一、预防草鱼出血病的浸泡免疫法（论文文献综述）
郝凯[1]（2017）在《利用大肠杆菌构建GCRV基因工程疫苗系统研究》文中研究说明草鱼呼肠孤病毒（Grass carp reovirus,GCRV）引起的草鱼出血病（Grass carp hemorrhage）是严重危害草鱼的传染性疾病。但是,草鱼出血病的有效防控仍然存在挑战。疫苗免疫是预防草鱼出血病的有效途径。核酸疫苗具有制备简单、安全性高和免疫应答有效持久等优点,但是作为一种外源物质,易被组织降解、清除,导致其不能长期稳定的发挥免疫效应。在本研究中借助细菌菌蜕技术,以大肠杆菌DH5α为载体,制备了大肠杆菌菌蜕载GCRV vp7核酸疫苗,以提高核酸疫苗的免疫效果为目的,评价菌蜕介导的核酸疫苗对草鱼出血病的防控效果。细菌表面展示疫苗因其具有良好的免疫应答效果使之在疫苗开发中具有优势。本研究借助细菌表面展示技术开发了大肠杆菌表面展示GCRV VP7蛋白疫苗;进一步分别构建了大肠杆菌BL21（DE3）载嗜水气单胞菌外膜A蛋白（Outer membrane protein A,OmpA）、主要黏附素蛋白（Major adhesin,Mah）与VP7蛋白共展示疫苗,以期通过浸浴免疫达到注射免疫抗病效果,对共展示疫苗浸浴特性及其机制进行了初步研究。取得结果如下:1.通过基因重组技术构建了pCAT-lysisE/SNA/Smap29温控裂解质粒,变温诱导表达,成功制备大肠杆菌DH5α菌蜕（DH5α-BG）。溶菌动力学试验结果显示:温度诱导质粒表达4 h后,大肠杆菌的裂解效率就达到了99%。扫描电镜观察结果显示绝大部分菌体经诱导形成菌蜕,中间和两极部位出现跨膜孔道。利用菌蜕形成的跨膜孔道,采用扩散法将GCRV vp7核酸疫苗（pcDNA-vp7）装载入菌蜕内,制备了大肠杆菌DH5α菌蜕载核酸疫苗（DH5α-BG/pcDNA-vp7）。肌肉注射DH5α-BG/pcDNA-vp7疫苗免疫草鱼（1.8-2.0 g）,结果显示:DH5α-BG/pcDNA-vp7疫苗可显着提高血清抗VP7蛋白特异性抗体的产生水平（P<0.05）,提高核酸疫苗在草鱼组织中的保留和表达时间,提高酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（AKP）、超氧化物歧化酶（SOD）和总抗氧化能力（T-AOC）活性和免疫相关基因（TNF-α、IL-1β、IgM、MHCI和IgD）的表达水平（P<0.05）。免疫草鱼GCRV攻毒后,DH5α-BG/pcDNA-vp7疫苗组（5μg/尾）免疫保护率达到90%,显着高于相同剂量下纯pcDNA-vp7疫苗组（RPS=42.22%）（P<0.01）,上述结果表明菌蜕介导的vp7核酸疫苗能够在低剂量下实现对草鱼的免疫保护。2.通过基因重组技术构建了冰晶核蛋白N端结构域（InpN）和GCRV外衣壳蛋白vp7融合表达的pET28a-InpN/vp7质粒。重组质粒在大肠杆菌中诱导表达后,Western blot检测到预期大小的目的蛋白条带,细胞组分检测发现目的蛋白定位于外层膜上,免疫荧光观察到重组菌的表面有特异性的绿色荧光信号。将大肠杆菌BL21（DE3）表面展示VP7蛋白疫苗（BL21/InpN/vp7）经腹腔注射和浸浴的方式免疫草鱼（2.7-3.0 g）,结果显示:疫苗注射免疫草鱼7到21 d,血清特异性抗VP7蛋白抗体产生水平,ACP、AKP和T-AOC活性以及免疫相关基因（TNF-α、IL-1β、IgM和MHCI）的表达水平均出现显着性的上升（20-10μg VP7蛋白/尾鱼,P<0.01）,并且存在疫苗注射剂量依赖效应,而疫苗浸浴免疫草鱼后,并不能有效的刺激上述免疫相关指标的上升。免疫草鱼GCRV攻毒后,疫苗注射免疫最高剂量组（20μg VP7蛋白/尾鱼）免疫保护率达到88.89%,而在疫苗浸浴免疫最高浓度组(20 mg L-1VP7蛋白)免疫保护率仅有18.89%。