一、香菇多糖对大鼠肺泡巨噬细胞活性的影响（论文文献综述）
刘成荣,刘丽香[1]（2021）在《香菇多糖对氨氮胁迫泥鳅抗氧化功能的影响》文中指出多糖作为一种免疫增强剂,可提高动物适应各种环境胁迫,但多糖对氨氮胁迫下泥鳅（Misgurnus anguillicaudatus）抗氧化功能的影响过程尚不清楚。将泥鳅分别暴露于含有0、100、200、300 mg·L-1氨氮浓度的水中40天。试验分实验组和对照组:实验组中,泥鳅饲喂含1.0 mg·g-1香菇多糖的饲料;而对照组中,泥鳅饲喂不含香菇多糖的饲料。在实验的第0、5、10、15、20、25、30、35和40天分别取样,测定氨氮胁迫下泥鳅肝脏和肌肉的超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、酸性磷酸酶（ACP）和碱性磷酸酶（ALP）活性,以了解香菇多糖对氨氮胁迫泥鳅抗氧化功能的影响。结果表明:100 mg·L-1实验组泥鳅的肝脏SOD、CAT、ACP和ALP、肌肉CAT活性均分别显着高于它们的对照组（P<0.05）;第30天,100 mg·L-1实验组的肌肉SOD、CAT,肝脏SOD、CAT均达到最高,分别为（26.0±2.3）、（39.0±3.1）、（37.0±3.8）、（45.0±3.6） U·g-1;第35天,200 mg·L-1实验组泥鳅肌肉ACP、ALP、肝脏ACP和100 mg·L-1实验组泥鳅肝脏ALP达到最高,分别为（23.0±2.1）、（39.0±4.1）、（33.0±2.4）和（46.0±1.8） U·g-1。香菇多糖可提高氨氮胁迫下泥鳅的抗氧化能力。
徐慧,杨新宇,赵哲辉,王琰[2]（2021）在《多糖药物体内代谢及PK/PD关键技术研究的进展与思考》文中研究表明多糖药物是一类安全有效的天然药物,具有抗肿瘤、免疫调节、抗氧化等广泛的药理活性,目前受到越来越多的关注。然而,由于多糖本身的相对分子质量大,大部分没有紫外吸收和荧光基团,使得多糖的定性和定量分析均比较困难。此外,内源性的糖类物质也可能对生物样品中的多糖测定造成一定干扰,因此,多糖药物的体内代谢及PK/PD关键技术一直是研究热点。本文综合近年来发表的相关文献,对多糖药物的生物学活性、药代动力学特征进行综述,提出肠道菌可能是影响多糖药物代谢及药效的潜在"器官",并对肠道菌介导的多糖药物体内代谢及PK/PD关键技术研究提出思考,以期为多糖药物的药代、药效及分子机制的研究提供更多可参考的科学思路。
李健[3]（2021）在《PPARγ参与有氧运动调控chemerin改善COPD膈肌功能障碍的机制研究》文中进行了进一步梳理研究目的慢性阻塞性肺疾病（COPD）是一种常见的高发的慢性系统性疾病,除对肺局部的损伤外,COPD还能造成多种肺外损伤,其中膈肌功能障碍是造成呼吸功能衰退的重要因素。系统性炎症是COPD膈肌功能障碍的关键环节。运动训练是目前COPD膈肌功能障碍康复治疗的有效手段,而运动对炎症反应的调节作用也成为其改善膈肌功能障碍的作用途径之一,然而这一作用的具体机制目前还尚未阐明。近来,脂肪因子在机体中的生物学效应引起了诸多关注,其中chemerin与COPD间的紧密关系也被逐步证实,chemerin是COPD炎症反应不可或缺的一环。运动对chemerin/CMKLR1信号轴的调控效应在其他研究中已被证实,但目前对运动调控chemerin/CMKLR1轴的上游信号仍无明确定论。研究显示,在肥胖与糖尿病模型中PPARγ被证实是运动调控chemerin/CMKLR1的上游信号,参与运动改善糖脂代谢过程,而PPARγ的药理性配基也被用于COPD患者的临床管理中。但对于COPD膈肌功能障碍而言,PPARγ是否是运动调控chemerin/CMKLR1改善COPD膈肌功能障碍的上游信号尚不清楚,且值得探讨。研究方法第一部分实验:运动对COPD大鼠膈肌功能障碍和对PPARγ-chemerin/CMKLR1通路及其下游炎性因子的影响两月龄雄性SD大鼠32只,随机分为空白对照组（CG）、模型对照组（MG）、有氧运动组（AEG）和抗阻运动组（REG）,每组8只。MG、AEG和REG采用香烟烟雾暴露法建立COPD大鼠模型;模型建立后,AEG和REG分别接受为期9周的有氧运动训练或抗阻运动训练;有氧运动采取游泳的方式进行;抗阻运动采用爬梯运动。MG在运动干预期间自由活动,CG在整个研究过程中均不接受任何干预。实验过程中每月检测大鼠体重。运动训练结束后对大鼠肺功能、膈肌功能进行检测;取材后对大鼠肺与膈肌HE染色观察组织结构变化;Western blot法检测大鼠膈肌中PPARγ、chemerin、CMKLR1、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、atrogin-1、Mu RF1以及Myo D1的蛋白表达情况。第二部分实验:机械牵拉对LPS诱导炎症环境下L6细胞增殖水平及PPARγ-chemerin/CMKLR1通路及下游因子的影响1.筛选能诱导L6成肌细胞低增殖活性的LPS浓度将L6细胞接种于96孔板中,37℃培养箱中培养24 h,分别设置不同浓度的LPS培养孔,每个浓度设置6个复孔,每孔添加10μL不同浓度LPS溶液,37℃细胞培养箱中培养24 h。CCK-8检测细胞增殖水平。2.机械牵拉对LPS诱导炎症环境下L6细胞的增殖水平影响将L6细胞随机分为空白对照组（CG）、LPS对照组（LG）和LPS牵拉组（LSG）,LSG在Flexcell牵拉装置接受拉伸强度为15%,频率为0.5 Hz,持续时间为6 h的周期性机械牵拉。CG与LG在相同条件下培养,不予以细胞牵拉刺激。牵拉结束后24 h,CCK-8试剂盒检测细胞增殖活性;收集细胞,Western blot法检测各组细胞中PPARγ、chemerin、CMKLR1、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、atrogin-1、Mu RF1以及Myo D1的蛋白表达情况。第三部分实验:PPARγ在机械牵拉调控chemerin/CMKLR1信号促LPS诱导炎症环境下L6细胞增殖中的作用1.筛选GW9662与罗格列酮溶液影响炎症环境下L6成肌细胞增殖水平的适宜浓度L6成肌细胞接种在96孔板中,贴壁后加入LPS溶液,继续培育24 h,将细胞随机分成10组,包括LPS对照组、DMSO对照组以及4种浓度梯度的罗格列酮和GW9662各自4组细胞;加入药物培养24 h后CCK-8试剂盒检测各组别细胞的增殖活性。2.调节PPARγ蛋白表达对机械应力提升炎症培养环境下L6成肌细胞活性以及PPARγ-chemerin/CMKLR1信号的影响将L6细胞随机分为空白对照组（CG）,LPS对照组（LG）,罗格列酮对照组（RG）,罗格列酮+牵拉组（RSG）,GW9662对照组（GWG）,GW9662+牵拉组（GSG）;两组牵拉组在Flexcell牵拉装置中进行机械牵拉干预,所有对照组在相同环境中培养,不予细胞牵拉刺激。牵拉结束后24 h进行指标检测,指标同第二部分。研究结果1.运动对COPD大鼠膈肌功能障碍和对PPARγ-chemerin/CMKLR1通路及其下游炎性因子的影响（1）相较MG,AEG大鼠肺功能与膈肌功能显着提升（p<0.05）,膈肌组织结构改善;REG大鼠肺功能同样提升（p<0.05）,但膈肌功能改善不明显。（2）相较MG,AEG和REG大鼠膈肌PPARγ蛋白表达上调明显（p<0.05）,且AEG大鼠膈肌chemerin/CMKLR1信号抑制（p<0.05）;但REG大鼠膈肌chemerin/CMKLR1信号变化不明显。（3）相较MG,AEG大鼠膈肌中IL-8的表达被显着抑制（p<0.05）,并且IL-1β和IL-6表达有下降但不具有统计学意义;REG大鼠膈肌中炎症因子变化不明显。（4）AEG大鼠膈肌Myo D1的表达相较MG上升（p<0.05）,atrogin-1和Mu RF1的表达有下降但不具有统计学差异;REG大鼠膈肌Mu RF1的表达被抑制（p<0.05）。2.机械牵拉对LPS诱导炎症环境下L6细胞增殖水平及PPARγ-chemerin/CMKLR1通路及下游因子的影响2.1诱导L6成肌细胞低增殖活性的适宜LPS浓度浓度为2 mg/ml、5 mg/ml以及10 mg/ml LPS溶液能对细胞增殖水平呈抑制作用,经过筛选后,在本次研究的后续部分均采用了2 mg/ml这一浓度作为LPS刺激浓度。2.2机械牵拉对炎症环境下L6细胞的增殖水平影响（1）LG细胞较CG细胞增殖水平下降（p<0.05）,LSG较LG细胞增殖活性显着上升（p<0.05）。（2）LSG细胞相较LG和CG,其细胞PPARγ蛋白的表达水平显着上升（p<0.05）,且细胞中CMKLR1蛋白的表达下降但不具有统计学差异。（3）LG细胞中IL-1β和TNF-α的蛋白水平相较CG上升明显（p<0.05）,而经机械牵拉后的LSG细胞的上述炎症因子水平则显着下降（p<0.05）。（4）LG细胞atrogin-1表达水平较CG显着上升,细胞牵拉后有降低但未呈现统计学差异;各组细胞Mu RF1表达也呈类似趋势;Myo D1的表达在LG呈下降,在LSG上升,但均未产生统计学差异。3.PPARγ在机械牵拉调控chemerin/CMKLR1信号促LPS诱导炎症环境下L6细胞增殖中的作用3.1 GW9662与罗格列酮溶液影响炎症环境下L6成肌细胞增殖水平的适宜浓度50μM的GW9662呈现抑制炎症环境中L6细胞增殖活性的趋势,而10μM和50μM的罗格列酮溶液呈现提升炎症环境中L6细胞的增殖活性的趋势。3.2机械牵拉联合罗格列酮或GW9662对LPS诱导炎症培养环境下L6成肌细胞活性以及PPARγ-chemerin/CMKLR1信号的影响（1）单独罗格列酮/GW9662即可发挥对L6细胞增殖活性的促进/抑制作用（p<0.05）;GSG相较GWG,L6细胞的增殖水平上升（p<0.05）;RSG相较RG,L6细胞的增殖水平也进一步提升（p<0.05）。（2）RG细胞PPARγ蛋白被激活,与GWG、GSG相较明显上升（p<0.05）;RSG蛋白表达水平最高,与CG、LG、GWG以及GSG间均形成显着差异（p<0.05）。RG和RSG中的CMKLR1表达下降,与LG相较差异显着（p<0.05）。（3）RSG细胞IL-1β较GWG显着下降（p<0.05）;相较LG,GWG、RG和RSG细胞中IL-6明显下降（p<0.05）;LG、GWG、GSG和RG细胞中TNF-α相较CG明显上升（p<0.05）,RSG细胞中TNF-α的蛋白表达较LG和GWG下降低明显（p<0.05）。（4）RG细胞atrogin-1和Mu RF1表达被明显抑制（p<0.05）;RSG细胞中Mu RF1的表达呈现明显抑制效应（p<0.05）;GSG、RG和RSG细胞的Myo D1表达上升但未形成统计学差异。结论1.COPD大鼠存在膈肌功能障碍,有氧运动具备更加有效的COPD肺功能、膈肌功能的康复效果;运动能上调膈肌PPARγ蛋白的表达,抑制chemerin/CMKLR1信号,降低膈肌IL-8及TNF-α的水平,调节膈肌蛋白降解/生长失衡状态。2.适宜浓度LPS能诱导L6细胞低增殖活性。机械牵拉能提升LPS环境下培养的L6细胞的增殖活性,并且可以激活细胞中PPARγ蛋白,在一定程度上影响chemerin/CMKLR1信号表达,抑制细胞中IL-1β和TNF-α的蛋白水平,影响E3连接酶及其底物的表达。3.外源性增强PPARγ信号联合机械牵拉可以增强L6细胞的活性,抑制chemerin/CMKLR1信号及IL-6、TNF-α的表达,并进一步抑制肌细胞蛋白降解因子atrogin-1和Mu RF1的表达;相反,抑制PPARγ信号,上述影响被抑制。综上,本次研究从体内和体外实验两方面证实了PPARγ在运动调控chemerin/CMKLR1信号改善COPD膈肌功能障碍中的作用。
