一、银杏叶提取物761对乳鼠心室肌细胞钙通道的影响（论文文献综述）
李琪[1]（2021）在《miRNA-129-1-3p在芦丁减轻吡柔比星所致心脏毒性并增敏抗乳腺癌药效中的介导作用》文中研究指明蒽环类药物吡柔比星（Pirarubicin,THP）是多种实体肿瘤和血液淋巴系统恶性肿瘤的常用化疗药物,疗效确切、抗肿瘤强,其中乳腺癌是以THP为一线药物进行治疗的癌症之一。在过去20年的早期诊断中,手术、放化疗和靶向治疗等显着降低了乳腺癌的死亡率。然而,存活率的提高使人们意识到抗癌治疗过程中改善THP所致心脏毒性的重要性。临床观察和研究显示THP主要毒副作用之一是心脏毒性,且往往呈进展性和不可逆性,严重限制了THP在临床上广泛和长期的使用。因此,发现新的药物靶点干预THP所致心脏毒性显得尤为重要。芦丁（Rutin,RUT）又名芸香苷,属黄酮类化合物,是《中国药典》收录的传统中药槐花的主要有效成分之一,广泛存在于槐花、银杏叶、大枣等中药材中。RUT具有抗自由基、抗脂质过氧化、抗炎、抗癌和保护心血管等药理作用。本课题组多年来一直进行RUT对心血管系统保护作用的研究,在大鼠实验中证实RUT对THP所致心脏毒性具有保护作用,并利用微小RNA（microRNA,miRNA）芯片技术构建RUT干预THP诱导大鼠心脏毒性miRNA表达谱。但RUT的具体作用机制尚未进行深入的探索,且对于RUT干预疾病发生发展过程中miRNA的作用知之甚少。本研究基于RUT干预THP诱导心肌损伤miRNA表达谱的分析结果,并通过miRbase数据库,发现miR-129-1-3p是与RUT抑制心脏毒性密切相关的一种潜在的生物标志物,且在不同物种中高度保守。随后使用Target Scan数据库搜索miR-129-1-3p的靶基因,将靶基因通过KEGG富集分析后发现,富集分析结果中的Ca2+通路与蒽环类药物所致心脏毒性的机制相关,我们对位于Ca2+通路中靶基因进行挑选,发现GRIN2D与miR-129-1-3p的靶向性最好。由此,我们推测RUT通过miR-129-1-3p直接靶向GRIN2D调节Ca2+通路,从而发挥对THP诱导的心肌细胞损伤的保护作用。随后,通过双荧光素酶报告基因实验证实,miR-129-1-3p可直接调控GRIN2D。此外,通过文献检索发现miR-129-1-3p在多种肿瘤中起到抑制作用。因此,本研究从细胞及整体动物实验对miR-129-1-3p/GRIN2D调控Ca2+通路介导的RUT减轻THP所致心脏毒性并增敏抗乳腺癌的作用进行了探索,以期系统深入地揭示miR-129-1-3p/GRIN2D在RUT干预心脏毒性和乳腺癌发生发展中所扮演的角色,从miRNA的角度阐明RUT治疗心脏毒性和乳腺癌的可能机制。（1）在心肌细胞（体外）实验中,我们采用RUT 100μM预处理,THP 5μM刺激小鼠心肌HL-1细胞24h,模拟RUT改善THP所致HL-1细胞损伤内环境,从细胞水平探讨RUT对THP诱导HL-1细胞损伤保护的具体机制。通过qPCR在HL-1细胞中进行验证,发现miR-129-1-3p在THP处理后的HL-1细胞中下调,而在RUT干预后使其上调,GRIN2D mRNA与其趋势相反,说明miR-129-1-3p/GRIN2D在RUT对THP诱导HL-1细胞损伤的保护作用中发挥重要作用。