一、猪瘟兔化弱毒犊牛睾丸细胞冻干苗生产简报（论文文献综述）
王琴[1]（2021）在《中国C-株疫苗研究历史》文中认为1全球猪瘟流行现状1833年猪瘟在美国俄亥俄州首次暴发,随后从美国传播到英格兰,再到南非,再到日本。在1945年在石家庄解放区分离出石门毒株。目前猪瘟依然存在于我国部分地区,呈点状散发流行特点,且发病年龄小,成年猪带毒现象严重,非典型症状和繁殖障碍型猪瘟增多。所以根除猪瘟依然是一个巨大挑战。
魏珍珍[2]（2020）在《利用铁蛋白基因融合表达猪瘟病毒E2囊膜蛋白》文中进行了进一步梳理“古典猪瘟”（Classical swine fever,CSF）,也被称为猪瘟（Swine fever）,是一种猪之间的高度接触性传染病,对养猪业是一个非常大的威胁。近几年来,该病不仅发病率明显增高,而且流行趋势和流行特点也越发复杂,其持续感染的情况在全世界普遍存在,这使得防控猪瘟的爆发遇到了新的瓶颈期。现有疫苗的预防效果有明显减弱的趋势,如传统的灭活猪瘟疫苗及弱毒（减毒）猪瘟疫苗存在免疫保护期短,毒力返强等缺点,而蛋白源性亚单位疫苗可以很好的解决这些问题。本研究选取具有强免疫原性的猪瘟病毒囊膜蛋白E2作为新型猪瘟疫苗的研究选材。随着交叉学科的发展,生物学与纳米材料技术的交叉渗透正日益增强,其中铁蛋白（Ferritin）自组装纳米颗粒技术引起了人们的关注。铁蛋白可自发组装形成均一、稳定的具有良好生物相容性的蛋白纳米颗粒,也因其独特的24亚基的空间结构,可成为理想的抗原呈递的多聚体纳米颗粒载体。大肠杆菌细胞E.coli（Escherichia coli,E.coli）的p ET表达系统是最常用来表达外源蛋白的,其具有清晰的遗传背景、生产成本低廉、繁殖速度快、表达产物易纯化、可高效表达外源蛋白及应用范围广等特点,但是因为是原核表达系统,所以会缺乏复杂的磷酸化、糖基化以及形成复杂二硫键等的翻译后修饰过程,对某些外源蛋白的正确折叠以及生物活性存在一定影响。本研究对猪瘟囊膜蛋白E2和铁蛋白的基因序列进行优化设计,并通过化学合成得到目的基因序列,利用融合PCR得到E2-Fe,将该基因克隆到p ET28a原核表达载体中,转化到E.coli BL21（DE3）中进行诱导条件的探索及其高效表达,将表达的融合蛋白进行Western-blotting验证、镍柱纯化、质谱及电镜检测。结果显示,融合基因E2-Fe已成功克隆到p ET-28a载体上,0.15%乳糖诱导6 h为融合蛋白表达的最优条件,Western-blotting与质谱图均显示融合蛋白的大小约51 KD与理论值相符,融合蛋白已成功在E.coli中大量表达,电镜观察到的纳米颗粒直径约为20 nm也与理论值相符,即融合铁蛋白的猪瘟病毒囊膜蛋白E2-Fe在大肠杆菌中得到高效表达。将大肠杆菌中表达的融合蛋白E2-Fe经纯化后制样腹腔注射小鼠,两次免疫后,其可诱导机体产生特异性抗体,效价可达1:6400,表明E2-Fe融合蛋白具有良好的免疫原性。杆状病毒-昆虫表达系统是重组蛋白生产的普遍选择。昆虫细胞中的蛋白表达包含翻译后修饰过程,此系统生产的蛋白质复合物以及高蛋白质产量是该真核表达系统的有利特征。后期随着研究的深入与生物技术的不断发展,杆状病毒开始在表面展示系统、基因治疗、疫苗研发等方面应用。在昆虫细胞和哺乳动物细胞中表达外源蛋白时,其糖基化修饰位点是一致的,但两者在修饰时所选用的寡糖种类却不尽相同。相对于哺乳动物细胞,昆虫细胞中相关的糖链加工酶表达量不足或者缺乏,在糖基修饰加工结束后无法合成复合型唾液酸结构,而是终止于寡甘露糖结构。这种寡糖修饰差异导致在昆虫细胞中表达的亚单位疫苗在理论上是不利于生产的,但是不完全加工的N-糖链修饰反而会增强禽流感病毒血凝素（hemagglutinin,HA）病毒样粒子与免疫细胞的亲和力。因此本研究也选择杆状病毒-昆虫表达系统来融合表达目的蛋白以期研制新型猪瘟疫苗。本研究对猪瘟囊膜蛋白E2和铁蛋白的基因序列进行优化设计,并通过化学合成得到目的基因序列,利用融合PCR得到E2-Fe,将融合基因克隆到杆状病毒转移载体p VL1393的多克隆位点中,获得重组载体p VL1393-E2-Fe,将重组转移载体p VL1393-E2-Fe与失活拯救型家蚕杆状病毒（re Bm Bac）共转染家蚕Bm5细胞,获得重组病毒,收集病毒液并感染五龄起家蚕,待家蚕有明显杆状病毒发病迹象后收集蚕血淋巴,随后进行Western-blotting、电镜观察验证。