段亚宁,朱泓静,陈舒雅,周莹,马高兴[4]（2021）在《食用菌多糖活性研究进展》文中研究表明基于食用菌的味道鲜美、营养丰富、易于种植等多重优点,其作为一种大型食用真菌,有关其营养功能活性方面的应用愈加广泛,引发了越来越多科研工作者的关注。尤其是作为最为典型的不可消化型多糖之一,食用菌多糖组分与肠道菌群的相互作用已被揭示与其众多营养功能活性相关。综述了多糖免疫调节、抗氧化、抗炎、抗肿瘤和与肠道菌群相互作用的活性,并对相关新型食品开发及应用前景进行了详细探讨。可为当前关于食用菌多糖的生物功能活性及其在新型功能食品开发领域的深入研究提供技术支持及理论支撑。
沙洲[5]（2021）在《松花粉多糖对鸡肠道黏膜免疫的影响及巨噬细胞的免疫调节作用》文中研究说明松花粉作为传统医学中的膳食补充剂已有数百年历史,而具有广泛生物学活性的多糖（Polysaccharides,PS）是松花粉的关键活性成分之一,已经被运用到改善和调节免疫功能等方面。黏膜免疫系统是动物（尤其是家禽）整个免疫网络的重要组成部分,也是抵抗外源抗原感染的第一道防线。肠道黏膜是食物消化和营养吸收的关键部位,其中存在的肠道微生物和大量免疫细胞共同形成坚固的防御屏障,而作为免疫细胞的巨噬细胞（Macrophages,m（?））具有趋化性运动、吞噬、分泌和抗原呈递等功能,在抗感染、抗肿瘤、免疫调节等过程中扮演积极角色。本论文以从山东省泰安市的松花粉中分离纯化的松花粉多糖（Pine pollen Polysaccharides,PPPS）作为研究对象,运用分子生物学等技术在体内探究PPPS对肠道黏膜免疫的影响;通过16S高通量测序分析PPPS对肠道内菌群结构丰度的作用;在体外以鸡巨噬细胞（HD11）作为靶细胞,揭示PPPS对其的免疫调节作用并初步探究作用机制。本研究旨在为研制对黏膜免疫具有免疫增强作用的新型免疫增强制剂提供实验基础和理论依据。主要研究内容和结果如下:1、PPPS对黏膜免疫的影响本试验首先选取120只1日龄的SPF鸡,随机分为PBS组、PPPS低剂量组（LPPPS组）、PPPS中剂量组（MPPPS组）、PPPS高剂量组（HPPPS组）,分别口服PBS和3种不同剂量的PPPS（10 mg/m L,20 mg/m L和40 mg/m L）,0.2 m L/只,持续21天。在试验的第7、14和21天分别收集各组鸡的肠道组织、粪便及血液样品。通过ELISA方法、流式细胞术、CCK-8试剂、实时荧光定量PCR（q PCR）等技术分别检测免疫学相关指标,主要包括:SIg A和Ig G抗体水平、CD4+、CD8+T淋巴细胞水平、T淋巴细胞转化率、细胞因子（白介素2、白介素4、干扰素γ）、黏膜免疫相关分子基因（CD80、CD86、MHC-I、MHC-II）。结果表明PPPS显着提高鸡的黏膜抗体SIg A和血清抗体Ig G水平,并有效促进细胞因子分泌及T淋巴细胞水平,上调黏膜免疫相关基因m RNA水平。通过HE染色观察PPPS对小肠绒毛结构的影响,分别采集PBS组及PPPS组鸡的小肠不同部位组织制成石蜡切片,测量并统计分析各组鸡的十二指肠、空肠和回肠绒毛长度、宽度、隐窝深度及V/C值（长度/深度）的变化。结果表明,PPPS能有效改善小肠绒毛发育以增强肠道黏膜抵御病原体的物理屏障。为了探究PPPS对肠道黏膜的保护作用,试验的第21天,分别对每组鸡滴鼻100μL106TCID50新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）病毒液,记录攻毒后体重变化及死亡率,并取各段小肠及肺脏采用HE染色观察病理变化,通过q PCR检测肠黏膜病毒载量。结果表明,MPPPS、HPPPS组与LPPPS、PBS组相比,显着减轻由NDV引起的体重降低、病理损伤、病毒载量及死亡率。另外通过感染H9N2病毒探究口服PPPS对呼吸道黏膜的保护作用,在口服40 mg/m L的PPPS剂量7天后,PBS组及PPPS组选取5只鸡分别滴鼻100μL 104TCID50H9N2病毒液,在攻毒后第3、5和7天采集肺脏组织HE染色,通过q PCR检测肺脏病毒量,采用免疫荧光对病毒进行定位并分析荧光强度。结果表明PPPS显着降低肺脏中病毒量,减轻肺脏病理变化。证明PPPS不仅能有效保护肠道黏膜损伤,同样对呼吸道黏膜也具有保护作用。2、PPPS对肠道菌群的影响为了探究PPPS对鸡肠道菌群的影响,在口服PPPS的第21天,收集PBS组及HPPPS组（40 mg/m L）鸡粪便样本,通过16S高通量测序对鸡肠道菌群组成、多样性等方面进行分析研究。结果表明,PBS组与PPPS组的肠道菌群组成存在较大差异,通过Venn图结果表明,PPPS组OTU值显着升高。在门水平上分析,PPPS组的Firmicutes（厚壁菌门）、Bacteroidetes（拟杆菌门）、Proteobacteria（变形菌门）与PBS组相比均有较大变化。在科水平上分析,Lactobacillaceae（乳杆菌科）、Bacteroidaceae（拟杆菌科）、Lachnospiraceae（毛螺菌科）、Rikenellaceae（理研菌科）变化较为明显。在属水平上分析,PPPS组与PBS组相比,诸如Enterococcus（肠球菌）、Bacteroides（拟杆菌属）、Alistipes（别样杆菌属）、Helicobacter（螺杆菌属）、Intestinimonas（瘤胃菌属）等均丰度上升。在种水平上分析,Lactobacillus＿reuteri（罗伊氏乳杆菌）,Enterococcus＿cecorum（盲肠链球菌）、Bacteroides＿uniformis、Bacteroides＿thetaiotaomicro（拟杆菌）,Lachnospiraceae＿bacterium＿615、Lachnospiraceae＿bacterium＿M18-1（毛螺菌）,Clostridium＿sp＿AUH-JLC140（梭状杆菌）,Alistipes＿finegoldii（别样杆菌）等丰度上升。在α多样性及UPGMA聚类树等分析发现,PPPS组的菌群物种多样性显着高于PBS组。因此说明PPPS能够改善肠道菌群结构及丰富度。3、PPPS对巨噬细胞的免疫调节作用为了探究PPPS对巨噬细胞HD11的免疫调节作用,首先用CCK-8试剂检测不同浓度的PPPS对HD11细胞的增殖作用,通过中性红及FITC-葡聚糖分析PPPS对HD11细胞的吞噬活性的影响,Griess试剂检测PPPS处理HD11细胞后分泌一氧化氮（NO）水平,荧光探针法测定活性氧（ROS）,ELISA法检测HD11细胞培养液上清液中白介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）含量。通过q PCR法检测诱导型一氧化氮合酶（i NOS）、IL-1β和TNF-α的m RNA水平变化。结果表明,当PPPS浓度高于800μg/m L时,PPPS对HD11细胞增殖具有一定的抑制作用,而在低于400μg/m L时能显着促进增殖效果。因此选用50-400μg/m L浓度范围的PPPS进行后续试验。中性红及FITC-葡聚糖试验显示PPPS均能显着提高HD11细胞吞噬活性,但各浓度间的作用效果无显着差异。PPPS以剂量依赖性方式促进HD11细胞分泌NO、IL-1β、TNF-α,且上调i NOS、IL-1β、TNF-αm RNA水平。通过高通量测序技术,对以200μg/m L PPPS处理24 h的HD11细胞与PBS组细胞进行转录组测序,分析比较差异表达m RNA、mi RNA及信号通路。结果表明,PPPS组有2358个上调表达基因和2028个下调表达基因,其中富集分析与免疫相关主要通路为内吞作用、黏附连接、内质网蛋白质加工、细胞因子-细胞因子受体相互作用、转运蛋白、Toll样受体、MAPK、Notch、C型凝集素受体、NOD样受体、RIG-I样受体等信号通路。mi RNA结果显示10个mi RNA在PPPS组中高表达,21个mi RNA下调表达。KEGG通路富集分析主要通路为内吞作用、紧密连接、溶酶体、黏合连接、细胞粘附分子、内质网蛋白加工、Notch等信号通路。为了探究PPPS作用的HD11细胞的受体以及免疫调节的信号通路,根据转录组结果,我们选择分析验证Toll样受体、MAPK、NF-κB分子对HD11细胞的影响。在PPPS处理HD11细胞后,通过q PCR方法检测Toll样受体2、4（TLR 2、4）、甘露糖受体（MR）和NF-κB分子m RNA水平。TLR4、MAPK三种亚基（p38、JNK、ERK1/2）和NF-κB抑制剂预处理细胞后,Griess法检测NO水平、ELISA法检测IL-1β和TNF-α的分泌量。结果表明,PPPS在不同时间点均上调细胞表面受体TLR4和NF-κB的m RNA水平,证明TLR4是PPPS激活HD11细胞的重要受体,NF-κB是PPPS促进HD11细胞活化的关键核因子。TLR4、MAPK、NF-κB抑制剂均能显着降低HD11细胞NO、IL-1β和TNF-α的分泌量,说明TLR4、MAPK、NF-κB均参与PPPS对HD11细胞的免疫增强作用。结果表明PPPS通过TLR4/MAPK/NF-κB信号通路激活HD11细胞产生免疫应答。综上所述,PPPS显着促进肠道黏膜免疫功能及小肠绒毛发育,有效减轻由NDV和H9N2引发的肠道及肺脏组织病理损伤,改善肠道菌群丰度且通过TLR4/MAPK/NF-κB信号通路激活HD11细胞。本课题不仅探究PPPS对鸡黏膜免疫及肠道菌群的影响,而且揭示了对巨噬细胞的免疫调节作用。因此,PPPS作为天然免疫增强剂具有良好的开发潜力和应用前景。