为了研究miR-129-1-3p在RUT对THP诱导的心肌细胞损伤的保护作用,将miR-129-1-3p模拟物（mimics）转染至HL-1细胞中,通过DCFH-DA、MAD、SOD、Fluo-3 AM、TUNEL和Western blot实验证实,RUT和miR-129-1-3p可以抑制THP诱导的心肌细胞氧化损伤、钙超载,使Ca2+相关通路蛋白GRIN2D、钙调蛋白-1（Calm1）、Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶IIδ（Ca MKⅡδ）和磷酸化的雷诺定受体2（Ry R2-p S2814）表达减少,肌质内皮网钙泵（SERCA2a）和钠钙交换剂1（NCX1）表达增加,并降低细胞凋亡率及抑制凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2和cleaved caspase-3的表达。（2）在乳腺癌细胞（体外）实验中,我们采用体外培养小鼠乳腺上皮HC11细胞和小鼠乳腺癌4T1细胞,通过CCK-8检测发现,100μM的RUT抑制4T1细胞增殖,且与THP发挥协同作用。qPCR检测miR-129-1-3p在两种细胞中的表达,发现4T1细胞miR-129-1-3p的表达水平低于HC11细胞,而加入RUT干预后4T1细胞miR-129-1-3p的表达水平上升,GRIN2D mRNA与其趋势相反,说明miR-129-1-3p/GRIN2D在RUT抑制小鼠乳腺癌细胞增殖的作用中也同样发挥重要作用。为了研究miR-129-1-3p对4T1细胞的抑制作用,将miR-129-1-3p mimics和miR-129-1-3p抑制物（inhibitor）分别转染至4T1细胞中,应用平板克隆、细胞划痕、Transwell、Fluo-3 AM和Western blot实验证实,miR-129-1-3p mimics可以抑制4T1细胞增殖、迁移和侵袭及其相关蛋白CD147、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、血管内皮生长因子（VEGF）蛋白的表达、抑制Ca2+水平及GRIN2D、Calm1、Ca MKⅡδ蛋白的表达,促进Bax/Bcl-2和cleaved caspase-3蛋白的表达,而miR-129-1-3p inhibitor发挥相反作用。（3）在动物（体内）实验中,采用BALB/c小鼠作为研究对象,成功构建乳腺荷瘤与THP心脏毒性小鼠复合模型。给予RUT灌胃给药或尾静脉注射miR-129-1-3p模拟物（agomirs）4周后,BALB/c小鼠的心脏毒性得到明显减轻,心电图和心肌组织病理学损伤得以改善,心肌酶指标趋于正常,心肌组织miRNA-129-1-3p表达升高,GRIN2D mRNA表达降低,使Ca2+水平降低,GRIN2D、Calm1、Ca MKⅡδ和Ry R2-p S2814蛋白表达减少,SERCA2a和NCX1的蛋白表达增加、心肌细胞凋亡减少,Bax/Bcl-2和cleaved caspase-3蛋白表达降低。并且BALB/c小鼠乳腺肿瘤的生长、肝转移及肺部炎症反应得到进一步控制,肿瘤组织中miRNA-129-1-3p表达进一步上升,GRIN2D mRNA表达进一步下降,进一步抑制肿瘤组织中Ca2+含量及GRIN2D、Calm1、Ca MKⅡδ、CD147、MMP-2、MMP-9、VEGF的表达,并进一步促进肿瘤组织细胞凋亡及其相关蛋白Bax/Bcl-2和cleaved caspase-3的表达。综上所述,本研究通过体内外实验得到以下结论:（1）体内外THP诱导小鼠HL-1细胞/心肌损伤实验证明,RUT可逆转THP诱导的HL-1细胞/心肌氧化应激损伤、小鼠心脏系数增加、血清心肌酶损伤、心电图异常及心肌组织病理学改变,对THP诱导的心脏毒性发挥保护作用。