 病原菌的补体逃逸机制研究进展 |
| 1.3.1 捕获宿主的补体调节蛋白 |
| 1.3.2 干预补体免疫的起始阶段 |
| 1.3.3 利用蛋白酶干预补体 |
| 1.3.4 抑制补体效应扩大 |
| 1.3.5 在C5水平上抑制 |
| 1.3.6 干预补体受体 |
| 1.4 猪链球菌概述 |
| 1.4.1 猪链球菌病原特征 |
| 1.4.2 猪链球菌流行病学特征 |
| 1.4.3 猪链球菌的致病机理研究进展 |
| 1.5 猪链球菌溶血素(SLY)的研究进展 |
| 1.6 病原菌与宿主蛋白质相互作用的研究 |
| 1.6.1 细菌双杂交系统 |
| 1.6.2 表面等离子共振(SPR) |
| 2 研究目的与意义 |
| 3 材料与方法 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 质粒与菌株 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 常用试剂配制 |
| 3.1.4 主要仪器设备 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 重组质粒的构建 |
| 3.2.2 细菌双杂交筛选 |
| 3.2.3 重组蛋白的表达与纯化 |
| 3.2.4 溶血活性实验 |
| 3.2.5 内毒素的去除与检测 |
| 3.2.6 Far Western Blot |
| 3.2.7 ELISA验证蛋白互作 |
| 3.2.8 流式细胞术 |
| 3.2.9 THP-1单核细胞趋化实验 |
| 3.2.10 统计学分析 |
| 4 结果与分析 |
| 4.1 细菌双杂交验证SLY与C3aR和C5aR的相互作用 |
| 4.1.1 重组诱饵质粒pBT-C3aR、pBT-C5aR的构建与鉴定 |
| 4.1.2 细菌双杂交筛选文库的制备与鉴定 |
| 4.1.3 细菌双杂交筛选结果 |
| 4.2 SL与C3aR和C5aR以及其胞外片段的重组质粒构建 |
| 4.2.1 C3aR和C5aR跨膜结构分析 |
| 4.2.2 重组质粒的构建 |
| 4.3 SLY与C3aR和C5aR胞外片段的表达与纯化 |
| 4.3.1 SLY的表达与纯化 |
| 4.3.2 C3aR及其胞外片段与C5aR及其胞外片段的表达与纯化 |
| 4.4 重组蛋白SLY溶血活性验证 |
| 4.5 THP-1细胞表面C3aR和C5aR表达的检测 |
| 4.6 SLY与C3aR和C5aR的体外互作 |
| 4.7 SLY与C3aR_e2相互作用的ELISA鉴定 |
| 4.8 重组蛋白SLY对THP-1细胞趋化的影响 |
| 4.9 SLY突变株与野生株对THP-1细胞趋化的影响 |
| 5 讨论 |
| 5.1 SLY蛋白与细菌致病性的关系 |
| 5.2 SLY蛋白与免疫逃逸的关系 |
| 5.3 SLY蛋白对C3a、C5a趋化作用的影响 |
| 5.4 SLY蛋白与C3aR、C5aR在细胞水平互作的研究 |
| 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（6）红细胞补体受体1基因单核苷酸多态性及表达水平与骨关节结核的相关性研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英汉缩略词对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 骨关节结核患者红细胞表面免疫分子及T细胞亚群检测 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.1.1 病例组 |
| 1.1.2 对照组 |
| 1.1.3 排除标准 |
| 1.1.4 知情同意 |
| 1.2 主要试剂与耗材 |
| 1.3 主要仪器与设备 |
| 1.4 研究方法 |
| 1.4.1 标本采集 |
| 1.4.2 试剂配制 |
| 1.4.3 流式细胞术检测红细胞表面免疫分子表达水平 |
| 1.4.4 流式细胞术检测外周血T细胞亚群 |
| 1.4.5 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 骨关节结核组与对照组年龄的比较 |
| 2.2 骨关节结核组与对照组性别分布的比较 |
| 2.3 骨关节结核组与对照组红细胞CD35、CD44、CD55、CD58、CD59的变化 |
| 2.4 骨关节结核组与对照组T细胞亚群的变化 |
| 2.5 两组红细胞表面免疫分子与T细胞亚群的相关性分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 骨关节结核患者红细胞表面免疫分子表达情况 |
| 3.2 骨关节结核患者T细胞亚群表达情况 |
| 3.3 骨关节结核患者红细胞表面免疫分子与T细胞亚群的关系 |
| 4 结论 |