李丽萍[6]（2021）在《桔梗总多糖激活自噬调控猪肺泡巨噬细胞M1型极化的作用》文中研究说明桔梗是我国最具代表性的中药之一,入药部位为桔梗科草本植物桔梗的干燥根部,其在临床上具有宣肺祛痰、抗炎镇静、利咽和排脓消肿等多种功效,治疗咳嗽痰多,胸闷不畅,咽痛音哑,肺痈排脓、痰多等病症。桔梗包含多糖、皂苷类、黄酮类、脂肪油、脂肪酸等多种化学成分。现代药理研究发现桔梗具有止咳平喘、抗氧化、免疫调节、抗炎抑菌、抗肿瘤、降血脂、降血糖、保肝、抗肺损伤等多种功效。桔梗多糖（PGPS）作为中药桔梗的关键生物活性组分之一,具有抗氧化、提高免疫力和抗肿瘤的作用。本研究首先检测了桔梗总多糖（PGPSt）的表面形态特征及其对猪肺泡巨噬细胞系3D4/21细胞自噬的影响。结果发现PGPSt具有三重螺旋构象,并具有致密,多孔和团聚的形态特征。其次通过研究自噬指标发现,PGPSt显着上调LC3-Ⅱ和Beclin1的表达,而P62表达显着降低,表明自噬流通畅;采用免疫荧光和瞬时转染方法,在激光共聚焦显微镜下观察到PGPSt处理后核周产生绿色荧光斑点,并呈点状聚集,透射电镜观察发现双层膜结构自噬囊泡,表明自噬体产生;3-MA预处理后,PGPSt诱导的LC3-I型向Ⅱ型转化和P62降解被抑制;Baf A1处理后PGPSt引起的自噬溶酶体降解被阻断,LC3-Ⅱ和P62显着累积,与3-MA相比,Baf A1处理后细胞显示更大的LC3斑点分布。这些结果表明PGPSt可激活细胞自噬。通过PGPSt调控3D4/21细胞自噬通路的研究发现,PGPSt主要由PI3K/AKT/mTOR和MEK/ERK通路诱导细胞自噬,且在4-5 h内作用最强。在1-2 h,主要以激活MEK/ERK通路发挥作用,3-5 h主要以抑制PI3K/AKT/mTOR通路发挥作用。这些结果表明:PGPSt可通过PI3K/AKT/mTOR通路和MEK/ERK通路诱导3D4/21细胞自噬。M1型极化巨噬细胞可提高机体的免疫功能。桔梗多糖作为天然大分子活性产物可调节免疫,可能参与对巨噬细胞极化的调控。为研究PGPSt对3D4/21细胞M1型极化的调控作用,利用LPS/IFN-γ处理3D4/21细胞建立M1型极化模型。激光共聚焦显微镜观察到M1型极化细胞呈圆形分布。PGPSt显着促进IL-6、IL-12和TNF-α的mRNA表达,显着促进IL-6、IL-12、TNF-α、IL-1β和i NOS蛋白表达,增强CD80和CD86的表达水平。以上结果表明,PGPSt促进3D4/21细胞发生M1型极化。SOCS1/2是巨噬细胞极化通路JAK-STAT中的调节蛋白,为确定PGPSt调节SOCS1/2蛋白表达对M1型极化的影响,经检测发现PGPSt显着下调SOCS1/2蛋白表达水平,而对SOCS1/2的mRNA表达水平作用不明显。故进一步探讨SOCS1/2的降解途径,分别使用蛋白酶体抑制剂MG-132和溶酶体抑制剂CQ协同PGPSt处理细胞后检测SOCS1/2的蛋白水平,结果显示,MG-132处理后,PGPSt可显着降低SOCS1/2蛋白表达水平,而CQ明显阻断PGPSt对SOCS1/2蛋白表达的降低作用。结果表明,PGPSt通过激活溶酶体系统降解SOCS1/2蛋白。进一步研究发现,在3-MA作用下,PGPSt诱导的LC3BⅡ显着减少,且PGPSt对SOCS1/2蛋白的下调作用被阻断。在Baf A1作用下,PGPSt促使LC3BⅡ和P62显着积累,自噬流被阻断,SOCS1/2蛋白不再被PGPSt下调。结果表明,PGPSt上调LC3BⅡ,并下调SOCS1/2蛋白表达,提高了自噬的关键成分LC3B桥接这种连接并降解SOCS1/2的可能性。为了验证这种可能性,通过间接免疫荧光和CO-IP研究了LC3和SOCS2之间的相互作用。结果表明,PGPSt处理后,两种蛋白的共定位百分比显着增加,LC3与SOCS1、SOCS2蛋白之间存在相互作用。综上所述,PGPSt可通过PI3K/AKT/mTOR通路和MEK/ERK通路诱导3D4/21细胞自噬,且通过自噬降解SOCS1/2蛋白促进猪肺泡巨噬细胞发生M1极化,明确了自噬与极化的关系,为研究开发天然药物中新的活性成分提供新的靶标。
于霖淼[7]（2021）在《甘草多糖提取动力学、理化特性及生物活性研究》文中进行了进一步梳理乌拉尔甘草（Glycyrrhiza uralensis Fisch.）是甘肃省地区重要的中草药材,大量研究证实甘草多糖（Glycyrrhiza uralensis polysaccharides,GP）具有免疫调节、抗病毒、抗肿瘤作用,颇具研究意义。为了深入研究甘草多糖的生物活性,设计一种更为高效的提取方法,本文采用超声辅助提取乌拉尔甘草多糖并建立多糖提取动力学模型,分析GP的结构特征和理化特性;甘草多糖已被证实具有良好抗病毒性,在此基础上研究其抗牛病毒性腹泻病毒（Bovine Viral Diarrhea Virus,BVDV）活性;通过研究可知甘草多糖具有较好的抗BVDV效果,目前多糖微囊化被广泛研究并应用,因而在此基础上制备甘草多糖微囊（Glycyrrhiza uralensis polysaccharides microcapsules,GPM）研究其在大鼠创面组织愈合的效果,以证实甘草多糖微囊化的可行性。主要结果如下:（1）通过单因素试验和响应面法分析超声辅助提取最佳条件,该最佳提取条件（温度为80℃、提取持续时间为140分钟、料液比为1:11）下可溶性多糖的产率为22.31±0.07%。根据菲克第二定律建立GP提取过程模型方程,并进行热力学分析可知超声辅助提取甘草多糖过程是不可逆的吸热过程。通过HPLC-DAD-ELSD、傅里叶变换红外分光镜（FT-IR）、圆二色（CD）测定、采用热重分析/差热分析（TGA/DTA）进行热分析以测定GP理化特性,可知GP是一种具有磷酸和硫酸盐离子基团的非还原糖蛋白聚合物、具有螺旋片状结构、较高的热稳定性。研究GP溶液质量浓度、pH、不同离子种类及浓度、温度对GP溶液表观粘度的影响发现,GP的吸光度随温度显着增加,并在pH5.5时有最大值,然后随着pH从6.0增加至13.0而下降;GP的表观粘度随GP溶液的质量浓度的增加而增加;温度超过60℃时GP溶液的粘度急剧下降,最小粘度为0.14Pa·s,且伴随着搅拌速率的增加,GP溶液的表观粘度显着降低;GP溶液的表观粘度随着Na+、K+浓度的增加而增加、随着Ca2+和Zn2+的加入显着降低,并表现出浓度依赖性。用扫描电镜（SEM）和原子力显微镜（AFM）观察甘草多糖的表征结构和形态特征,可知GP分子为不规则球型颗粒状,呈螺旋结构,FT-IR分析可知GP是α-D-吡喃糖。（2）通过病毒梯度和病毒增长值检测、CCK-8细胞毒性试验、qRT-PCR测定BVDV和MDBK细胞中的相关mRNA表达,并使用IRF-1、IRF-3在MDBK细胞中调节活性作为对BVDV影响的指标,以研究GP的抗病毒性。结果表明,利巴韦林（RBV）和GP均具有良好的抗BVDV活性;GP可显着抑制IRF-1的基因表达（##p<0.01）,GP浓度在200μg/m L时基因表达倍数降低到最小值;GP和RBV都可以促进IRF-3的表达,通过上调IRF-3信号介导的IFN-α的产生,可对BVDV产生抗病毒活性。得出结论,GP对BVDV病毒的预防效果更好。（3）根据优化工艺选择出GPM最佳配制组合条件为海藻酸钠浓度2%、壳聚糖浓度0.3%、GP浓度0.6g/m L、氯化钙浓度3%,此组合最大载药率和包埋率分别为42.8%±0.74%和59.92±0.68%。GPM具有良好的溶胀性能,溶胀率随时间从10分钟到30分钟呈线性增加,36分钟达到溶胀平衡。通过TEM、SEM图像可知,GPM表现出良好的分散特性和相对致密的结构,表面形貌平坦,与混合物分离良好,可有效地将可溶性多糖分子包裹在载体中,避免药物泄漏,以保证药物载体系统的储存;其三维网状结构,有利于细胞粘附、增殖和组织生长;具有少量短链分支的层状GPM有松散而柔软的纤维结构和干燥的表面。用FT-IR研究了GPM的特征峰,结果表明GPM含有多个羟基（-OH）基团、C-H、C=O和C-O-C、O-Si。XRD曲线显示GPM在15.20°、20.16°、22.25°有三个较GP更为尖锐的峰,可认为是GPM受到物理研磨和制备微囊所加入化学物质的影响,从相对有序的晶体结构转变为无序结构。用TG/DSC光谱法分析了GPM的失重和热力学过程,表明GPM可能质地松散、表面粗糙、热稳定性差。通过物理性能测定可知,GPM显示出较小的硬度（2.0±0.157）、中等粘度（0.0372±0.00599）和弹性（0.18±0.0258）,可作为理想的生物医学材料。（4）进行血常规指标和血液生化指标检测分析发现,GPM组的血红蛋白（HGB）、红细胞体积（HCT）和平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）均显着高于对照组（p<0.05）,证明GP可减轻伤口炎症。通过对SD大鼠损伤模型中肉芽组织变化的观察可知,GPM组的肉芽组织表现为血管和成纤维细胞明显增生,胶原纤维排列最粗,其微血管计数略高于阿魏酸组,推测是甘草多糖在促进毛细血管的形成中发挥了重要作用。与其他组比较,GPM组羟脯氨酸含量显着增加（p<0.05）,VEGF和miRNA-21的基因的相对表达显着增加（p<0.01）,说明GP可以调控该基因。免疫印迹结果中,GPM组肉芽组织中p-STAT3的表达高于其他组,说明了甘草多糖可以激活STAT3的蛋白质表达,进一步调控VEGF和miRNA-21的基因表达,从而诱导新血管化的形式。以上研究结果表明GPM在治愈大鼠损伤组织具有显着效果。
周国峰[8]（2021）在《一株蘑菇内生细菌Bacillus halotolerans DMG7-2次级代谢产物研究》文中指出蘑菇是重要的天然新药来源之一,它种类繁多,且次生代谢产物种类复杂。但对于一些特殊环境生长的蘑菇而言,很难得到大量的菌体本身用以研究分析。因此,其孢子或内生菌的发酵培养是重要的研究途径。芽孢杆菌属的细菌是重要的生防菌,也是重要的脂肽类化合物生产菌,许多年来从中发现了一些具有优秀活性的化合物。采取不同于以往的培养条件对其发酵有产生独特结构化合物的希望。本文选取了一株分离自东北地区中俄边境亚寒带针叶林中丝膜菌（Cortinarius lucorum（Fr.）E.Berger）DMG–7的内生细菌——耐盐芽孢杆菌（Bacillus halotolerans）DMG–7–2,前期的研究中,它在真菌的培养条件下表现出了良好的抗肿瘤活性。本研究采用真菌培养条件培养该菌株,并对发酵液中的有效成分进行提取分离。所得产物综合运用多种色谱技术（羟丙基葡聚糖凝胶Sephadex LH–20、ODS、HPLC）从DMG–7–2的发酵产物中分离得到11个单体化合物。运用一维(1H NMR、13C NMR),二维（1H–1H COSY、HSQC、HMBC、TOCSY、ROESY）核磁共振,Marfey分析以及计算13C NMR的方法对这些化合物的结构进行了鉴定。这11个化合物的结构分别被鉴定为:iso–C14[Val2,Val7]surfactin（1）,iso–C14[Val7]surfactin（2）,anteiso–C15[Val7]surfactin（3）,anteiso–C13 surfactin（4）,iso–C13 surfactin（5）,iso–C14 surfactin（6）,n–C14 surfactin（7）,anteiso–C15 surfactin（8）,iso–C15 surfactin（9）,环（苯丙氨酸–羟脯氨酸）二肽（10）和环（亮氨酸–脯氨酸）二肽（11）。其中,化合物1为新化合物,化合物1～9均为环脂肽类化合物——表面活性素衍生物,化合物10～11则是两个环二肽类化合物。对分离得到的表面活性素类化合物生物活性进行了研究。在抑菌活性研究中,对于受试的几株包括耐药细菌在内的革兰氏阳性及阴性细菌并无抑制能力。选取了两株人癌细胞（A549、MCF–7）和小鼠小胶质细胞（BV2）进行抗肿瘤活性评价,结果显示表面活性素类化合物对这三种细胞都具有中等程度的抗肿瘤性,IC50值在8～35μM之间。