（2）RUT逆转THP诱导的小鼠HL-1细胞/心肌组织中miRNA-129-1-3p下调、GRIN2D mRNA上调、钙超载及细胞凋亡。表明RUT通过逆转THP所致小鼠心脏毒性的机制可能是通过miR-129-1-3p抑制GRIN2D表达及其调控的Ca2+通路,进而抑制心肌细胞凋亡所实现的。（3）体内外THP抑制乳腺癌实验证实,RUT可增敏THP抑制4T1细胞增殖、迁移和侵袭,抑制肿瘤生长、肝转移及肺部炎症反应,对THP抑制乳腺癌发挥增敏作用。（4）RUT增敏THP抑制4T1细胞/肿瘤组织中miRNA-129-1-3p下调、GRIN2D mRNA上调、使钙水平进一步降低并促进细胞凋亡。表明RUT通过增敏THP抑制小鼠乳腺癌的机制可能是通过miR-129-1-3p抑制GRIN2D表达及其调控的Ca2+通路,进而促进肿瘤细胞凋亡所实现的。本研究拓展了RUT的药理作用,并对miR-129-1-3p/GRIN2D的生物学功能提供了重要的补充,表明miR-129-1-3p可能是治疗THP所致心脏毒性及乳腺癌的新靶点,可作为开发治疗蒽环类药物所致心脏毒性和乳腺癌的新型药物的理论基础和实验依据。
张红霞,石磊,郭一沙,吴晓凤[2]（2018）在《中药对细胞钙转运的调节作用》文中研究指明钙离子及其转运是机体内多种生理功能的重要调节因子,中药在调节钙离子稳态过程中发挥着积极作用。本文以现代医学研究成果和中医药理论为基础,从中药成分、单味中药、中药复方和中成药不同层次分析总结中药调控细胞内钙离子的作用特点及机制,为中药现代化提供理论基础。
曹珍珍[3]（2018）在《芦荟苷和鱼腥草素钠对心肌电生理的影响及其抗心律失常作用的研究》文中研究表明随着人口的老龄化,心血管疾病的发病率逐年升高,对人类的健康造成了严重的威胁。心律失常是心血管疾病中重要的一组疾病。它可单独发病,亦可随其他心血管疾病伴发。虽然近年来在心律失常的药物治疗上已取得很大的进展,但是由于大多数抗心律失常药物都有严重的致心律失常作用,心律失常患者的死亡率仍然较高。相关数据显示,在众多心脏疾患中,80%的心源性猝死都来源于心律失常。因此,对新型的、有效的、毒副作用小的抗心律失常药物的研发已成为当前治疗心脏疾患领域中最为重要的内容之一。近年来,中药制剂对心血管疾病的治疗已逐渐应用于临床。中草药历经了数千年的应用实践以及不断改善,具有成本低、安全性高的优点。但是由于中药制剂成分繁杂,各成分间的相互生物活性作用大多不清楚,使得其质量标准很难提高,导致了中药制剂很难与国际标准接轨。而中草药提取物单体不仅保留了中药低成本、毒副作用小的优点,而且其具有明确的化学组成,便于药物的分析与应用。因此,以中草药提取单体为研究对象,探索药效高、成本低、毒副作用小的新型抗心律失常药物具有重大的理论和实际意义。在本课题中,我们从黄芩苷、芦荟苷、三七皂苷R1、银杏内酯B、芹菜素以及鱼腥草素钠等多种具有心脏保护作用的中草药提取物中通过实验筛选出芦荟苷和鱼腥草素钠这两种单体,研究其对兔心室肌细胞各种跨膜离子通道电流和收缩力以及Langendorff-灌流心脏的作用,以探讨这两种中药提取物的抗心律失常作用。本课题主要分为以下三个部分进行探讨:第一部分影响兔心室肌细胞钠、钾和钙电流中草药单体的筛选我们通过研究黄芩苷、芦荟苷、三七皂苷R1、银杏内酯B、芹菜素、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rg2以及鱼腥草素钠等具有心脏保护作用的中草药提取单体对兔心室肌细胞峰钠电流(INa.P)、内向整流钾电流(IK1)和L-型钙电流(ICa.L)的影响来筛选潜在的、具有开发价值的抗心律失常药物。