| 第二部分 红细胞补体受体1基因单核苷酸多态性与骨关节结核易感性的关系 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 主要试剂与耗材 |
| 1.3 主要仪器与设备 |
| 1.4 研究方法 |
| 1.4.1 基因组DNA提取 |
| 1.4.2 DNA的定量 |
| 1.4.3 引物设计与合成 |
| 1.4.4 PCR扩增 |
| 1.4.5 SNaPshot SNP分型 |
| 1.4.6 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 红细胞CR1基因各位点的检测结果 |
| 2.2 两组Hardy-Weinberg遗传平衡检测 |
| 2.3 两组rs11118167 C/T位点基因型和等位基因分布频率比较 |
| 2.4 两组rs2274567 G/A位点基因型和等位基因分布频率比较 |
| 2.5 两组rs2296160 G/A位点基因型和等位基因分布频率比较 |
| 2.6 两组rs4844600 G/A位点基因型和等位基因分布频率比较 |
| 2.7 两组rs9429945 C/T位点基因型和等位基因分布频率比较 |
| 2.8 两组多态位点之间的单倍型分析 |
| 2.9 骨关节结核组各基因型间红细胞CR1水平的比较 |
| 2.10 对照组各基因型间红细胞CR1水平的比较 |
| 3 讨论 |
| 3.1 红细胞CR1基因多态性对骨关节结核易感性的影响 |
| 3.2 红细胞CR1基因多态性对红细胞CR1表达的影响 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 攻读学位期间参与的课题 |
| 致谢 |
（7）猪红细胞免疫粘附受体的鉴定与检测（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 文献综述 |
| 1 红细胞免疫概述 |
| 1.1 红细胞免疫的提出 |
| 1.2 红细胞的免疫粘附分子 |
| 1.3 红细胞的免疫功能 |
| 1.4 红细胞免疫力的常用检测方法 |
| 2 人CR1的研究进展 |
| 2.1 人CR1研究概述 |
| 2.2 人CR1的特征 |
| 2.3 人CR1的研究意义及临床应用 |
| 3 动物红细胞免疫研究进展 |
| 3.1 灵长类动物 |
| 3.2 非灵长类动物 |
| 前言 |
| 试验材料及方法 |
| 1 试验材料 |
| 1.1 试验动物与菌株 |
| 1.2 试验主要试剂及材料 |
| 1.3 试验仪器 |
| 1.4 试验试剂的配制 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 猪红细胞天然CR1-like分子检测 |
| 2.2 猪红细胞免疫粘附功能检测 |
| 2.3 猪红细胞CR1-like免疫沉淀 |
| 试验结果 |
| 1、猪红细胞天然CR1-like分子检测 |
| 2、猪红细胞免疫粘附GFP-E.coli检测结果 |
| 3、猪红细胞免疫粘附GFP-E.coli统计结果 |
| 4、猪红细胞免疫粘附乳胶颗粒复合物镜检结果 |
| 5、猪红细胞CR1-like免疫沉淀结果 |
| 分析和讨论 |
| 1、荧光免疫化学验证猪红细胞膜表面存在CR1-like |
| 2、猪红细胞免疫粘附复合物功能 |
| 3、猪红细胞CR1-like分子量多态性 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| Abstract |
| 致谢 |
| 附录 |
（8）CD47在自身免疫肾炎中的作用及炎症条件下SIRPα的表达对吞噬作用的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 第一节 CD47-SIRPα相互作用研究进展 |
| 一、SIRPα |
| 1. SIRPα的结构 |
| 2. SIRP家族 |
| 3. SIRPα表达所受到的调控 |
| 二、CD47 |
| 1. CD47的结构 |
| 2. CD47的配体 |
| 三、CD47-SIRPα相互作用 |
| 1. 红细胞的吞噬 |
| 2. 移植造血干细胞的吞噬 |
| 3. 肿瘤细胞的吞噬 |
| 4. 免疫系统中的作用 |
| 第二节 MicroRNA的研究进展 |
| 一、miRNA的定义 |
| 二、miRNA的合成 |
| 三、miRNA的的作用机制 |
| 四、miRNA的生物学功能 |
| 第三节 细胞吞噬 |
| 一、吞噬细胞对凋亡细胞的识别 |
| 二、清除凋亡细胞所涉及的几类信号 |
| 1. “Find me"信号 |
| 2. “Eat me”信号 |
| 3. “Don't eat me"信号 |
| 参考文献 |
| 第二章 实验部分 |
| 第一节 CD47在自身免疫性肾炎中的研究 |
| 一、引言 |