刘博[9]（2021）在《硫酸化酵母葡聚糖的药理、毒理及临床应用研究》文中认为酵母葡聚糖来源于啤酒酵母,具有增强机体免疫、调节肠道健康等多种生物活性功能。但由于其不溶于水,大大限制其应用。酵母葡聚糖经硫酸化修饰（sGSC）后,可增加其水溶性,改善其生物活性。目前有关其药理、毒理及临床应用方面的研究尚不完善。本研究采用体内、体外等方法进行研究,结果如下:1.sGSC的药理功效研究进行了药理研究,目的是探究sGSC在体外对鸡巨噬细胞HD 11和乳酸杆菌的影响,以判断该糖是否具有调节免疫的效果及促进乳酸杆菌增殖的作用。结论显示,sGSC在0.06 mg/m L～1.00 mg/m L时,在A 570 nm处其OD值高于空白对照组,随着sGSC浓度的增加,其OD值也增加,依次比对照组增加了5.1%、12.8%、15.4%、16.7%和23.1%,但差异不显着（P>0.05）,说明sGSC在体外对鸡巨噬细胞活性具有调节作用,sGSC可能具有调节鸡的免疫功能的作用。通过sGSC对乳酸杆菌（Lactobacillus）的影响试验,结果显示,与对照组（0 mg/m L）相比,sGSC浓度在0.56 mg/m L时,有促增殖作用但不显着（P>0.05）,sGSC在浓度范围为1.13～9.00mg/m L时,有促增殖效果均显着（P<0.05）,但添加sGSC的各组,对Lactobacillus有不同程度促增殖作用,在0.56～9.00 mg/m L的范围内,随着sGSC浓度增加,促增殖效果先增加后降低,对Lactobacillus的促增殖效果在2.25 mg/m L时效果最好。2.sGSC的毒性研究40只昆明小鼠,重量为17～19 g（雌雄各半,分开饲养）。给糖组（5 mg/g.BW）和对照组每组20只小鼠,使小鼠适应环境,无任何应激反应,之后进行试验。在给糖观察期间内每天对各组进行临床记录,持续记录14 d。记录每只小鼠的第1 d、7 d和14 d的重量。给糖后每天监测小鼠行为表现以及精神状态和有无死亡情况。试验结束后,分析小鼠的体重变化、脏器指数变化、器官病理变化。结果表明,sGSC浓度为5 mg/g.BW时,对小鼠的体重、脏器指数均无影响（P>0.05）,小鼠的各器官组织也未出现病理变化,说明sGSC（大于5 mg/g.BW的剂量）对小鼠无任何毒性作用。3.sGSC对抗生素相关性腹泻（AAD）小鼠肠道菌群的影响40只小鼠被随机分为A、B、C、D四组,A组为正常对照组,B组为sGSC对照组,给A、B组的小鼠灌胃反渗透水（Reverse osmosis,RO）,C、D两组分别以3 mg/g.BW的剂量灌胃盐酸林可霉素。连续3 d,然后,向B组和D组以100 mg/kg.BW的剂量灌胃sGSC连续14 d。分析小鼠的体重,器官指数,短链脂肪酸（short-chain fatty acids,SCFAs）和肠道菌群变化。结果发现,sGSC有利于促进AAD小鼠体重的恢复,减轻恢复回肠和结肠的病理变化,能显着提高乳酸杆菌属（Lactobacillus）和副球菌属（Coprococcus）的丰度（P<0.05）,降低粘螺旋藻属（Mucispirillum）和嗜酸性菌属（Bilophila）的丰度,但差异不显着（P>0.05）;能促进短链脂肪酸中丁酸和丙酸的产生。结果表明,sGSC对AAD小鼠的腹泻症状具有一定的治疗作用,并且具有调节AAD小鼠肠道中的菌群的功能。4.sGSC对鸡球虫病的防治效果200只鸡随机分为A组低浓度组（4 mg/kg.BW）、B组中浓度组（16 mg/kg.BW）、C组高浓度组（64 mg/kg.BW）、D组感染组、E组健康组。感染球虫前3 d开始,给A、B、C组鸡每天按体重饮水喂上述各浓度的sGSC,给D、E组的鸡喂RO水,持续至试验结束。试验过程中观察鸡的行为表现、血便情况,第5、6 d时,计数单位克粪的卵囊总量,感染后第7天剖杀所有鸡只,测定心、肝、脾脏、胸腺、法氏囊指数用来评价sGSC对球虫感染的效果。结果表明,sGSC能改善柔嫩艾美尔球虫感染对鸡群带来的影响,具有抗球虫效果。
赵利芳[10]（2021）在《大气PM2.5及其它污染因子致肺损伤分子机制研究》文中研究指明细颗粒物(PM2.5)是近年来研究较多的主要大气污染物。它与哮喘、慢性阻塞性肺炎和肺癌等密切相关,已被国际癌症研究机构（IARC）确定为一类致癌物。PM2.5中有机成分硝基多环芳烃（NPAHs）因具有致突性和致癌性被广泛关注。二氧化硫（SO2）也是常见大气污染物,会刺激呼吸道,引发肺炎和哮喘等疾病。此外,大气中生物组分内毒素,也称作脂多糖（LPS）,与哮喘发作、肺损伤有关,其对公众健康的危害也受到学者重视。《健康中国行动（2019-2030年）》提出要防治重大疾病,改善环境质量,保障民生健康。围绕此重大需求,本研究以大气重要组分PM2.5为主,探讨气道滴注太原大气PM2.5与其有机组分NPAHs暴露、太原真实环境大气PM2.5暴露、气道滴注太原大气PM2.5和SO2动态吸入复合暴露、临汾真实环境大气PM2.5和腹腔注射LPS复合暴露对肺损伤的毒性效应,进而揭示三种大气组分致肺部相关疾病的毒理机制。主要包括以下内容:1、研究太原市大气PM2.5及其有机组分NPAHs典型代表物1-硝基芘（1-NP）和9-硝基蒽（9-NA）对肺DNA损伤的效应。研究发现,PM2.5暴露会引起DNA损伤,但PM2.5中1-NP和9-NA是否会损害DNA以及这两种物质对PM2.5毒性是否有贡献有待深入研究。本章研究对雄性Wistar大鼠分别气道滴注二甲基亚砜（DMSO）、PM2.5（1.5mg/kg b.w.）混悬液、1-NP低中高浓度染毒液(1-NP-1:1.0×10-5 mg/kg b.w.、1-NP-2:4.0×10-5 mg/kg b.w.和1-NP-3:1.6×10-4mg/kg b.w.)和9-NA低中高浓度染毒液(9-NA-1:1.3×10-5mg/kg b.w.、9-NA-2:4.0×10-5 mg/kg b.w.和9-NA-3:1.2×10-4mg/kg b.w.)。隔天滴注1次,连续10天。采用彗星实验（Comet assay）观察大鼠肺细胞DNA链损伤情况,利用SDS-KCl沉淀法测定大鼠肺组织中DNA-蛋白交联（DPC）率,并通过酶联免疫吸附法（ELISA）考察DNA氧化损伤标志物8-羟基脱氧鸟苷（8-OHd G）、氧化应激因子（血红素氧合酶1（HO-1）、丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD））和代谢酶（谷胱甘肽S-转移酶（GST）、细胞色素P450（CYP450）、细胞色素P4501A1（CYP1A1）和细胞色素P4501A2（CYP1A2））表达量。利用实时定量PCR（RT-PCR）和蛋白免疫印迹技术（WB）检测大鼠肺组织DNA损伤修复相关因子（8-氧鸟嘌呤DNA糖基化酶（OGG1）、8-羟基鸟嘌呤核苷酸（MTH1）和x射线修复交叉互补群1（XRCC1））变化。结果表明PM2.5、1-NP和9-NA能通过影响DNA修复能力,增强氧化应激和生物转化而诱导DNA损伤。另外,Pearson相关分析发现在剂量近似相等的条件下,1-NP中浓度和PM2.5、9-NA中浓度和PM2.5引起肺DNA损伤标志物表达变化有相关性。提示1-NP和9-NA在PM2.5致肺DNA损伤中起到一定贡献。此研究结果为PM2.5中NPAHs的肺毒理学机制研究提供了实验依据。2、从DNA甲基化角度深入研究了太原真实环境大气PM2.5暴露对肺DNA损伤的影响。研究证实,DNA甲基化与DNA损伤有相关性,但真实环境大气PM2.5暴露致肺DNA损伤的修饰机制还不清楚。本章研究采用PM2.5全身吸入式暴露系统,对雄性SD大鼠进行山西省太原市环境大气PM2.5吸入暴露1个月和2个月。采用苏木精-伊红（HE）染色分析大鼠肺部病理特征,结合ELISA、WB和RT-PCR技术检测炎症因子（肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素-6（IL-6））、氧化应激相关因子（羟基自由基（HO·）、超氧阴离子自由基（O2-·）、NO、诱导型一氧化氮合酶（i NOS）、MDA、SOD和GST）、DNA损伤修复相关因子（DNA损伤诱导基因153（GADD153）、8-OHd G和磷酸化组蛋白H2AX（γ-H2AX））和癌症相关因子（原癌基因c-fos、c-jun和抑癌基因PTEN）表达。为深入研究DNA损伤机制,采用亚硫酸氢盐测序法测定OGG1和MTH1启动子区DNA甲基化状态。结果表明,1月和2月PM2.5实时吸入暴露能对大鼠肺部造成病理损伤和DNA损伤,并影响炎症因子、氧化应激相关因子和DNA损伤修复基因（MTH1和OGG1）表达。此外,2个月PM2.5暴露显着降低了OGG1启动子区2的DNA甲基化水平。这提示DNA损伤与氧化应激有关,且OGG1启动子区DNA甲基化水平改变可能是PM2.5致大鼠肺遗传毒性的一个重要机制。最后,通过分析c-fos、c-jun和PTEN表达结果,发现PM2.5实时吸入暴露能引起癌症相关的及早基因和抑癌基因表达异常,有增加肺癌风险的潜在可能。此研究结果为PM2.5对表观遗传学修饰的影响提供了一定参考价值。3、从炎症通路角度分析了PM2.5和SO2复合暴露对肺损伤的机制。PM2.5和SO2是两种较常见的大气污染物。研究发现,它们单独暴露分别能增加肺部疾病发病率。山西省太原市大气污染以煤烟型污染为主,PM2.5和SO2是主要的煤炭燃烧产物。二者复合暴露的毒性效应对阐释大气污染致肺毒性的机制有重要意义。因此,本章研究将雄性Wistar大鼠随机分为6组:对照组（隔天气道滴注生理盐水）,SO2吸入组（隔天动态吸入5.6 mg/m3 SO2）,PM2.5暴露组(隔天滴注1.5 mg/kg b.w.PM2.5),SO2和PM2.5低、中、高浓度联合暴露组(隔天吸入5.6 mg/m3SO2,并同时分别滴注1.5、6.0和24.0mg/kg b.w.PM2.5)。每次吸入SO2时间为6 h,滴注或吸入在同一天进行,连续10天。通过HE染色观察不同处理组大鼠肺组织病理损伤程度,结合透射电子显微镜（TEM）观察肺组织超微结构变化,利用瑞氏-吉姆萨染色法计数肺泡灌洗液（BALF）中炎性细胞数量,并通过ELISA考察细胞因子（TNF-α、IL-6和白介素1β（IL-1β））和炎症通路相关因子（核因子κB（NF-κB）抑制蛋白α（IκBα）、NF-κB抑制蛋白激酶β（IKKβ）和i NOS）改变。利用RT-PCR和WB技术检测大鼠肺组织细胞间黏附分子1（ICAM-1）、NF-κB、磷酸化p38（p-p38）和Toll样受体4（TLR4）表达水平。