上述结果表明大肠杆菌BL21（DE3）表面展示VP7蛋白疫苗可以通过注射方式刺激草鱼产生强烈免疫应答反应,高效的保护草鱼对抗GCRV的感染。3.在pET28a-InpN/vp7质粒上分别插入了嗜水气单胞菌外膜蛋白中的外膜A蛋白基因（OmpA）和主要黏附素蛋白基因（Mah）,分别构建了含有pET28a-InpN/vp7-OmpA和pET28a-InpN/vp7-Mah质粒的大肠杆菌BL21（DE3）菌株,经IPTG诱导制备了大肠杆菌BL21（DE3）表面共展示vp7-OmpA和vp7-Mah蛋白疫苗（BL21/InpN/vp7-OmpA和BL21/InpN/vp7-Mah）。将2种疫苗经浸浴免疫草鱼,结果显示:草鱼免疫7到21 d,共展示vp7-Mah蛋白疫苗(20-10 mg L-1 VP7蛋白)能够显着提高血清特异性抗VP7蛋白抗体产生水平（P<0.01）,显着提高ACP、AKP和T-AOC活性以及免疫相关基因（TNF-α、IL-1β、IgM和MHCI）的表达水平（P<0.01）,并且存在疫苗浓度依赖效应;而共展示vp7-OmpA蛋白疫苗并不能有效的刺激上述免疫相关指标的上升。将2种疫苗经注射免疫草鱼,结果显示:草鱼免疫7到21 d,2种疫苗（20-10μg VP7蛋白/尾鱼）均能够显着诱导上述免疫相关指标的上升（P<0.01）。免疫草鱼GCRV攻毒结果显示:在20 mg L-1 VP7蛋白浓度下,表面共展示vp7-Mah蛋白疫苗浸浴免疫保护率达到51.11%,而表面共展示vp7-OmpA蛋白疫苗浸浴免疫保护率仅有20%。表面共展示vp7-OmpA和vp7-Mah蛋白疫苗注射免疫保护率分别达到82.22%和91.11%（20μg VP7蛋白/尾鱼）。上述结果表明在大肠杆菌表面展示VP7蛋白疫苗上锚定Mah蛋白后,疫苗能经浸浴方式刺激草鱼产生强烈免疫应答反应,有效的保护草鱼对抗GCRV的感染。4.以鲤上皮瘤细胞（EPC）为模型,采用细胞裂解计数法研究了BL21/InpN/vp7-Mah对EPC细胞的粘附和侵染性,我们发现Mah蛋白的表面展示能够显着提高大肠杆菌的粘附和侵染能力。囊泡介导的胞吞在BL21/InpN/vp7-Mah内化过程发挥主要作用。通过荧光显像和流式细胞术研究了BL21/InpN/vp7-Mah内化与微丝变化的关系,结果发现BL21/InpN/vp7-Mah内化过程可以引起细胞内微丝的重排以及聚合组装。微丝聚合抑制剂预处理细胞能够明显抑制BL21/InpN/vp7-Mah的内化,这些结果表明BL21/InpN/vp7-Mah的内化过程依赖微丝的重排和聚合。利用Western blot技术研究了BL21/InpN/vp7-Mah内化过程对具有微丝调控功能的p38-HSP27通路中p38激酶和HSP27磷酸化的影响,结果发现BL21/InpN/vp7-Mah内化过程能够明显促进p38激酶和HSP27发生磷酸化。之后,使用p38激酶抑制剂预处理细胞后,BL21/InpN/vp7-Mah的内化受到抑制,这些结果表明具有调控微丝功能的p38-HSP27通路的激活在BL21/InpN/vp7-Mah侵染EPC细胞过程中起到了一定作用。综上所示,菌蜕作为GCRV vp7核酸疫苗递送载体可以提高核酸疫苗在草鱼组织中的保留和表达时间,提高草鱼特异性抗体的产生水平和免疫应答水平,实现草鱼高效免疫保护。大肠杆菌BL21（DE3）表面展示VP7蛋白疫苗能通过注射方式实现对草鱼的高效免疫保护。进一步,利用表面展示技术锚定Mah蛋白后,大肠杆菌BL21（DE3）表面共展示vp7-Mah蛋白疫苗经浸浴方式提高了对草鱼的免疫保护,有效抵抗GCRV感染,这可能与Mah蛋白能够提高大肠杆菌BL21（DE3）的侵袭力有关。以上研究结果为预防草鱼出血病疫苗的开发提供了参考资料和新的思路。