结果显示,重组转移载体p VL1393-E2-Fe测序结果正确,融合基因E2-Fe已成功克隆到p VL1393,且与re Bm Bac共转染家蚕Bm5细胞后获得有感染活性的重组杆状病毒re Bm Bac-E2-Fe;蚕血的Western-blotting图显示融合蛋白的大小约46 KD与理论值相符,融合蛋白已成功在家蚕中表达,而后通过电镜观察到大量直径约为20 nm且分布较为均匀纳米颗粒,也与理论相符,即融合铁蛋白的猪瘟病毒囊膜蛋白E2-Fe在家蚕中得到了高效表达。将含有E2-Fe融合蛋白的蚕血淋巴制样后腹腔注射小鼠,经两次免疫后,可诱导机体产生高滴度的特异性抗体,其效价可高至1:25600,即本研究所得E2-Fe融合蛋白具有较好的免疫原性。以上研究结果均说明融合蛋白在大肠杆菌及家蚕中都可进行高效表达,获得数量可观的纳米颗粒抗原,这为研究新的猪瘟疫苗拓宽了思路。
陈樨[3]（2017）在《激流式生物反应器制备猪瘟高效细胞苗》文中认为近年来,我国猪瘟流行趋势发生明显变化,范围广、规模小、“非典型化”问题严重,出现持续感染和隐性感染,特别是种猪持续带毒感染是目前最为头疼的问题。目前行之有效的方法就是疫苗免疫预防,因此,疫苗质量的好坏直接决定免疫接种的成功或失败,抗原制备是决定疫苗质量的关键因素。本试验旨在应用激流式生物反应器制备猪瘟ST细胞苗,使得抗原效价得到进一步提升。本课题研究内容主要有以下三个方面:1.通过转瓶培养ST细胞与CSFV增殖水平试验研究,为下阶段生物反应器试验建立产毒模型。CSFV在转瓶中增殖时,第2～3收次病毒滴度达到高峰40万 RID/mL。2.应用激流式生物反应器培养ST细胞与猪瘟产毒试验研究。在应用激流式生物反应器培养CSFV试验中,通过提升单位体积的细胞数量可以有效地提升抗原的效价。二种工艺从单位体积细胞数上比较,转瓶培养细胞数可达到2.5×105个/mL,反应器是1.5×106个/mL,反应器培养的细胞数是转瓶的6倍;从病毒滴度方面相比,转瓶制备的猪瘟抗原效价最高可达到40万RID/mL,反应器可达到60万RID/mL,反应器比转瓶培养的抗原效价提升50%。后期通过工艺改进,抗原效价还有提升的空间。
常敬伟[4]（2016）在《IBR-BVD二联灭活疫苗的制备及免疫效果研究》文中指出
孙石静,董彦鹏,缪芬芳,刘怡,胡静雅,何叶峰[5]（2014）在《我国当前猪瘟疫苗特点及科学免疫》文中进行了进一步梳理猪瘟是严重危害我国和世界养猪业发展的重要传染病。我国研制的猪瘟兔化弱毒疫苗（即C株）在世界范围内的猪瘟免疫防控和最终根除过程中起到了极其重要的作用。尽管如此,目前我国养猪业仍在承受该病的困扰,因种种原因造成的疫苗免疫力下降或免疫失败现象时有发生,每年都让养殖业蒙受巨大的经济损失。文章就我国猪瘟流行特点、现有猪瘟疫苗特点及合理使用猪瘟ST传代细胞苗、科学免疫猪瘟等问题作一概述和探讨分析。
刘艳[6]（2011）在《猪瘟细胞苗生产工艺的优化及ELISA法在抗原定量测定中的应用》文中提出以猪瘟病毒中国兔化弱毒疫苗株（CSFV C株）为实验材料,首先采用常规细胞实时计数的方法,得到正常犊牛睾丸细胞增殖曲线和带毒睾丸细胞的增殖曲线,结果发现猪瘟病毒不仅不影响犊牛睾丸细胞的生长,反而促进细胞的分裂增殖,培养48小时时,带毒的牛睾丸细胞计数是未带毒细胞的117.5%。初步确立了该毒株在原代犊牛睾丸细胞中增殖的规律与基本特性。再进一步运用直接免疫荧光法确定出最佳细胞初始密度、最佳接毒量及接毒方式的产毒模型,建立了常规的病毒增殖曲线。以建立的细胞及病毒生长曲线及产毒模型为依据,根据GMP生产车间的实际情况,从生产种毒繁殖、原代细胞制备、CSFV的感染、CSFV感染后维持液的调节以及带CSFV的犊牛睾丸细胞的多次传代这几个对CSFV增殖有影响的因素方面入手进一步展开工作。严格控制生产种毒,优质达标的生产种毒,是疫苗病毒含量达标的必要保障。原代细胞制备过程中,依据《中华人民共和国兽用生物制品规程》（以下简称:《规程》）无菌摘取犊牛睾丸,在《规程》的指导基础上,调整消化时间、温度可以同时达到提高细胞数量及质量的双重效果。将《规程》消化时间调整为0.25%的胰酶37℃消化30 min后降低温度继续消化。