结果表明,SO2单独暴露未引起大鼠肺部明显炎症反应。PM2.5暴露增加了BALF中炎性细胞数目和炎症损伤。重要的是,与对照组/SO2组相比,SO2和PM2.5（1.5、6.0和24.0 mg/kg b.w.）复合暴露导致大鼠肺部出现明显病理损伤和超微结构损伤,并诱导BALF部分炎症细胞数量增多,激活了炎性通路TLR4/p38/NF-κB相关因子的异常表达,最终引起肺损伤。此研究为了解PM2.5与SO2协同加重肺部疾病的毒理学机制提供了更多理论依据。4、从铁死亡和组织纤维化角度研究了临汾真实环境大气PM2.5和LPS复合暴露对肺损伤的影响。PM2.5和内毒素普遍存在于大气中。研究表明,铁死亡与呼吸系统疾病发生有关,且PM2.5和LPS单独暴露均能引起铁死亡,但关于二者复合暴露影响肺组织铁死亡和纤维化相关因子表达的研究还很缺乏。本章研究将雄性BALB/c小鼠随机分为4组:洁净空气暴露组（注射PBS缓冲液）、PM2.5暴露组（注射PBS缓冲液）、LPS暴露组（注射LPS溶液）及PM2.5和LPS复合暴露组（注射LPS溶液）。采用腹腔注射方式对小鼠进行PBS缓冲液或LPS溶液（0.12 mg/mL）处理,每周注射1次,每次注射50μL。同时,采用PM2.5全身吸入式暴露系统对小鼠进行山西省临汾市真实环境大气PM2.5吸入暴露23周。通过HE染色观察不同组小鼠肺病理损伤程度,并采用ELISA技术考察炎性因子（TNF-α和IL-6）、氧化应激相关因子（SOD、谷胱甘肽（GSH）、过氧化氢酶（CAT）、MDA和4-羟基壬烯醛（4-HNE））和Fe2+水平的改变。利用WB技术检测小鼠肺组织中铁死亡指标（谷胱甘肽过氧化酶4（GPX4）、溶质载体家族7成员11（SLC7A11）和膜铁转运蛋白1（FPN1））和纤维化相关因子（α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、胶原蛋白I（Collagen I）和胶原蛋白III（Collagen III））水平。通过Masson实验测定小鼠肺组织胶原含量变化。结果表明,与对照组/LPS组/PM2.5组相比,PM2.5和LPS复合暴露可加重肺病理损伤,引起炎性因子和氧化应激相关指标异常表达,诱导铁离子水平增加,导致铁死亡相关因子（GPX4、SLC7A11和FPN1）表达下降,4-HNE和MDA累积,诱导铁死亡发生。此外,复合暴露使肺沉积了大量胶原介质,引起纤维化相关因子表达显着增加。PM2.5和LPS单独暴露未引起这些因子明显改变。此研究揭示了PM2.5与LPS协同暴露致小鼠肺组织发生铁死亡和纤维化的毒理机制。不同地区大气污染多样,PM2.5组分复杂,且不同地区不同污染成分引起的呼吸系统疾病机制不同。鉴于此,本研究选择山西省污染较严重的太原市和临汾市为研究现场,建立了各种动物暴露模型。针对不同的PM2.5暴露模式,首先研究PM2.5及其吸附的NPAHs致肺DNA损伤效应,然后从DNA甲基化角度探讨PM2.5对肺DNA损伤的分子机制。之后建立PM2.5与SO2复合暴露模型,以炎症经典通路为主,研究不同浓度PM2.5和SO2复合暴露诱导大鼠肺炎症损伤的分子机制。最后,建立PM2.5和LPS复合暴露模型,阐明其对小鼠肺组织铁死亡和纤维化相关指标的影响。综上,本研究多维度研究了大气三种污染物染对肺部疾病的损伤效应。进一步为我国典型地区大气环境污染与健康领域研究的发展提供新的实验依据。
二、香菇多糖对大鼠肺泡巨噬细胞活性的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、香菇多糖对大鼠肺泡巨噬细胞活性的影响（论文提纲范文）
（1）香菇多糖对氨氮胁迫泥鳅抗氧化功能的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 数据处理 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 香菇多糖对氨氮胁迫泥鳅SOD活性的影响 |
| 2.2 香菇多糖对氨氮胁迫泥鳅CAT活性的影响 |
| 2.3 香菇多糖对氨氮胁迫泥鳅酸性磷酸酶(ACP)活性的影响 |
| 2.4 香菇多糖对氨氮胁迫泥鳅碱性磷酸酶活性的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
（2）多糖药物体内代谢及PK/PD关键技术研究的进展与思考（论文提纲范文）
| 1 多糖药物的生物活性 |
| 1.1 免疫调节作用 |
| 1.2 抗肿瘤作用 |
| 1.3 抗氧化作用 |
| 1.4 神经保护作用 |
| 1.5 抗病毒作用 |
| 1.6 抗炎作用 |
| 1.7 抗凝作用 |
| 2 多糖药物体内药代动力学特征 |
| 2.1 多糖药物体内药代动力学研究的技术挑战 |
| 2.1.1 荧光标记法 |
| 2.1.2 同位素标记法 |
| 2.1.3 其他标记法 |
| 2.1.4 酶解后衍生化法 |
| 2.1.5 免疫法 |
| 2.1.6 生物活性测定法 |
| 2.1.7 直接质谱法 |
| 2.2 多糖药物体内代谢研究进展 |
| 2.2.1 动物多糖 |
| 2.2.2 海洋多糖 |
| 2.2.3 真菌多糖 |
| 2.2.4 植物多糖 |
| 2.3 影响多糖药物药代动力学的因素 |
| 2.3.1 给药方式 |
| 2.3.2 相对分子质量 |
| 2.3.3 其他因素 |
| 3 肠道菌可能是影响多糖药物代谢的“潜在器官” |
| 4 多糖药物体内代谢PK/PD研究策略的思考 |
（3）PPARγ参与有氧运动调控chemerin改善COPD膈肌功能障碍的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 1.研究背景 |
| 2.研究目的意义 |
| 3.研究内容 |
| 文献综述 |
| 1.Chemerin及其受体 |
| 2.Chemerin与 COPD炎症反应 |
| 2.1 COPD肺内外的炎症反应 |
| 2.2 Chemerin对 COPD炎症的双向作用 |
| 2.3 Chemerin对 COPD相关炎症的影响 |
| 3.Chemerin与 COPD糖脂代谢 |
| 3.1 COPD糖脂代谢异常 |
| 3.2 chemerin调节COPD糖脂代谢 |
| 4.运动调控机体chemerin与运动防治COPD |
| 4.1 慢性阻塞性肺病的炎症与代谢异常 |
| 4.2 PPARγ-运动调节的chemerin的潜在机制 |
| 5.小结 |
| 第一部分 运动对 COPD大鼠膈肌功能障碍和对 PPARγ-chemerin/CMKLR1 通路及其下游炎性因子的影响 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 主要仪器及试剂 |
| 2.1.1 主要仪器 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要试剂配置 |
| 2.2 技术路线图 |
| 2.3 实验对象 |
| 2.4 实验分组 |
| 2.5 模型建立方案 |
| 2.6 运动干预 |
| 2.7 大鼠体重 |
| 2.8 肺功能检测 |
| 2.9 膈肌离体肌力检测 |
| 2.10 取材 |
| 2.11 肺与膈肌组织学检测 |
| 2.12 Western blot |
| 2.12.1 蛋白抽提 |
| 2.12.2 蛋白浓度测定 |
| 2.12.3 Western blot蛋白免疫印迹 |
| 2.13 统计学方法 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 CSE与运动训练影响大鼠体重 |
| 3.2 运动训练提升COPD大鼠肺功能 |
| 3.3 有氧运动提升大鼠膈肌功能 |
| 3.4 运动训练对COPD大鼠肺结构影响不明显 |
| 3.5 有氧运动影响COPD大鼠膈肌结构 |
| 3.6 运动影响膈肌PPARγ、chemerin/CMKLR1 的表达 |
| 3.7 运动抑制大鼠膈肌炎症因子的表达 |
| 3.8 运动调节大鼠膈肌降解与生长水平失衡 |
| 4.讨论分析 |
| 4.1 CSE及运动训练对COPD大鼠体重的影响 |
| 4.2 运动训练对COPD大鼠肺功能的影响 |
| 4.3 运动训练对COPD大鼠膈肌功能障碍的影响 |
| 4.4 运动训练对COPD大鼠肺与膈肌结构的影响 |
| 4.5 运动训练对COPD大鼠膈肌PPARγ-chemerin/CMKLR1 信号的影响 |
| 4.6 运动训练对COPD大鼠膈肌炎症因子的影响 |
| 4.7 运动训练对COPD大鼠膈肌泛素E3 连接酶的影响。 |
| 5.结论 |
| 第二部分 机械牵拉对LPS诱导炎症环境下L6细胞增殖水平及PPARγ-chemerin/CMKLR1通路及下游因子的影响 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 主要仪器及试剂 |
| 2.1.1 主要仪器 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要试剂配置 |
| 2.2 技术路线图 |
| 2.3 实验对象 |
| 2.4 细胞冻存和复苏 |
| 2.5 适宜LPS浓度诱导L6 成肌细胞炎症环境下培养 |
| 2.6 细胞牵拉 |
| 2.7 CCK-8 检测细胞增殖水平 |
| 2.8 Western blot |
| 2.8.1 蛋白抽提 |
| 2.8.2 BCA蛋白浓度测定 |
| 2.8.3 Western blot蛋白免疫印迹 |
| 2.9 统计学方法 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 不同浓度LPS对L6 细胞增殖水平的影响 |
| 3.2 机械牵拉促进炎症环境中L6 细胞增殖水平 |
| 3.3 机械牵拉影响PPARγ、chemerin/CMKLR1 信号表达 |
| 3.4 机械牵拉抑制L6 细胞促炎症因子的表达 |
| 3.5 机械牵拉影响L6 细胞蛋白降解与细胞激活情况 |
| 4.分析与讨论 |
| 4.1 LPS对L6 细胞增殖的影响 |
| 4.2 机械牵拉应力对LPS环境中L6 细胞活性的影响 |
| 4.3 机械牵拉对LPS刺激下L6 细胞PPARγ、chemerin/CMKLR1 表达的影响 |
| 4.4 机械牵拉对LPS刺激下L6 成肌细胞炎症水平的影响 |
| 4.5 机械牵拉对LPS刺激下L6 细胞蛋白降解与激活的影响 |
| 5.结论 |
| 第三部分 PPARγ在机械牵拉调控chemerin/CMKLR1 信号促LPS诱导炎症环境下L6 细胞增殖中的作用 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 主要仪器及试剂 |