丁华林[2]（2014）在《草鱼人工免疫防疫技术》文中研究说明草鱼是淡水养殖的主养品种之一,但草鱼在养殖过程中的"四病"（赤皮病、烂鳃病、肠炎病、出血病）和细菌性败血症病制约着草鱼养殖的发展,其中病毒性草鱼出血病,死亡率可高达90%以上,一般药物很难防控。为了突破草鱼病害造成的发展瓶颈,珠江水产研究所2011年研制出草鱼出血病活疫苗和淡水鱼类败血病细菌疫苗,标志着我国水产疫苗产业化的开启。
丁德明[3]（2015）在《草鱼“四大病”症状及防治方法（上）》文中指出草鱼易贪食,容易生病,养殖过程中易发生烂鳃病、肠炎病、赤皮病和出血病,俗称草鱼"四大病"。特别是草鱼出血病,是一种流行广、季节长、发病率高、死亡率极高的传染性疾病,对草鱼鱼种的生产影响大。一、草鱼出血病1.流行特点1危害对象:从2.515厘米大小的草鱼都可发病,有时二龄以上的大草鱼也患病。本病发病率高,死亡率达70%80%。
江河,戚少燕,陈宇,李艳和[4]（2002）在《草鱼出血病两种免疫途径的对照试验》文中进行了进一步梳理用浸泡免疫法和特异化饵料免疫法对当年草鱼苗进行免疫对照试验。结果表明 ,特异化饵料免疫组的成活率为 90 4 %± 0 4 % ,产量为 16 5 4 5± 2 78 5kg/hm2 ,获得平均免疫保护力为 95 % ;3项指标分别比浸泡免疫法高出 30 1%± 5 2 %、6 36± 4 70 2kg/hm2 和 30 %。
汪建国[5]（1998）在《鱼病防治实用技术(连载)》文中认为
汤景山[6]（2014）在《草鱼注射疫苗防疫效果好》文中研究说明针对草鱼"四病"（病毒性出血病、细菌性并发症、暴发性出血病、肝胆综合症）传染性强、发病快、死亡率高、一般药物难以控制的特点,新沂市草桥镇在渔业科技入户工作中采用人工免疫手段,推广草鱼人工注射疫苗防疫技术,取得了显着的防治效果。一、疫苗的种类用于预防草鱼"四病"的疫苗主要有三种:其一是草鱼出血病冻干苗（简称冻干苗）,用于预防草鱼病毒性出血病的活
杨先乐,夏春,左文功,吴泉明,郭永金[7]（1992）在《草鱼出血病细胞培养灭活疫苗的研究——生产性免疫试验》文中提出用草鱼出血病细胞培养灭活疫苗（CFRV疫苗）在较大的范围内对草鱼进行免疫试验,通过五种不同的草鱼放养方式以及二种疫苗给予途径的比较观察,证实CFRV疫苗在生产上有广泛的应用性。试验结果表明,一龄草鱼种使用CFRV疫苗后成活率比对照纽提高25.5±15.8（10）%,二龄草鱼种的成活率提高31.2±8.1（7）%,草鱼成鱼的成活率提高26.7±5.4（3）%。本文还对目前CFRV疫苗制作的成本和使用疫苗后带来成活率提高的经济效益作了分析,指出在生产上推广应用是可行的。
王玉堂[8]（2019）在《疫苗及其在水生动物疾病预防中的应用(七)》文中认为上接2018年12期九、水产用疫苗的使用方法渔用疫苗是通过接种对象体内产生免疫应答达到预防疾病效果的,因而,有可能因接种对象自身不够健康而不能达到预期的免疫效果。因此,要使渔用疫苗最大限度地发挥效果,平时合理的饲养管理和卫生管理是重
赖东书[9]（2012）在《草鱼人工免疫防疫技术》文中认为草鱼在养殖过程中的"四病"（病毒性出血病、细菌性赤皮病、烂鳃病、肠炎病）危害,给草鱼养殖业造成重大损失,严重制约着草鱼养殖的发展。针对"四病"传染性强、发病快、死亡率高、一般药物难以控制的特点,采用人工免疫手段,是目前预防控制"四病"流行的有效方法。