结果,每1g睾丸组织可制备3×105个/ml细胞悬液400-500ml,是传统消化法的两倍,并且细胞活力明显增强,消化后期降低温度可减轻后期胰酶的作用强度,减少对已消化好细胞的伤害。脾组织毒对次代牛睾丸细胞有很强的刺激作用,生产接毒时适度减少组织毒,同时补入一定量病毒含量≥106细胞毒液,可减少组织毒对细胞的刺激作用,降低细胞的脱瓶率,提高病毒液的收次。在病毒液收获期间,增大维持液量,将《规程》中10%的维持液调节为20%,4天收获一次延长为8天收获一次,经兔体检验,病毒含量仍能达到5×104ml。病毒含量测定方面,应用猪瘟抗原/血清ELISA试剂盒（IDEXX HerdCheck Co.）对经兔体检验已知滴度的20份HCLV半成品细胞病毒液、10份兔体检验检验阴性HCLV半成品细胞病毒液、10份冻干成品疫及10份冻干脾淋苗进行抗原含量测定,并与兔体定型热反应法的结果进行对照,结果半成品检测结果与兔体检验相关率可达95%,成品75%。ELISA法可快速、稳定、简单地运用于HCLV细胞苗的半成品与成品的病毒含量测定,并可反向检测兔体检验的不敏感性,降低检验误判,同时提高产品的质量及产量。
唐红慧[7]（2010）在《猪瘟兔化弱毒苗抗原量测定方法的探索及不同免疫程序的差异性比较研究》文中指出猪瘟（Classical swine fever, CSF或hog cholera, HC）,是由黄病毒科的猪瘟病毒引起的一种高度接触性传染病,该病可分为最急性型、急性型、慢性型、非典型型或迟发型。该病被国际兽疫局（OIE）列为必须上报的A类病,目前仍然遍布全世界。在我国,尽管猪瘟兔化弱毒苗的大范围使用有效地控制了猪瘟的急性发生和大流行。近些年来,我国猪瘟的流行发生了较大变化,出现了慢性和迟发型猪瘟,为猪瘟的防控带来了新的难题。本研究主要对当前使用的猪瘟兔化弱毒苗中猪瘟病毒的含量测定和猪瘟免疫程序等进行了深入的研究,对当前猪瘟的防制提出新方法。本研究主要包括以下三部分:1简单、快速地测定猪瘟病毒的含量是猪瘟兔化弱毒苗（HCLV）生产工艺中难以解决的技术之一。本试验通过应用猪瘟抗原/血清ELISA试剂盒（IDEXX HerdCheck Co.）,对已知滴度的24份HCLV半成品细胞苗和21份成品疫苗进行抗原含量测定,结果发现,对于24份HCLV半成品细胞苗,ELISA检测方法9与兔体定型热反应结果符合率达95.83%。其中,ELISA方法检测敏感性可达20头份/瓶（或109个病毒拷贝数/瓶）,但该方法无法区分猪瘟病毒抗原与牛流行性腹泻病毒抗原。试验结果证明,IDEXX猪瘟抗原/血清ELISA试剂盒能够稳定、快速、简单地用于HCLV细胞苗的半成品与成品的病毒含量测定,为疫苗生产的质量控制提供了一种可靠和稳定的方法。2目前在对猪瘟的防治实践中,对猪瘟超前免疫后抗体水平的变化及保护效果存在争议。本试验通过对规模化猪场的应用观察,选择3窝仔猪采用超前免疫,仔猪出生后即免疫猪瘟脾淋苗0.5头份/只,隔11.5小时采食初乳;2窝仔猪采用猪场常规免疫程序,21日龄免疫猪瘟脾淋苗1头份/只。应用猪瘟病毒抗体ELISA试剂盒（IDEXX HerdCheck Co.）对所有仔猪0、20、40、60日龄血清抗体监测,结果表明:在母源抗体水平较低的情况下采用超前免疫程序能够取得良好的免疫效果。3为了研究猪瘟兔化弱毒苗在母猪妊娠期免疫对母猪及仔猪有无副作用、妊娠期接种猪瘟疫苗是否能够提高仔猪的母源抗体水平、根据仔猪的母源抗体水平确定仔猪的最佳免疫时间,从而确定仔猪的免疫程序。试验一:随机选择胎次相近、饲养、年龄等大体相同的妊娠母猪,在妊娠中期（分娩前5059天、4049天、3039天）免疫猪瘟脾淋苗2头份,各组随机筛选部分所产仔猪（5头/窝）,应用猪瘟病毒抗体ELISA试剂盒（IDEXX HerdCheck Co.）对其进行抗体监测,仔猪于60日龄免疫猪瘟脾淋苗1头份,观察免疫效果。对照组,妊娠母猪不免疫,仔猪按照常规免疫程序（25日龄首免、60日龄二免）。试验二:在试验一的基础上,选择分娩前4049天的妊娠母猪3头免疫猪瘟脾淋苗2头份,随机筛选部分所产仔猪（5头/窝）,应用猪瘟病毒抗体ELISA试剂盒（IDEXX HerdCheck Co.）对其进行抗体监测,采用60日龄首免、85日龄二免的免疫程序,观察其免疫效果。对照组,妊娠母猪不免疫,仔猪根据其抗体水平确定免疫程序。结果表明:猪瘟疫苗在母猪妊娠期免疫对母猪及小猪未发现明显副作用,试验组仔猪存活率为91.30%,对照组存活率为90.63%,结果无显着差异（P>0.05）。对其所产仔猪采用采用60日龄首免、85日龄二免的的免疫程序较仅60日龄免疫一次的免疫程序有更好的免疫效果。