| 2.1.1 主要仪器 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要试剂配置 |
| 2.2 技术路线图 |
| 2.3 LPS诱导L6 细胞炎症培养环境 |
| 2.4 不同浓度GW9662 和罗格列酮对LPS环境中L6 细胞活性的影响 |
| 2.5 实验对象及分组 |
| 2.6 细胞牵拉 |
| 2.7 CCK-8 检测细胞增殖水平 |
| 2.8 Western blot |
| 2.9 统计学方法 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 不同浓度GW9662 和罗格列酮对L6 细胞活性的影响 |
| 3.2 调控PPARγ的表达影响机械牵拉促炎症环境下L6 细胞增殖的作用 |
| 3.3 调控PPARγ表达影响细胞机械牵拉后chemerin/CMKLR1 信号表达 |
| 3.4 调控PPARγ表达影响细胞机械牵拉后炎症因子表达 |
| 3.5 调控PPARγ表达影响细胞机械牵拉后细胞降解与激活 |
| 4.分析与讨论 |
| 4.1 PPARγ对细胞增殖活性的影响 |
| 4.2 抑制或激活PPARγ后机械牵拉对细胞增殖活性的影响 |
| 4.3 抑制或激活PPARγ后机械牵拉对细胞PPARγ、chemerin/CMKLR1 蛋白表达的影响 |
| 4.4 抑制或激活PPARγ后机械牵拉对LPS环境下细胞炎症因子的影响 |
| 4.5 抑制或上调PPARγ后机械牵拉对肌蛋白降解、成肌细胞激活的影响 |
| 5.结论 |
| 全文总结 |
| 1.主要结论 |
| 2.研究创新点 |
| 3.研究不足及展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 大学本科至研究生学习经历 |
| 攻读博士学位期间学术科研成果及获奖情况 |
（4）食用菌多糖活性研究进展（论文提纲范文）
| 0 引言 |
| 1 食用菌多糖生物活性 |
| 1.1 免疫调节作用 |
| 1.2 抗炎作用 |
| 1.3 抗氧化性 |
| 1.4 抗肿瘤性 |
| 1.5 肠道菌群与多糖活性的关系 |
| 2 食用菌多糖产品开发及应用前景 |
| 3 结语 |
（5）松花粉多糖对鸡肠道黏膜免疫的影响及巨噬细胞的免疫调节作用（论文提纲范文）
| 符号说明 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1 松花粉及多糖概述 |
| 2 多糖的生物活性 |
| 2.1 多糖的免疫调节活性 |
| 2.2 多糖的抗病毒活性 |
| 2.3 多糖的抗肿瘤活性 |
| 2.4 多糖的其他生物学活性 |
| 3 黏膜免疫 |
| 3.1 肠道黏膜免疫屏障 |
| 3.2 多糖对肠道黏膜免疫的影响 |
| 4 肠道菌群 |
| 4.1 肠道菌群高通量测序 |
| 4.2 多糖对肠道菌群的影响 |
| 5 巨噬细胞 |
| 5.1 多糖对巨噬细胞的免疫调节活性 |
| 5.2 巨噬细胞表面受体 |
| 5.3 多糖对巨噬细胞的免疫调节信号转导途径 |
| 6 研究目的与意义 |
| 第二章 松花粉多糖对黏膜免疫的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 多糖 |
| 1.1.2 实验动物及毒株 |
| 1.1.3 主要试剂 |
| 1.1.4 主要仪器 |
| 1.1.5 多糖溶液配制 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 实验动物分组及处理 |
| 1.2.2 体重及免疫器官称重 |
| 1.2.3 外周血淋巴细胞转化率测定 |
| 1.2.4 外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞含量检测 |
| 1.2.5 SIg A含量测定 |
| 1.2.6 血清中IgG含量的检测 |
| 1.2.7 qPCR检测肠道黏膜细胞因子 |
| 1.2.8 qPCR检测肠道黏膜免疫相关分子 |
| 1.2.9 PPPS对肠绒毛结构的影响 |
| 1.2.10 PPPS的攻毒保护作用 |
| 1.3 统计分析 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 PPPS对体重及免疫器官的影响 |
| 2.2 PPPS对外周血淋巴细胞转化率的影响 |
| 2.3 PPPS对外周血CD4+、CD8+T 淋巴细胞含量变化的影响 |
| 2.4 PPPS对肠道黏膜SIgA和血清IgG的影响 |
| 2.5 PPPS对肠道黏膜细胞因子的影响 |
| 2.6 PPPS对肠道黏膜免疫相关分子mRNA的影响 |
| 2.7 PPPS对肠绒毛结构的影响 |
| 2.7.1 PPPS对十二指肠绒毛长度、宽度、隐窝深度及V/C值的影响 |
| 2.7.2 PPPS对空肠绒毛长度、宽度、隐窝深度及V/C值的影响 |
| 2.7.3 PPPS对回肠绒毛长度、宽度、隐窝深度及V/C值的影响 |
| 2.8 PPPS对肠绒毛形态的影响 |
| 2.8.1 口服PPPS7 天对肠绒毛形态的影响 |
| 2.8.2 口服PPPS14 天对肠绒毛形态的影响 |
| 2.8.3 口服PPPS21 天对肠绒毛形态的影响 |
| 2.9 PPPS对 NDV攻毒保护作用 |
| 2.9.1 攻毒后PPPS对体重及存活率的影响 |
| 2.9.2 攻毒后PPPS对肠道黏膜中病毒载量的影响 |
| 2.9.3 攻毒后肠道黏膜及肺脏组织学观察 |
| 2.10 PPPS对 H9N2 攻毒保护作用 |
| 2.10.1 攻毒后PPPS对肺脏病理变化影响 |
| 2.10.2 攻毒后PPPS对肺脏中病毒载量的影响 |
| 3 分析与讨论 |
| 第三章 松花粉多糖对鸡肠道菌群的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 多糖及溶液配制 |
| 1.1.2 实验动物 |
| 1.1.3 主要试剂 |
| 1.1.4 主要仪器 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 样品采集 |
| 1.2.2 样本DNA提取 |
| 1.2.3 PCR扩增与产物纯化 |
| 1.2.4 生物信息学和统计分析 |
| 1.2.5 测序数据质量优化 |
| 1.2.6 OTU聚类及Venn图绘制 |
| 1.2.7 物种相对丰度图及热图 |
| 1.2.8 α多样性及UPGMA聚类树分析 |
| 1.2.9 qPCR验证测序结果 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 数据质量分析 |
| 2.2 基于OTU的 Venn图 |
| 2.3 物种相对丰度图 |
| 2.4 α多样性指数分析 |
| 2.5 等级聚类曲线 |
| 2.6 稀释曲线 |
| 2.7 UPGMA聚类树 |
| 2.8 qPCR验证 |
| 3 分析与讨论 |
| 第四章 松花粉多糖对巨噬细胞的免疫调节作用 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 多糖及溶液配制 |
| 1.1.2 细胞 |
| 1.1.3 主要试剂 |
| 1.1.4 主要仪器 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 巨噬细胞的复苏与培养 |
| 1.2.2 PPPS对 HD11 细胞增殖的影响 |
| 1.2.3 PPPS对 HD11 细胞吞噬作用的影响 |
| 1.2.4 PPPS对 HD11 细胞活性氧水平的影响 |
| 1.2.5 PPPS对 HD11 细胞分泌NO的影响 |
| 1.2.6 PPPS对 HD11 细胞分泌IL-1β和TNF-α的影响 |
| 1.2.7 细胞总RNA提取及质量检测 |
| 1.2.8 mRNA测序及数据分析 |
| 1.2.9 miRNA测序及数据分析 |
| 1.2.10 PPPS对 HD11 细胞受体的影响 |
| 1.2.11 MAPK抑制剂对HD11 细胞分泌NO、TNF-α和IL-1β的影响 |
| 1.2.12 PPPS对 HD11 细胞NF-κB分子的影响 |
| 1.3 统计分析 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 PPPS对 HD11 细胞的免疫增强作用 |
| 2.1.1 PPPS对 HD11 细胞增殖作用 |
| 2.1.2 PPPS对 HD11 细胞吞噬作用的影响 |
| 2.1.3 PPPS对 HD11 细胞释放ROS的影响 |
| 2.1.4 PPPS对 HD11 细胞释放NO和 i NOS mRNA水平的影响 |
| 2.1.5 PPPS对 HD11 细胞分泌细胞因子的影响 |
| 2.2 PPPS对 HD11 细胞免疫调节作用转录组分析 |
| 2.2.1 测序数据与参考序列比对结果 |
| 2.2.2 皮尔逊相关系数和PCA分析结果 |
| 2.2.3 DEGs的鉴定和分析 |
| 2.2.4 DEGs的 GO和 KEGG通路富集分析 |
| 2.2.5 差异表达mRNA qPCR验证 |
| 2.2.6 miRNA测序分析及测序数据质量 |
| 2.2.7 miRNA差异表达鉴定和分析 |
| 2.2.8 miRNA靶基因的GO和 KEGG通路富集分析 |
| 2.2.9 差异表达miRNA的 qPCR验证 |
| 2.3 PPPS对 HD11 细胞受体的影响 |
| 2.3.1 PPPS对 HD11 细胞受体TLR2、4、MR的影响 |
| 2.3.2 TLR4 抑制剂抑制HD11 细胞分泌IL-1β、TNF-α、NO |
| 2.4 MAPK抑制剂抑制PPPS诱导HD11 细胞分泌IL-1β、TNF-α、NO |
| 2.5 PPPS对 HD11 细胞NF-κB分子的影响 |
| 2.5.1 PPPS上调HD11 细胞NF-κB分子mRNA水平 |
| 2.5.2 NF-κB抑制剂抑制HD11 细胞分泌IL-1β、TNF-α、NO |
| 3 分析与讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
（6）桔梗总多糖激活自噬调控猪肺泡巨噬细胞M1型极化的作用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 桔梗概述 |
| 1.1.1 桔梗中的化学成分 |
| 1.1.2 桔梗及其有效成分的药理作用 |
| 1.1.3 桔梗多糖的提取方法 |
| 1.1.4 桔梗多糖的药理作用 |
| 1.2 细胞自噬与免疫 |
| 1.3 巨噬细胞极化 |