梁仍昊[10]（2016）在《鱼类疫苗自动注射机注射机理与关键机构的研究》文中研究指明在鱼类病害防治中,注射免疫防病技术可有效减少化学药物防治对环境造成的污染和对鱼类品质的影响。注射免疫接种法所需疫苗剂量少,疫苗剂量准确可控,并且疫苗受环境影响小,是鱼类免疫技术的理想方法。机械自动化注射接种可以提高注射作业效率、降低人工接种强度,有利于鱼苗注射接种技术的推广。本课题测量了草鱼鱼苗的几何参数和重心位置等物理特性,根据注射的要求,进行注射参数的研究,并将研究结果应用于实际疫苗自动注射机的设计中,完成了鱼苗疫苗自动注射机关键机构和控制系统的设计。结果如下：1.鱼苗的重量与其几何参数无明显关联,但鱼苗的各个几何参数之间具有较大的关联性。鱼苗厚度与长度的比值约为0.17,厚度与宽度的比值约为0.72。鱼苗在腹部和背部同时受力的情况下,重心距离腹部更近,且重心离腹部的距离为总宽度的0.27-0.36。鱼苗背鳍与PVC底板的摩擦系数平均值为鱼苗腹部与PVC底板的摩擦系数平均值的0.81倍,即在分别与PVC底板的接触运动时,鱼苗背部与底板之间摩擦力较小。2.对鱼苗自动导向机构进行参数研究和优化,得出结论：当自动导向机构的斜滑板倾角θ为40°,侧翻板夹角α为75°,侧翻板仰角β为70°时,鱼苗翻转效果最佳。在此条件下,鱼苗侧翻成功率为96.7%。3.完成了鱼苗自动注射机关键机构的设计。主要设计包括自动导向机构、自动夹持机构、自动注射机构,实现鱼苗导向、定位、夹紧、注射和放行的连续作业。通过对草鱼基本尺寸的测量和分析,确定对应机构的尺寸,并通过三维建模检验机构运动及干涉情况。4.完成了鱼苗疫苗自动注射机控制系统的设计。包括控制器和电器元件的选型,控制流程的确定和程序编写。可实现鱼苗位置检测,鱼苗自动注射等功能。5.完成了鱼类疫苗自动注射系统的初步设计。注射系统包括鱼头自动导向运输机构,鱼苗自动分级机构和不同规格的疫苗自动注射机。可实现自动上鱼、鱼头自动导向、自动分拣和注射等功能。
二、预防草鱼出血病的浸泡免疫法（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、预防草鱼出血病的浸泡免疫法（论文提纲范文）
（1）利用大肠杆菌构建GCRV基因工程疫苗系统研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 草鱼出血病研究概况 |
| 1.2 草鱼出血病流行病学研究 |
| 1.3 草鱼呼肠孤病毒（GCRV）生物学研究 |
| 1.3.1 GCRV形态特征 |
| 1.3.2 GCRV理化特征 |
| 1.3.3 GCRV细胞培养和感染特征 |
| 1.3.4 GCRV基因组特征 |
| 1.3.5 GCRV基因组转录与翻译 |
| 1.4 草鱼呼肠孤病毒（GCRV）的检测 |
| 1.5 草鱼出血病防治方法研究进展 |
| 1.5.1 草鱼出血病生态防治 |
| 1.5.2 草鱼出血病药物防控 |
| 1.5.3 RNA干扰技术预防草鱼出血病 |
| 1.5.4 草鱼出血病疫苗防治 |
| 1.6 疫苗免疫途径研究进展 |
| 1.6.1 注射免疫途径 |
| 1.6.2 口服免疫途径 |
| 1.6.3 浸泡免疫途径 |
| 1.7 菌蜕研究进展 |
| 1.7.1 菌蜕形成机制 |
| 1.7.2 菌蜕疫苗免疫效果研究 |
| 1.7.3 菌蜕作为药物载体研究 |
| 1.7.4 菌蜕作为抗原载体研究 |
| 1.7.5 菌蜕作为DNA载体研究 |
| 1.8 细菌表面展示研究进展 |
| 1.8.1 细菌表面展示系统简介 |
| 1.8.2 细菌表面展示在疫苗开发中的应用 |
| 1.8.3 基于冰核蛋白的细菌表面展示研究 |
| 1.8.4 基于冰核蛋白的细菌表面展示在疫苗开发中的应用 |
| 1.9 选题的目的和意义 |
| 第二章 大肠杆菌菌蜕载GCRV vp7核酸疫苗构建 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 试验动物和病毒 |
| 2.1.2 细菌和质粒 |
| 2.1.3 pCAT-lysisE/SNA/Smap29重组质粒构建 |
| 2.1.4 pCAT-lysisE/SNA/Smap29重组质粒表达 |
| 2.1.5 大肠杆菌DH5α菌蜕扫描电镜检测 |