| 二. 材料和方法 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 三. 实验结果 |
| 1. CD47敲除延长Fas~(lpr)小鼠的寿命减缓病程发展 |
| 2. CD47敲除减轻狼疮小鼠脾脏肿大 |
| 3. CD47敲除减轻狼疮小鼠自身抗体产生 |
| 4. CD47敲除影响小鼠IgG的产生 |
| 5. CD47敲除影响小鼠生发中心的形成 |
| 6. CD47敲除影响小鼠CD4~+CXCR5~+T淋巴细胞的产生 |
| 7. CD47抗体降低免疫小鼠抗体的产生 |
| 8. CD47抗体加重Fas~(lpr)小鼠的病情 |
| 四. 讨论 |
| 六. 参考文献 |
| 第二节 炎症条件下调节SIRPα对吞噬作用的影响 |
| 一、引言 |
| 二. 材料和方法 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 三. 实验结果 |
| 1. 炎性因子调节巨噬细胞中SIRPα的表达 |
| 2. SIRPα调节的信号通路 |
| 3. miR-17、miR-20a和miR-106a调控巨噬细胞SIRPα的表达独立于c-myc |
| 4. 巨噬细胞SIRPα转录水平的调控 |
| 5. SIRPα变化对巨噬细胞功能的影响 |
| 6. SIRPα变化影响巨噬细胞对红细胞的吞噬 |
| 7. SIRPα变化影响巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬 |
| 四. 讨论 |
| 五. 进一步的实验计划 |
| 六. 参考文献 |
| 攻读博士学位期间发表成果 |
| 专利 |
| 致谢 |
（9）龙血竭及其提取物的药效作用和机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英汉缩略词概览表 |
| 第一部分 龙血竭及其提取物对辐射造血损伤的防护作用和机制研究 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 国内外研究现状及发展趋势 |
| 1.1.1 电离辐射 |
| 1.1.2 电离辐射生物学效应 |
| 1.1.3 电离辐射对造血系统而影响 |
| 1.1.4 抗辐射造血损伤药物研究进展 |
| 1.1.5 龙血竭（DB）和龙血竭提取物（DBE） |
| 1.2 课题研究目的与意义 |
| 1.3 课题研究基本思路 |
| 第2章 龙血竭及其提取物对辐射诱导的骨髓抑制小鼠的造血保护作用 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要试剂和材料 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.1.4 主要指标和实验方法 |
| 2.1.5 数据的统计分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 DB 和 DBE 促进骨髓抑制小鼠外周血细胞水平的恢复 |
| 2.2.2 DB 和 DBE 改善骨髓抑制小鼠骨髓和脾脏病理组织形态学 |
| 2.2.3 DB 和 DBE 促进骨髓抑制小鼠造血祖细胞集落形成单位的形成 |
| 2.2.4 DB 和 DBE 不能促进骨髓抑制小鼠骨髓基质细胞集落形成单位的形成 |
| 2.2.5 DB 和 DBE 减少对骨髓抑制小鼠骨髓细胞细胞周期的阻滞 |
| 2.2.6 DB 和 DBE 减少骨髓抑制小鼠骨髓细胞染色体畸变 |
| 2.2.7 DB 和 DBE 减少骨髓抑制小鼠骨髓细胞微核率 |
| 2.2.8 DB 和 DBE 减少骨髓抑制小鼠血清细胞因子水平 |
| 2.2.9 DB 和 DBE 减少骨髓抑制小鼠血清和脾脏氧化应激损伤 |
| 第3章 龙血竭提取物促进巨核细胞系 Mo7e 细胞增殖的研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验细胞 |
| 3.1.2 主要试剂和材料 |
| 3.1.3 主要仪器 |
| 3.1.4 主要指标和实验方法 |
| 3.1.5 数据的统计分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 DBE 促进因子饥饿 Mo7e 细胞的存活率 |
| 3.2.2 DBE 减少因子饥饿 Mo7e 细胞周期阻滞 |
| 3.2.3 DBE 减少因子饥饿 Mo7e 细胞凋亡 |
| 3.2.4 DBE 降低因子饥饿 Mo7e 细胞促凋亡蛋白水平以及增加抗凋亡蛋白水平 |
| 3.2.5 DBE 减少因子饥饿 Mo7e 细胞 caspase-3 的活化水平 |
| 3.2.6 DBE 促进因子饥饿 Mo7e 细胞 ERK1/2 的活化 |