冷和平,钟超武,曾俊霞,郭霄峰[8]（2009）在《猪瘟细胞苗与脾淋苗的免疫效果对比试验》文中进行了进一步梳理迄今,由我国学者周泰冲、袁庆志等于1956年成功研制的中国系（C系）猪瘟兔化弱毒疫苗,是国际公认最理想的猪瘟疫苗。这种疫苗除了在我国被普遍应用外,还广泛推广到欧亚很多国家,不但对控制我国猪瘟流行发挥着关键作用,而且对全球猪瘟
杜军,舒常永,张剑扬[9]（2009）在《猪瘟疫苗研究进展及我国传统疫苗的研究现状》文中研究指明
王波[10]（2009）在《仔猪猪瘟免疫程序的研究》文中研究指明猪瘟（Hog Cholera,HC或Classical Swine Fever,CSF）是由猪瘟病毒（HCV或CSFV）引起的一种高度接触性热性传染病。以出血和发热为主要特征,并引起妊娠母猪流产、胎儿畸变、慢性营养性消耗、淋巴细胞和血小板减少等免疫系统受损、继发或并发细菌或其他病毒感染等临床表现,呈急性或慢性经过,是一种对猪危害性极大的传染病,被国际兽疫局（OIE）列为必须上报的疾病。一直以来我国采用猪瘟疫苗免疫对猪瘟进行预防和控制,在降低猪瘟的感染率和发病率方面取得了很好的效果,但是近年来在实际生产中猪瘟仍时有发生,特别是仔猪的非典型猪瘟更为常见。仔猪发生猪瘟除了首免时间不当,母源抗体对免疫接种猪瘟疫苗的干扰作用造成的免疫失败之外,实际的免疫效果也是很重要的一个因素。同时,对猪瘟疫苗质量的评定,也是猪瘟免疫的重要前提。本研究共分为三个部分:1、采用阻断ELISA试验方法对不同日龄仔猪的猪瘟母源抗体进行系统检测,其结果表明:哺乳前仔猪抗体水平为0,第1d抗体水平达到最高,之后缓慢下降。30日龄平均抗体水平仍然在保护水平之上,因而过去常用的20日龄首免时间应该推迟;根据20日龄仔猪断乳时的抗体效价和30日龄的抗体效价推算,仔猪猪瘟母源抗体半衰期为6.8天。2、采用阻断ELISA试验方法检测三种不同猪瘟免疫程序对仔猪的免疫效果,免役程序分别为（0、35,60）、（0、60）和（35、60）,其结果表明:对仔猪进行超前免疫（0、60）的免疫效果比其他免疫程序的免疫效果好。不同疫苗免疫的仔猪猪瘟抗体检测结果表明,仔猪平均抗体阻断率差异极显着（P<0.01）,因而制定适宜的免疫程序,应该根据猪瘟疫苗质量而定。3、利用荧光定量RT-PCR和阻断ELISA试验方法分别对猪瘟疫苗的病毒含量和猪瘟疫苗中外源病毒（BVDV）的污染进行了检测。荧光定量RT-PCR对猪瘟疫苗病毒含量检测的结果表明:15种猪瘟疫苗中的病毒含量存在很大差异,从0.87×106～38.45×106病毒颗粒数/头份不等。此方法操作简单,速度快,定量准确,重复性好,可以在短时间内同时对大量样品进行定量检测,因而作为猪瘟疫苗效价的评定是可行的。但是荧光定量RT-PCR对操作人员的熟练程度要求严格;猪瘟疫苗中BVDV抗原检测的结果表明:3种脾淋苗中都没有BVDV抗原,而12种细胞苗中,有6种检测BVDV抗原阳性,污染率达50%。因此,猪瘟疫苗中外源病毒（BVDV）污染的检测,也是疫苗合格与否的重要指标。总之,对猪瘟疫苗质量的评定是猪瘟免疫的重要前提。
二、猪瘟兔化弱毒犊牛睾丸细胞冻干苗生产简报（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、猪瘟兔化弱毒犊牛睾丸细胞冻干苗生产简报（论文提纲范文）
（1）中国C-株疫苗研究历史（论文提纲范文）
| 1 全球猪瘟流行现状 |
| 2 猪瘟疫苗的研究历史 |
| 2.1 病毒-血清免疫 |
| 2.2 猪瘟灭活疫苗 |
| 2.3 猪瘟兔化弱毒疫苗（C-株的问世） |
| 2.4 猪瘟兔化弱毒疫苗的应用及升华 |
| 2.5 猪瘟兔化弱毒C-株疫苗的特点 |
| 2.6 猪瘟兔化弱毒疫苗的应用 |
| 2.7 猪瘟病毒的培养工艺研究 |
| 2.8 产品工艺研究 |
| 2.9 猪瘟其他疫苗的研究 |