| 2.1.6 大肠杆菌DH5α菌蜕载vp7核酸疫苗构建 |
| 2.1.7 大肠杆菌DH5α菌蜕载vp7核酸疫苗装载效果检测 |
| 2.1.8 疫苗免疫和攻毒试验 |
| 2.1.9 不同组织中pcDNA-vp7检测 |
| 2.1.10 肌肉组织中pcDNA-vp7表达检测 |
| 2.1.11 草鱼血清抗体免疫效价测定 |
| 2.1.12 免疫相关生理指标检测 |
| 2.1.13 免疫相关基因表达测定 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 pCAT-lysisE/SNA/Smap29重组质粒构建结果 |
| 2.2.2 pCAT-lysisE/SNA/Smap29重组质粒诱导表达结果 |
| 2.2.3 大肠杆菌DH5α菌蜕扫描电镜检测 |
| 2.2.4 大肠杆菌菌蜕载核酸疫苗装载效果分析 |
| 2.2.5 不同组织中pcDNA-vp7检测结果 |
| 2.2.6 肾脏组织中pcDNA-vp7表达检测结果 |
| 2.2.7 草鱼血清抗体效价测定结果 |
| 2.2.8 免疫相关生理指标测定结果 |
| 2.2.9 免疫相关基因检测结果 |
| 2.2.10 免疫保护效果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 大肠杆菌表面展示VP7蛋白疫苗构建 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 试验动物和病毒 |
| 3.1.2 细菌和质粒 |
| 3.1.3 重组pET28a-InpN/vp7质粒构建 |
| 3.1.4 重组蛋白诱导表达 |
| 3.1.5 包涵体检测 |
| 3.1.6 细胞组分分离 |
| 3.1.7 免疫荧光检测 |
| 3.1.8 重组菌VP7蛋白表达量测定 |
| 3.1.9 草鱼免疫实验 |
| 3.1.10 抗体效价测定 |
| 3.1.11 免疫相关生理指标测定 |
| 3.1.12 免疫相关基因表达测定 |
| 3.1.13 GCRV攻毒试验 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 pET28a-InpN/vp7重组质粒构建结果 |
| 3.2.2 重组蛋白表达检测结果 |
| 3.2.3 包涵体检测结果 |
| 3.2.4 细胞组分超速离心分离检测结果 |
| 3.2.5 免疫荧光检测结果 |
| 3.2.6 重组菌VP7蛋白表达量测定结果 |
| 3.2.7 抗体效价测定结果 |
| 3.2.8 免疫相关生理指标测定结果 |
| 3.2.9 免疫相关基因检测结果 |
| 3.2.10 免疫保护效果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 大肠杆菌表面共展示vp7-OmpA和vp7-Mah蛋白疫苗构建 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 试验动物和病毒 |
| 4.1.2 细菌和质粒 |
| 4.1.3 重组pET28a-InpN/vp7-OmpA质粒构建 |
| 4.1.4 重组pET28a-InpN/vp7-Mah质粒构建 |
| 4.1.5 重组蛋白诱导表达 |
| 4.1.6 包涵体检测 |
| 4.1.7 细胞组分分离 |
| 4.1.8 免疫荧光检测 |
| 4.1.9 重组菌中VP7蛋白表达量测定 |
| 4.1.10 草鱼免疫实验 |
| 4.1.11 抗体效价测定 |
| 4.1.12 免疫相关生理指标测定 |
| 4.1.13 免疫相关基因表达测定 |
| 4.1.14 GCRV攻毒试验 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 重组质粒构建结果 |