| 1.4 研究目的及意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 细胞株及桔梗总多糖 |
| 2.2 试验用相关试剂 |
| 2.3 主要仪器 |
| 2.4 相关试验试剂的配制方法 |
| 2.4.1 RPMI-1640 培养基的配制 |
| 2.4.2 桔梗总多糖溶液的配制 |
| 2.4.3 IFN-γ的配制 |
| 2.4.4 LPS的配制 |
| 2.4.5 3-MA的配制 |
| 2.4.6 Bafilomycin A1 的配制 |
| 2.4.7 CQ的配制 |
| 2.4.8 MG-132 的配制 |
| 2.4.9 细胞冻存液的配制 |
| 2.4.10 磷酸盐缓冲液(PBS)的配制 |
| 2.4.11 蛋白质免疫印迹相关试剂配制 |
| 2.5 试验方法 |
| 2.5.1 PGPS_t的制备与分析 |
| 2.5.1.1 PGPS_t的制备 |
| 2.5.1.2 PGPS_t的结构表征 |
| 2.5.2 细胞复苏、培养、传代以及冻存 |
| 2.5.3 细胞处理方法 |
| 2.5.3.1 桔梗多糖诱导自噬 |
| 2.5.3.2 桔梗多糖促进M1 型极化 |
| 2.5.4 细胞活力测定 |
| 2.5.5 GFP-LC3 质粒转染 |
| 2.5.6 酶联免疫吸附试验(ELISA) |
| 2.5.7 荧光探针检测i NOS |
| 2.5.8 实时荧光定量聚合酶链反应(PCR) |
| 2.5.8.1 总RNA的提取 |
| 2.5.8.2 mRNA反转录 |
| 2.5.8.3 荧光定量PCR |
| 2.5.9 蛋白质分离与蛋白质印迹 |
| 2.5.9.1 细胞裂解 |
| 2.5.9.2 蛋白浓度的检测 |
| 2.5.9.3 SDS-PAGE电泳 |
| 2.5.9.4 转膜 |
| 2.5.9.5 抗体孵育 |
| 2.5.10 间接免疫荧光 |
| 2.5.11 免疫共沉淀(CO-IP) |
| 2.5.12 统计分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 PGPS_t的紫外光谱、三重螺旋构象和微观结构 |
| 3.2 PGPS_t在3D4/21 细胞中激活自噬 |
| 3.3 自噬抑制剂抑制PGPS_t诱导的自噬 |
| 3.4 PGPS_t通过PI3K/AKT/mTOR和 MEK/ERK通路诱导自噬 |
| 3.5 3D4/21 细胞M1 极化后的形态学变化 |
| 3.6 M1 型极化相关基因在受激3D4/21 细胞中表达的变化 |
| 3.7 受激的3D4/21 细胞中M1 蛋白表达的变化 |
| 3.8 SOCS1/2 通过溶酶体途径降解 |
| 3.9 PGPS_t对自噬的调节影响SOCS1/2 的表达 |
| 3.10 SOCS1/2 蛋白与LC3 蛋白的相互作用 |
| 4 讨论 |
| 4.1 PGPS_t的结构表征 |
| 4.2 PGPS_t诱导3D4/21 自噬 |
| 4.3 PGPS_t促进3D4/21 细胞M1 型极化 |
| 4.4 PGPS_t的临床意义 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在读硕士期间取得的主要成就 |
（7）甘草多糖提取动力学、理化特性及生物活性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 甘草研究进展 |
| 1.1.1 甘草概述 |
| 1.1.2 甘草有效成分及应用 |
| 1.2 甘草多糖研究进展 |
| 1.2.1 甘草多糖的提取 |
| 1.2.2 甘草多糖的分离纯化 |
| 1.2.3 提取多糖动力学研究进展 |
| 1.2.4 甘草多糖抗氧化、抗病毒作用的研究进展 |
| 1.3 药用植物活性微囊化研究 |
| 1.4 课题研究内容及意义 |
| 1.4.1 目前研究中存在的问题 |
| 1.4.2 研究内容 |
| 第2章 超声辅助提取甘草多糖及其理化特性、结构分析 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 试剂 |
| 2.1.3 仪器 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 乌拉尔甘草的预处理 |
| 2.2.2 乌拉尔甘草多糖的提取工艺 |
| 2.2.3 提取乌拉尔甘草多糖的单因素试验 |
| 2.2.4 超声辅助提取乌拉尔甘草多糖动力学模型的建立 |
| 2.2.5 乌拉尔甘草多糖热力学参数分析 |
| 2.2.6 HPLC-DAD-ELSD法分离分析GP |
| 2.2.7 圆二色性(CD)测定 |
| 2.2.8 热分析 |
| 2.2.9 GP的流变测定 |
| 2.2.10 GP的结构分析 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 乌拉尔甘草多糖的提取单因素试验 |
| 2.3.2 最优提取模型的建立及统计分析 |
| 2.3.3 不同因素对GP产率的影响 |
| 2.3.4 预测模型的验证 |
| 2.3.5 GP提取动力学模型 |
| 2.3.6 热力学分析 |
| 2.3.7 GP理化性质的分析 |
| 2.3.8 GP的热稳定性、耐酸碱性和流变性能分析 |
| 2.3.9 GP的结构分析 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 甘草多糖的抗病毒性分析 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 病毒梯度和病毒增长值检测 |
| 3.2.2 CCK-8 细胞毒性试验 |
| 3.2.3 实时定量PCR检测基因在细胞中的相对表达 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 GP对 MDBK细胞抗BVDV活性的影响 |
| 3.3.2 抗病毒作用对激活免疫系统的研究 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 甘草多糖微囊的制备、表征检测及其应用于小鼠创面的效果研究 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 材料 |
| 4.1.2 仪器 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 GPM和胶原蛋白海绵的制备 |
| 4.2.2 GPM的结构特征分析 |
| 4.2.3 动物实验模型的建立与处理 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 GPM的制备、理化性质和结构测定 |
| 4.3.2 血常规指标和血液生化指标 |
| 4.3.3 伤口愈合活性评价及组织学分析 |
| 4.3.4 肉芽组织中羟脯氨酸含量测定、基因和蛋白质表达分析 |
| 4.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（8）一株蘑菇内生细菌Bacillus halotolerans DMG7-2次级代谢产物研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 蘑菇及其内生菌概述 |
| 1.1.1 蘑菇及其内生菌生物活性概述 |
| 1.2 芽孢杆菌及其次级代谢产物概述 |
| 1.3 表面活性素类概述 |
| 1.3.1 表面活性素类化合物医疗价值 |
| 1.3.2 表面活性素在其他方面的的应用潜力 |
| 1.3.3 表面活性素的来源、发酵及生产 |
| 1.4 选题的目的及意义 |
| 第2章 耐盐芽孢杆菌DMG7–2 次级代谢产物研究 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 菌株 |
| 2.1.2 试剂 |
| 2.1.3 仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 孢子悬液的配置 |
| 2.2.2 大量发酵及样品制备 |
| 2.2.3 化合物分离 |
| 2.2.4 化合物酸水解及Marfey分析方法 |
| 2.2.5 化合物1 量子化学计算~(13)C NMR理论和计算细节 |
| 2.3 化合物结构鉴定 |
| 2.3.1 新化合物结构解析 |
| 2.3.2 已知化合物结构鉴定、解析 |
| 2.4 小结与讨论 |
| 第3章 表面活性素类化合物生物活性测定 |
| 3.1 抑菌活性 |
| 3.1.1 实验方法 |
| 3.1.2 抑菌实验结果 |
| 3.2 抗肿瘤活性 |
| 3.2.1 细胞继代及培养 |
| 3.2.2 MTT测试方法 |
| 3.2.3 抗肿瘤活性测试结果 |
| 3.3 小结与讨论 |
| 第4章 结论与讨论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录A 硕士期间发表的论文 |
| 附录B 量子化学计算~(13)C NMR参数 |
| 附录C 化合物谱图 |
（9）硫酸化酵母葡聚糖的药理、毒理及临床应用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 主要符号对照表 |
| 第一章 引言 |
| 1.1 常见的葡聚糖及其生物活性功能 |
| 1.1.1 免疫调节及抗肿瘤作用 |
| 1.1.2 抗菌抗病毒作用 |
| 1.1.3 调节肠道菌群作用 |
| 1.1.4 抗肥胖和降低胆固醇作用 |
| 1.1.5 抗炎抗氧化作用 |
| 1.2 常见葡聚糖的毒性研究进展 |
| 1.3 硫酸化修饰对酵母葡聚糖结构的影响 |
| 1.3.1 硫酸化修饰对葡聚糖抗氧化功能的影响 |
| 1.3.2 硫酸化修饰对葡聚糖抗肿瘤功能的研究 |
| 1.3.3 硫酸化修饰对葡聚糖抗炎功能的影响 |
| 1.3.4 硫酸化修饰对葡聚糖其它功能的影响 |
| 1.4 硫酸化葡聚糖的临床应用总结 |
| 1.4.1 作为疫苗佐剂 |
| 1.4.2 作为饲料添加剂 |
| 1.5 本研究的目的和意义 |
| 第二章 硫酸化酵母葡聚糖的药理活性研究 |
| 2.1 硫酸化酵母葡聚糖体外对鸡巨噬细胞HD11 的影响研究 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 试验方法 |
| 2.1.3 试验结果 |
| 2.2 硫酸化酵母葡聚糖体外对乳酸杆菌的影响 |
| 2.2.1 材料和试剂 |
| 2.2.2 方法 |
| 2.2.3 试验结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 本章总结 |
| 第三章 硫酸化酵母葡聚糖的毒性研究 |