| 3 C-株疫苗的再评价 |
| 4 消灭疫病必须采取综合防控措施 |
| 4.1 疫苗在猪瘟消灭过程中只是阶段性使用 |
| 4.2 新型诊断技术在动物疫病的控制过程中是关键 |
| 4.3 猪瘟防治思路 |
（2）利用铁蛋白基因融合表达猪瘟病毒E2囊膜蛋白（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 猪瘟疫苗的研究现况 |
| 1.1.1 猪瘟病毒 |
| 1.1.2 猪瘟病毒的致病机理 |
| 1.1.3 猪瘟疫苗的现况 |
| 1.2 铁蛋白 |
| 1.2.1 铁蛋白的结构及其修饰 |
| 1.2.2 重组铁蛋白的人工制备 |
| 1.2.3 铁蛋白纳米颗粒的应用 |
| 1.3 大肠杆菌表达系统 |
| 1.3.1 大肠杆菌的遗传背景 |
| 1.3.2 优化大肠杆菌表达系统的方法 |
| 1.4 杆状病毒表达系统 |
| 1.4.1 杆状病毒 |
| 1.4.2 杆状病毒表达系统 |
| 1.4.3 杆状病毒表达系统研究现状 |
| 1.4.4 杆状病毒表达系统的应用 |
| 1.5 研究内容和意义 |
| 1.5.1 研究的主要内容 |
| 1.5.2 研究目的及意义 |
| 第2章 E2-Fe融合蛋白在大肠杆菌中的表达 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验材料和试剂 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.1.3 常用试剂的配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 猪瘟囊膜蛋白E2基因及铁基因的获取 |
| 2.2.2 重组表达质粒p ET28a-E2-Fe及基因工程菌的构建 |
| 2.2.3 核酸快速抽提法粗筛阳性克隆 |
| 2.2.4 蛋白E2及融合蛋白E2-Fe在大肠杆菌中的表达及纯化 |
| 2.2.5 制备小鼠多克隆抗体 |
| 2.2.6 ELISA法检测小鼠血清抗体效力 |
| 2.3 实验结果与分析 |
| 2.3.1 构建原核表达质粒p ET28a-E2-Fe及基因工程菌的构建 |
| 2.3.2 E2-Fe融合蛋白在E.coli BL21 中的表达鉴定及其表达量的条件优化 |
| 2.3.3 E2-Fe融合蛋白的纯化及电镜观察 |
| 2.3.4 小鼠血清抗体效价检测 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 总结 |
| 第3章 重组融合蛋白E2-Fe在家蚕中表达 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验材料及试剂 |
| 3.1.2 实验仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 猪瘟囊膜蛋白E2基因及铁蛋白基因的获取及合成融合基因E2-Fe |
| 3.2.2 构建重组杆状病毒转移载体p VL1393-E2-Fe |
| 3.2.3 构建重组杆状病毒r Bm Bac-E2-Fe及在家蚕中表达 |
| 3.2.4 制备小鼠多克隆抗体 |
| 3.2.5 ELISA法小鼠血清抗体效力检测 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 鉴定重组转移载体的构建 |
| 3.3.2 构建重组杆状病毒 |
| 3.3.3 在家蚕生物反应器中表达融合蛋白 |
| 3.3.4 重组杆状病毒侵染家蚕后融合蛋白E2-Fe表达的鉴定 |
| 3.3.5 E2-Fe融合蛋白的纯化及电镜观察 |
| 3.3.6 小鼠血清抗体效价检测 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 总结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 1 |
| 附录 2 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 致谢 |