| 4.2.2 重组蛋白表达检测结果 |
| 4.2.3 包涵体检测结果 |
| 4.2.4 细胞组分超速离心分离检测结果 |
| 4.2.5 免疫荧光检测结果 |
| 4.2.6 重组菌VP7蛋白表达量测定结果 |
| 4.2.7 草鱼血清抗体效价测定结果 |
| 4.2.8 免疫相关生理指标测定结果 |
| 4.2.9 草鱼免疫相关基因检测结果 |
| 4.2.10 免疫保护效果评价 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 大肠杆菌表面共展示vp7-Mah侵染机制初步研究 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 细胞和细菌 |
| 5.1.2 BL21/InpN/vp7-Mah粘附和侵染试验 |
| 5.1.3 不同胞吞抑制剂对BL21/InpN/vp7-Mah侵染EPC细胞的影响 |
| 5.1.4 BL21/InpN/vp7-Mah侵染对EPC细胞F-肌动蛋白（F-actin）的影响 |
| 5.1.5 细胞松弛素D对BL21/InpN/vp7-Mah侵染EPC细胞的影响 |
| 5.1.6 BL21/InpN/vp7-Mah侵染对EPC细胞p38激酶和HSP27磷酸化的影响 |
| 5.1.7 p38 激酶抑制剂对 BL21/Inp N/vp7-Mah 侵染 EPC 细胞的影响 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 BL21/InpN/vp7-Mah粘附和侵染EPC细胞能力分析 |
| 5.2.2 不同胞吞抑制剂对BL21/InpN/vp7-Mah侵染EPC的影响 |
| 5.2.3 BL21/InpN/vp7-Mah侵染对EPC细胞F-actin的影响 |
| 5.2.4 细胞松弛素D对BL21/InpN/vp7-Mah侵染EPC的影响 |
| 5.2.5 BL21/InpN/vp7-Mah侵染对EPC细胞p38激酶和HSP27磷酸化的影响 |
| 5.2.6 p38 激酶抑制剂对 BL21/InpN/vp7-Mah 侵染 EPC 的影响 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（2）草鱼人工免疫防疫技术（论文提纲范文）
| 1. 注射免疫法 |
| (1) 注射免疫前准备工作 |
| (2) 注射免疫操作 |
| (3) 注射免疫后管理 |
| 2. 浸泡免疫法 |
| (1) 苗种选择和准备 |
| (2) 浸泡免疫操作 |
| 3. 疫苗免疫失败的可能原因 |
| 4. 免疫后的养殖技术管理 |
（6）草鱼注射疫苗防疫效果好（论文提纲范文）
| 一、疫苗的种类 |
| 二、疫苗的选择 |
| 三、疫苗的保存 |
| 四、注射免疫方法 |
| 1. 免疫时间。 |
| 2. 待免鱼准备。 |
| 3. 注射工具准备。 |
| 4. 疫苗配制。 |
| 5. 注射剂量。 |
| 6. 注射操作。 |
| 7. 免疫注射注意事项: |
| 五、浸泡免疫法 |
| 六、后期管理 |
| 七、小结与分析: |
（8）疫苗及其在水生动物疾病预防中的应用(七)（论文提纲范文）
| 九、水产用疫苗的使用方法 |
| (一) 注射法 |
| (二) 浸泡法 (喷雾法) |
| (三) 口服法 |
| 十、草鱼免疫防控技术概述 |
| (一) 草鱼苗种的免疫要求 |
| (二) 疫苗选择、使用与管理 |
| (三) 免疫方法 |
| 1. 口服免疫 |
| 2. 浸泡免疫法 |
| 3. 注射免疫法 |
| (四) 免疫前的准备工作 |
| (五) 免疫接种 |
| (六) 免疫后管理 |