| 3.1 最大给药量试验 |
| 3.1.1 材料和试剂 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.2 研究结果 |
| 3.2.1 临床观察结果 |
| 3.2.2 体重变化结果 |
| 3.2.3 脏器指数结果 |
| 3.2.4 器官病理切片结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 本章总结 |
| 第四章 硫酸化酵母葡聚糖对小鼠肠道菌群的影响 |
| 4.1 仪器及试剂 |
| 4.1.1 主要仪器及公司 |
| 4.1.2 药品 |
| 4.1.3 试验动物 |
| 4.1.4 sGSC的准备 |
| 4.2 研究方案 |
| 4.2.1 试验设计 |
| 4.2.2 肠道菌分析 |
| 4.2.3 结肠和回肠的组织学观察 |
| 4.2.4 短链脂肪酸分析 |
| 4.2.5 数据分析 |
| 4.3 研究结果 |
| 4.3.1 体重和器官指数结果 |
| 4.3.2 肠道病理观察结果 |
| 4.3.3 肠道菌群α多样性分析结果 |
| 4.3.4 肠道菌群β多样性分析结果 |
| 4.3.5 韦恩图分析结果 |
| 4.3.6 肠道菌群组成分析结果 |
| 4.3.7 SCFAs分析结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 本章总结 |
| 第五章 硫酸化酵母葡聚糖对鸡球虫病的防治效果 |
| 5.1 概论 |
| 5.2 研究准备 |
| 5.2.1 主要仪器 |
| 5.2.2 试验虫株 |
| 5.2.3 试验动物 |
| 5.2.4 葡聚糖的准备 |
| 5.3 方法 |
| 5.3.1 试验方案 |
| 5.3.2 效果观察及判定 |
| 5.3.3 数据分析 |
| 5.4 结果 |
| 5.4.1 临床观察结果 |
| 5.4.2 体重变化结果 |
| 5.4.3 卵囊排出情况 |
| 5.4.4 脏器指数结果 |
| 5.4.5 盲肠菌群分析结果 |
| 5.5 讨论 |
| 5.6 本章总结 |
| 第六章 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（10）大气PM2.5及其它污染因子致肺损伤分子机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 综述 |
| 1.1 PM_(2.5)污染现状及危害 |
| 1.1.1 PM_(2.5)污染现状 |
| 1.1.2 PM_(2.5)污染的危害 |
| 1.2 NPAHS污染现状及危害 |
| 1.2.1 NPAHs污染现状 |
| 1.2.2 NPAHs污染的危害 |
| 1.3 SO_2污染现状及危害 |
| 1.3.1 SO_2污染现状 |
| 1.3.2 SO_2污染的危害 |
| 1.4 内毒素污染现状及危害 |
| 1.4.1 内毒素污染现状 |
| 1.4.2 内毒素污染的危害 |
| 1.5 污染物联合暴露毒性研究 |
| 1.6 肺部疾病主要机制 |
| 1.6.1 炎症机制 |
| 1.6.2 氧化应激 |
| 1.6.3 DNA损伤 |
| 1.6.4 表观遗传学机制 |
| 1.6.5 铁死亡与肺部疾病 |
| 1.7 本课题的提出及研究内容和意义 |
| 1.7.1 研究内容及意义 |
| 1.7.2 创新点 |
| 第二章 气道滴注PM_(2.5)、1-NP和9-NA致大鼠肺DNA损伤的分子机制研究 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.2.1 材料、试剂与仪器 |
| 2.2.2 PM_(2.5)样品采集 |
| 2.2.3 PM_(2.5)成分分析 |
| 2.2.4 PM_(2.5)混悬液、1-NP和9-NA溶液制备 |
| 2.2.5 动物处理方法 |
| 2.2.6 彗星实验分析 |
| 2.2.7 检测DNA与蛋白质交联率 |
| 2.2.8 实时定量PCR(RT-PCR)分析 |
| 2.2.9 蛋白免疫印迹(WB)分析 |
| 2.2.10 酶联免疫吸附分析(ELISA) |
| 2.2.11 数据统计分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 PM_(2.5)、1-NP和9-NA暴露引起大鼠肺DNA损伤 |
| 2.3.2 PM_(2.5)、1-NP和9-NA暴露对大鼠肺组织DNA损伤修复基因表达的影响 |
| 2.3.3 PM_(2.5)、1-NP和9-NA暴露引起大鼠肺氧化应激 |
| 2.3.4 PM_(2.5)、1-NP和9-NA暴露对大鼠肺组织代谢酶活性的影响 |
| 2.3.5 比较PM_(2.5)与中浓度 1-NP、PM_(2.5)与中浓度 9-NA对大鼠肺DNA损伤效应 |
| 2.4 讨论与小结 |
| 第三章 真实环境大气PM_(2.5)暴露致大鼠肺DNA损伤的分子机制研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.2.1 材料、试剂与仪器 |
| 3.2.2 真实环境大气PM_(2.5)暴露系统 |
| 3.2.3 PM_(2.5)样品采集 |
| 3.2.4 PM_(2.5)成分分析 |
| 3.2.5 动物处理方法 |
| 3.2.6 HE分析 |
| 3.2.7 RT-PCR分析 |
| 3.2.8 WB分析 |
| 3.2.9 ELISA分析 |
| 3.2.10 亚硫酸氢盐测序(BSP)分析 |
| 3.2.11 数据统计分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 真实环境大气PM_(2.5)暴露对大鼠体重和肺体比的影响 |
| 3.3.2 真实环境大气PM_(2.5)暴露引起大鼠肺组织病理损伤 |
| 3.3.3 真实环境大气PM_(2.5)暴露引起大鼠肺DNA损伤 |
| 3.3.4 真实环境大气PM_(2.5)暴露引起大鼠肺氧化应激 |
| 3.3.5 真实环境大气PM_(2.5)暴露引起大鼠肺组织OGG1和MTH1 启动子区DNA甲基化水平变化 |
| 3.3.6 真实环境大气PM_(2.5)暴露对肺组织DNA损伤修复基因表达的影响 |
| 3.3.7 真实环境大气PM_(2.5)暴露对肺组织癌基因和抑癌基因表达的影响 |
| 3.4 讨论与小结 |
| 第四章 PM_(2.5)和SO_2复合暴露致大鼠肺炎症损伤的分子机制研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料和方法 |
| 4.2.1 材料、试剂与仪器 |
| 4.2.2 PM_(2.5)样品采集 |
| 4.2.3 PM_(2.5)成分分析 |
| 4.2.4 动物处理方法 |
| 4.2.5 炎性细胞计数 |
| 4.2.6 HE分析 |
| 4.2.7 透射电子显微镜观察 |
| 4.2.8 RT-PCR分析 |
| 4.2.9 WB分析 |
| 4.2.10 ELISA分析 |
| 4.2.11 数据统计分析 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 PM_(2.5)和SO_2复合暴露引起大鼠肺组织病理损伤 |
| 4.3.2 PM_(2.5)和SO_2复合暴露引起大鼠肺组织超微结构改变 |
| 4.3.3 PM_(2.5)和SO_2复合暴露对大鼠肺泡灌洗液中炎性细胞数目的影响 |
| 4.3.4 PM_(2.5)和SO_2复合暴露影响大鼠肺组织炎性指标水平变化 |
| 4.3.5 PM_(2.5)和SO_2复合暴露对大鼠肺组织NO/i NOS的影响 |
| 4.3.6 PM_(2.5)和SO_2复合暴露对大鼠肺组织TLR4/p38/NF-κB通路相关因子表达的影响 |
| 4.4 讨论与小结 |
| 第五章 PM_(2.5)和LPS复合暴露对小鼠肺组织铁死亡和纤维化相关因子表达的影响 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 材料和方法 |
| 5.2.1 材料、试剂与仪器 |
| 5.2.2 PM_(2.5)样品采集 |
| 5.2.3 PM_(2.5)成分分析 |
| 5.2.4 动物分组及染毒 |
| 5.2.5 HE分析 |
| 5.2.6 WB分析 |
| 5.2.7 ELISA分析 |
| 5.2.8 Masson染色分析 |
| 5.2.9 数据统计分析 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 真实环境大气PM_(2.5)和LPS复合暴露引起小鼠体重和肺脏器系数变化 |
| 5.3.2 真实环境大气PM_(2.5)和LPS复合暴露引起小鼠肺组织病理损伤 |
| 5.3.3 真实环境大气PM_(2.5)和LPS复合暴露对小鼠肺组织氧化应激指标的影响 |
| 5.3.4 真实环境大气PM_(2.5)和LPS复合暴露对小鼠肺组织铁死亡指标的影响 |
| 5.3.5 真实环境大气PM_(2.5)和LPS复合暴露对小鼠组织肺纤维化的影响 |
| 5.4 讨论与小结 |
| 第六章 结论与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简况及联系方式 |
四、香菇多糖对大鼠肺泡巨噬细胞活性的影响（论文参考文献）
- [1]香菇多糖对氨氮胁迫泥鳅抗氧化功能的影响[J]. 刘成荣,刘丽香. 生态学杂志, 2021(11)
- [2]多糖药物体内代谢及PK/PD关键技术研究的进展与思考[J]. 徐慧,杨新宇,赵哲辉,王琰. 中国临床药理学与治疗学, 2021
- [3]PPARγ参与有氧运动调控chemerin改善COPD膈肌功能障碍的机制研究[D]. 李健. 上海体育学院, 2021
- [4]食用菌多糖活性研究进展[J]. 段亚宁,朱泓静,陈舒雅,周莹,马高兴. 农产品加工, 2021(11)
- [5]松花粉多糖对鸡肠道黏膜免疫的影响及巨噬细胞的免疫调节作用[D]. 沙洲. 山东农业大学, 2021
- [6]桔梗总多糖激活自噬调控猪肺泡巨噬细胞M1型极化的作用[D]. 李丽萍. 山东农业大学, 2021(12)
- [7]甘草多糖提取动力学、理化特性及生物活性研究[D]. 于霖淼. 兰州理工大学, 2021(01)
- [8]一株蘑菇内生细菌Bacillus halotolerans DMG7-2次级代谢产物研究[D]. 周国峰. 兰州理工大学, 2021(01)
- [9]硫酸化酵母葡聚糖的药理、毒理及临床应用研究[D]. 刘博. 中国农业科学院, 2021(09)
- [10]大气PM2.5及其它污染因子致肺损伤分子机制研究[D]. 赵利芳. 山西大学, 2021(01)