（3）激流式生物反应器制备猪瘟高效细胞苗（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1 猪瘟概述 |
| 1.1 病原学 |
| 1.2 猪瘟兔化弱毒株生物学特性 |
| 1.3 猪瘟诊断或检测技术 |
| 1.4 猪瘟的流行现状 |
| 1.5 疫苗研究进展 |
| 2 大规模产业化动物细胞培养技术 |
| 2.1 大规模动物细胞培养技术的概述 |
| 2.2 细胞生物反应器的种类与发展 |
| 2.3 安普激流式生物反应器的应用 |
| 2.4 生物反应器产业化生产动物疫苗现状与前景 |
| 3 本研究目的与意义 |
| 第二章 转瓶培养ST细胞与猪瘟增殖水平试验研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 不同阶段ST细胞的生长情况 |
| 2.2 不同接毒培养工艺的产毒情况 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 应用激流式生物反应器培养ST细胞与猪瘟产毒试验研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 应用激流式生物反应器培养ST细胞情况 |
| 2.2 接毒情况 |
| 2.3 抗原收获、效价检测与卸罐 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的学术论文与科研成果 |
| 致谢 |
（5）我国当前猪瘟疫苗特点及科学免疫（论文提纲范文）
| 1 当前猪瘟在我国的流行特点 |
| 1.1 绵延性 |
| 1.2 广泛性 |
| 1.3 非典型性 |
| 1.4 持续性 |
| 2 猪瘟免疫失败的原因 |
| 2.1 免疫抑制病的混合感染 |
| 2.2 疫苗质量不佳或免疫过量 |
| 2.3 免疫程序不合理 |
| 2.4 母源抗体的干扰 |
| 2.5 饲料霉变 |
| 3 现有猪瘟疫苗特点 |
| 4 猪瘟的科学免疫 |
| 4.1 选择品质优良的疫苗 |
| 4.2 不要同时使用两种或两种以上病毒活疫苗 |
| 4.3 使用前检查 |
| 4.4 疫苗即配即用 |
| 4.5 制定科学的免疫程序 |
| 4.6 要注意其他因素 |
| 5 不同猪瘟流行情况的猪场应采取不同的预防措施 |
（6）猪瘟细胞苗生产工艺的优化及ELISA法在抗原定量测定中的应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 猪瘟及病毒概述 |
| 1.2 CSFV 与宿主细胞的相互作用及其致病机制 |
| 1.3 猪瘟病毒、体外细胞的相互关系 |
| 1.3.1 猪瘟病毒在体外细胞培养物中的增殖方式 |
| 1.3.2 CSFV 弱毒株在犊牛睾丸细胞的增殖 |
| 1.4 猪瘟诊断方法的研究现状 |
| 1.4.1 病原学检测 |
| 1.4.2 抗体诊断方法 |
| 1.4.3 国内外抗原抗体兼用的检测方法 |
| 1.5 猪瘟疫苗的研究进展 |
| 1.5.1 传统疫苗 |
| 1.5.2 新型疫苗 |
| 1.6 我国传统疫苗以及现行工艺存在的问题 |
| 1.6.1 猪瘟兔化弱毒疫苗 |
| 1.6.2 我国的猪瘟免化弱毒疫苗的生产工艺在不断改进和提高 |
| 1.6.3 我现阶段猪瘟疫苗的质量及使免疫过程中存在的主要问题 |
| 1.7 本研究的目的和意义 |
| 第2章 CSFV 在犊牛睾丸细胞中增殖规律的研究 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 菌种 |
| 2.1.2 细胞、血清 |
| 2.1.3 7.5 % NaHC0_3 溶液 |
| 2.1.4 0.01mol/LpH7.4 的PBS 缓冲液的配制 |
| 2.1.5 3%谷氨酰胺 |
| 2.1.6 1%酚红溶液 |
| 2.1.7 常用细胞营养液 |
| 2.1.8 猪瘟细胞苗生产中0.5%乳汉液的配制 |
| 2.1.9 仪器：磁力搅拌器：型号HS-2 富华仪器有限公司 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 特定环境下犊牛睾丸细胞的增殖培养 |