（9）草鱼人工免疫防疫技术（论文提纲范文）
| 一、注射免疫方法 |
| 1. 免疫时间。 |
| 2. 待免鱼准备。 |
| 3. 注射工具准备。 |
| 4. 疫苗配制。 |
| 5. 注射剂量。 |
| 6. 注射操作。 |
| 二、浸泡免疫法 |
| 三、后期管理 |
（10）鱼类疫苗自动注射机注射机理与关键机构的研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 研究背景与意义 |
| 1.2 国内外研究现状 |
| 1.2.1 国内外鱼苗接种疫苗研究动态 |
| 1.2.2 国内研究现状 |
| 1.2.3 国外研究现状 |
| 1.2.4 国内外设备存在分析 |
| 1.3 主要研究内容 |
| 第二章 草鱼免疫方法和注射方式的选择 |
| 2.1 草鱼病害 |
| 2.2 草鱼免疫方法的选取 |
| 2.3 草鱼注射方式的选择 |
| 2.4 草鱼胸腔注射技术简介 |
| 第三章 草鱼鱼苗几何参数和物理特性的测量与分析 |
| 3.1 鱼苗几何参数测量和分析 |
| 3.1.1 鱼苗几何参数 |
| 3.1.2 鱼苗几何参数测量结果和分析 |
| 3.2 鱼苗物理特性的研究 |
| 3.2.1 鱼苗重心测量与结果分析 |
| 3.3 本章小结 |
| 第四章 鱼类疫苗自动注射机的关键机构设计 |
| 4.1 机构设计准则 |
| 4.2 主要技术特点 |
| 4.3 注射流程与整体结构 |
| 4.3.1 注射流程 |
| 4.3.2 整体结构 |
| 4.4 主要部件的机构设计 |
| 4.4.1 自动导向机构 |
| 4.4.2 自动夹持机构 |
| 4.4.3 自动注射机构 |
| 4.4.4 注射方式 |
| 4.5 气动元件的选择 |
| 4.5.1 气动元件的优点 |
| 4.5.2 气缸的选型方法和选型步骤 |
| 4.6 电器元件的选择 |
| 4.6.1 光电式传感器的选择 |
| 第五章 鱼苗疫苗自动注射机控制系统的设计 |
| 5.1 整体控制方案设计 |
| 5.2 控制系统硬件设计与实现 |
| 5.2.1 可编程逻辑控制器的介绍 |
| 5.2.2 PLC选择和输入/输出口分配 |
| 5.2.3 PLC对执行动力元件的控制 |
| 第六章 结论与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 主要创新点 |
| 6.3 展望 |
| 参考文献 |
| 附表 |
| 作者简介 |
| 研究生在读期间所取得科研成果 |
| 获奖情况 |
四、预防草鱼出血病的浸泡免疫法（论文参考文献）
- [1]利用大肠杆菌构建GCRV基因工程疫苗系统研究[D]. 郝凯. 西北农林科技大学, 2017(02)
- [2]草鱼人工免疫防疫技术[J]. 丁华林. 渔业致富指南, 2014(12)
- [3]草鱼“四大病”症状及防治方法（上）[J]. 丁德明. 湖南农业, 2015(05)
- [4]草鱼出血病两种免疫途径的对照试验[J]. 江河,戚少燕,陈宇,李艳和. 水利渔业, 2002(03)
- [5]鱼病防治实用技术(连载)[J]. 汪建国. 科学养鱼, 1998(11)
- [6]草鱼注射疫苗防疫效果好[J]. 汤景山. 渔业致富指南, 2014(18)
- [7]草鱼出血病细胞培养灭活疫苗的研究——生产性免疫试验[J]. 杨先乐,夏春,左文功,吴泉明,郭永金. 水产科技情报, 1992(01)
- [8]疫苗及其在水生动物疾病预防中的应用(七)[J]. 王玉堂. 中国水产, 2019(01)
- [9]草鱼人工免疫防疫技术[J]. 赖东书. 渔业致富指南, 2012(12)
- [10]鱼类疫苗自动注射机注射机理与关键机构的研究[D]. 梁仍昊. 浙江大学, 2016(05)