| 3.2.7 DBE 不能促进因子饥饿 Mo7e 细胞 AkT 的活化 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 DB 和 DBE 对辐射诱导的骨髓抑制小鼠的造血保护作用 |
| 4.2 DBE 对因子饥饿巨核系 Mo7e 细胞增殖的研究 |
| 第二部分 龙血竭及其提取物对抑郁模型大鼠行为学及海马神经发生的影响 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 国内外研究现状及发展趋势 |
| 1.1.1 抑郁症概述 |
| 1.1.2 神经营养因子与神经发生学说 |
| 1.1.3 龙血竭（DB）和龙血竭提取物（DBE） |
| 1.1.4 天然药物对抑郁动物海马神经发生的影响 |
| 1.2 课题研究目的与意义 |
| 1.3 课题研究基本思路 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 主要试剂和材料 |
| 2.3 主要仪器 |
| 2.4 主要指标和实验方法 |
| 2.4.1 大鼠慢性不可预见应激模型的制备 |
| 2.4.2 实验分组和给药方式 |
| 2.4.3 行为学检测方法 |
| 2.4.4 鼠脑取材 |
| 2.4.5 BrdU 免疫染色方法 |
| 2.4.6 DCX 免疫染色 |
| 2.4.7 组织海马蛋白样品的制备 |
| 2.4.8 蛋白含量的测定 |
| 2.4.9 western-blot 鉴定蛋白质方法 |
| 2.5 数据的统计分析 |
| 第3章 结果 |
| 3.1 DB 和 DBE 提高抑郁模型大鼠蔗糖饮水偏好程度 |
| 3.2 DB 和 DBE 增加抑郁模型大鼠旷场实验的水平穿越次数和直立次数 |
| 3.3 DB 和 DBE 减少抑郁模型大鼠强迫游泳不动时间 |
| 3.4 DB 和 DBE 减少抑郁模型大鼠新奇抑制摄食的潜伏期 |
| 3.5 DB 促进抑郁模型大鼠海马齿状回神经细胞的增殖 |
| 3.6 DB 和 DBE 促进抑郁模型大鼠海马神经细胞的迁移 |
| 3.7 DB 和 DBE 对抑郁模型大鼠海马中相关蛋白水平的影响 |
| 3.7.1 DB 和 DBE 促进抑郁模型大鼠海马 Ngn2 和 DCX 蛋白水平的表达 |
| 3.7.2 DB 和 DBE 激活抑郁模型大鼠海马神经营养信号通路 |
| 3.7.3 DB 和 DBE 激活抑郁模型大鼠海马长时程记忆信号通路 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 DB 和 DBE 改善抑郁模型大鼠的行为学水平 |
| 4.2 DB 促进抑郁模型大鼠海马齿状回神经细胞的增殖 |
| 4.3 DB 促进抑郁模型大鼠海马神经细胞的分化和迁移 |
| 4.4 DB 和 DBE 激活抑郁模型大鼠海马神经营养信号通路 |
| 4.5 DB 和 DBE 激活抑郁模型大鼠海马长时程记忆信号通路 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表论文与研究成果清单 |
| 致谢 |
（10）铯137辐照对库存红细胞表面分子CD35、CD47的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 标本来源: |
| 1.2 红细胞CD35、CD47分子水平测定: |
| 1.3 统计学方法; |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
四、~(60)Co辐照血红细胞CR_1分子数目的变化（论文参考文献）
- [1]Hlf标记的胚胎新生造血干细胞的功能及命运研究[D]. 汤万波. 军事科学院, 2021(02)
- [2]高脂血症基因表达谱及其不同中医体质人群miRNA表达差异性[D]. 曾丽玲. 广州中医药大学, 2020(06)
- [3]基于生物表面展示策略的功能化纳米载体的构建和应用[D]. 张鹏飞. 厦门大学, 2019(08)
- [4]抗肿瘤药物SAHA耐药机制的研究以及新型标记和追踪突变克隆的嵌合体分析方法[D]. 王群. 上海交通大学, 2018
- [5]猪链球菌溶血素介导的补体逃逸机制研究[D]. 赵丽阳. 华中农业大学, 2016(05)
- [6]红细胞补体受体1基因单核苷酸多态性及表达水平与骨关节结核的相关性研究[D]. 乔宁宁. 桂林医学院, 2016(02)
- [7]猪红细胞免疫粘附受体的鉴定与检测[D]. 崔姣艳. 山西农业大学, 2015(12)
- [8]CD47在自身免疫肾炎中的作用及炎症条件下SIRPα的表达对吞噬作用的影响[D]. 石磊. 南京大学, 2015(01)
- [9]龙血竭及其提取物的药效作用和机制研究[D]. 冉媛媛. 北京理工大学, 2015(07)
- [10]铯137辐照对库存红细胞表面分子CD35、CD47的影响[J]. 赵学涛,杨从容,任晓亮,李明,解晓元,巨红妹. 河北医科大学学报, 2014(12)