| 2.2.2 带毒的犊牛睾丸细胞的增殖培养 |
| 2.2.3 不同细胞密度下，最佳接毒量的筛选 |
| 2.2.4 最佳接毒方式的筛选 |
| 2.2.5 正常CSFV 病毒的增殖培养 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 犊牛睾丸细胞增殖曲线的建立 |
| 2.3.2 带毒睾丸细胞增殖曲线的建立 |
| 2.3.3 不同细胞密度下，最优化接毒量的筛选结果 |
| 2.3.4 最佳接毒方式的确定 |
| 2.3.5 正常病毒增殖曲线的建立 |
| 2.4 分析与讨论 |
| 第3章 猪瘟兔化弱毒细胞苗生产工艺的优化 |
| 3.1 材料(同第二章) |
| 3.1.1 菌种 |
| 3.1.2 细胞 |
| 3.1.3 试剂及仪器（同第二章） |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 种毒的繁殖 |
| 3.2.2 制苗用原代细胞的制备 |
| 3.2.3 次代细胞制备 |
| 3.2.4 犊牛睾丸细胞的CSFV 感染 |
| 3.2.5 病毒液的收获 |
| 3.2.6 调节病毒增殖的维持液 |
| 3.2.7 犊牛睾丸细胞的带毒传代 |
| 3.2.8 半成品检验 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 种毒的繁殖及检验 |
| 3.3.1.1 生产种毒的繁殖 |
| 3.3.1.2 生产种毒热型判断记录 |
| 3.3.1.3 家兔的感染性、外源病毒检验、免疫原性、安全性、特异性检验、无菌 检验、支原体检验 |
| 3.3.2 原代细胞制备的计数 |
| 3.3.3 外源病毒检测 |
| 3.3.4 不同接毒方法对睾丸细胞及病毒的影响 |
| 3.3.5 改变细胞培养维持液液量和收获时间对病毒含量的影响 |
| 3.3.6 原代犊牛睾丸细胞带毒传代后的产毒结果 |
| 3.4 分析与讨论 |
| 3.5 小结与展望 |
| 第4章 ELISA 法在 CSFV 抗原定量测定中的应用 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 抗原检测试剂盒 |
| 4.1.2 待检CSFV 抗原 |
| 4.1.3 特异性检验牛病毒性腹泻病毒(BVDV)标准种毒 |
| 4.1.4 主要试验仪器 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 CSFV 抗原传统检验方法（兔体定型热反应检测） |
| 4.2.2 CSFV 抗原检测试剂盒方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 试剂盒应用于HCLV 半成品细胞苗的检测 |
| 4.3.2 试剂盒在成品 HCLV 疫苗的检测中的应用 |
| 4.3.3 CSFV 抗原检测试剂盒的特异性检验 |
| 4.4 分析与讨论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要科研成果 |
（7）猪瘟兔化弱毒苗抗原量测定方法的探索及不同免疫程序的差异性比较研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 1 我国传统猪瘟疫苗研制概况 |
| 2 猪瘟疫苗的现状 |
| 3 猪瘟的免疫程序 |
| 4 猪瘟的控制与净化 |
| 应用猪瘟抗原/血清ELISA 测定猪瘟兔化弱毒苗中的病毒含量 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果与分析 |
| 3 讨论 |
| 猪瘟兔化弱毒苗仔猪超前免疫程序研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果与分析 |
| 3 讨论 |
| 猪瘟兔化弱毒苗对妊娠母猪及其仔猪不同免疫程序差异研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果与分析 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（8）猪瘟细胞苗与脾淋苗的免疫效果对比试验（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 分组和免疫 |
| 1.2.2 采血和送检 |
| 2 试验结果 |
| 3 分析与讨论 |
（9）猪瘟疫苗研究进展及我国传统疫苗的研究现状（论文提纲范文）
| 1 传统疫苗 |
| 2 新型疫苗 |
| 2.1 重组疫苗 |
| 2.2 亚单位疫苗 |
| 2.3 标记疫苗 |
| 2.4 核酸疫苗 |
| 3 我国猪瘟疫苗生产工艺中存在的问题 |
| 3.1 传统猪瘟兔化弱毒疫苗的生产工艺发展历程 |
| 3.2 传统疫苗的特点 |
| 3.3 传统猪瘟疫苗生产中存在的问题 |
| 3.3.1 温度的影响 |
| 3.3.2 不产生细胞病变 |
| 3.3.3 毒价低 |
| 3.3.4 病毒粒子的失活 |
| 3.4 传统猪瘟疫苗应用过程中存在的问题 |
| 4 猪瘟疫苗研究展望 |
| 4.1 发展亚单位标记疫苗, 建立鉴别试验 |
| 4.2 病毒保护剂研究 |
| 4.3 耐热冻干保护剂研究 |
| 4.4 免疫佐剂及稀释液研究 |
| 4.5 新工艺 |
| 4.6 产业化 |
（10）仔猪猪瘟免疫程序的研究（论文提纲范文）
| 符号及缩略词 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 1 猪瘟的历史与分布 |
| 2 当前猪瘟流行的特点 |
| 3 猪瘟病毒持续存在的原因 |
| 4 CSF 疫苗的研究进展 |
| 5 猪瘟疫苗质量的评定 |
| 6 猪瘟防治措施 |
| 试验一 仔猪猪瘟母源抗体消长规律的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 母猪猪瘟抗体检测结果 |
| 2.2 仔猪猪瘟抗体检测结果 |
| 2.3 仔猪猪瘟抗体平均效价变化规律 |
| 3 讨论 |
| 试验二 仔猪猪瘟免疫程序的探讨 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 各组实验猪母猪猪瘟抗体阻断率检测结果 |
| 2.2 各组实验猪仔猪猪瘟抗体阻断率检测结果 |
| 2.3 A、B、C 三组仔猪猪瘟抗体平均阻断率比较结果 |
| 2.4 B 组和 D 组仔猪猪瘟抗体平均阻断率比较结果 |
| 3 分析与讨论 |
| 试验三 猪瘟疫苗质量的评定 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 猪瘟疫苗荧光定量RT-PCR检测结果 |
| 2.2 猪瘟疫苗中外源病毒(BVDV)污染的检测结果 |
| 3 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士期间发表论文情况 |
| 个人简介 |
| 致谢 |
四、猪瘟兔化弱毒犊牛睾丸细胞冻干苗生产简报（论文参考文献）
- [1]中国C-株疫苗研究历史[J]. 王琴. 兽医导刊, 2021(07)
- [2]利用铁蛋白基因融合表达猪瘟病毒E2囊膜蛋白[D]. 魏珍珍. 江苏科技大学, 2020(03)
- [3]激流式生物反应器制备猪瘟高效细胞苗[D]. 陈樨. 福建农林大学, 2017(01)
- [4]IBR-BVD二联灭活疫苗的制备及免疫效果研究[D]. 常敬伟. 黑龙江八一农垦大学, 2016
- [5]我国当前猪瘟疫苗特点及科学免疫[J]. 孙石静,董彦鹏,缪芬芳,刘怡,胡静雅,何叶峰. 畜禽业, 2014(03)
- [6]猪瘟细胞苗生产工艺的优化及ELISA法在抗原定量测定中的应用[D]. 刘艳. 山东轻工业学院, 2011(10)
- [7]猪瘟兔化弱毒苗抗原量测定方法的探索及不同免疫程序的差异性比较研究[D]. 唐红慧. 扬州大学, 2010(02)
- [8]猪瘟细胞苗与脾淋苗的免疫效果对比试验[J]. 冷和平,钟超武,曾俊霞,郭霄峰. 养猪, 2009(05)
- [9]猪瘟疫苗研究进展及我国传统疫苗的研究现状[J]. 杜军,舒常永,张剑扬. 郑州牧业工程高等专科学校学报, 2009(03)
- [10]仔猪猪瘟免疫程序的研究[D]. 王波. 山东农业大学, 2009(03)