实验结果显示黄芩苷、三七皂苷R1、银杏内酯B、芹菜素、人参皂苷Rg1以及人参皂苷Rg2等对INa.P、IK1和ICa.L均无显着作用,而芦荟苷和鱼腥草素钠对INa.P和ICa.L均有一定影响。因此,我们将通过进一步的细胞水平以及器官水平的实验研究来探索芦荟苷和鱼腥草素钠的潜在的抗心律失常作用。第二部分芦荟苷通过调节电压门控型离子通道抑制室性心律失常目的:探讨芦荟苷对兔心室肌细胞动作电位（AP）以及各种跨膜离子通道电流的作用,并通过探究其对Langendorff-灌流心脏的作用来明确芦荟苷的抗心律失常作用,为开发新型的抗心律失常药物奠定电生理学基础。方法:通过酶解法进行兔心室肌细胞的分离,利用全细胞膜片钳技术记录已分离的单个心室肌细胞的AP及心室肌细胞主要离子通道电流。分别使用海葵毒素II（ATX II）和高钙诱导心室肌细胞产生早期后除极（EADs）和延迟后除极（DADs）等细胞性心律失常,并用乌头碱诱导Langendorff-灌流心脏心律失常的发生。然后观察比较芦荟苷干预前后的AP、EADs、DADs、各种离子通道电流以及Langendorff-灌流心脏心律失常的变化。结果:100μmol/L和200μmol/L芦荟苷可显着地缩短兔心室肌细胞的动作电位时程（APD）,并减小其最大上升速率（Vmax）以及APD的反向频率依赖性。200μmol/L芦荟苷能够有效地消除ATX II诱导产生的兔心室肌细胞EADs和高钙诱导产生的DADs。除此之外,芦荟苷可浓度依赖性的抑制ICa.L和INa.P,其半抑制浓度(IC50)分别为137.06μmol/L和559.80μmol/L。100μmol/L和200μmol/L芦荟苷对ATX II诱导增大晚钠电流(INa.L)的抑制率分别为36.6±3.3%和71.8±6.5%。然而,100μmol/L和800μmol/L芦荟苷对IK1以及快速激活的延迟整流钾电流(IKr)没有明显的作用。进一步的器官水平研究显示200μmol/L芦荟苷可抑制乌头碱诱导Langendorff-灌流心脏心律失常的发生。结论:芦荟苷可有效地消除兔心室肌细胞的EADs和DADs、抑制ICa.L、INa.P以及ATX II诱导增大的INa.L,并且芦荟苷还能抑制乌头碱诱导的Langendorff-灌流心脏心律失常的发生。因此,芦荟苷有潜力成为一种低成本、安全性高的抗心律失常药物。第三部分鱼腥草素钠通过调节心室肌细胞门控性离子通道及收缩力发挥其心脏保护作用目的:研究鱼腥草素钠对兔心室肌细胞主要跨膜离子通道及收缩力的作用,以探讨鱼腥草素钠的潜在抗心律失常作用。方法:在使用酶解法分离心室肌细胞后,利用全细胞膜片钳技术记录心室肌细胞的INa.P、INa.L和ICa.L,并用可视化动缘探测系统检测心室肌细胞的收缩力。观察鱼腥草素钠干预前后心室肌细胞各离子通道电流及收缩力的变化,以探讨鱼腥草素钠的抗心律失常潜力。结果:鱼腥草素钠可浓度依赖性地抑制INa.P,其IC50为78.89±5.68μmol/L,50μmol/L和100μmol/L的鱼腥草素钠对ATX II诱导增大INa.L的抑制率分别为30.1%和57.1%。其次,鱼腥草素钠还可浓度依赖性地增大兔心室肌细胞ICa.L,其半最大效应浓度（EC50）为37.10μmol/L,并且100μmol/L鱼腥草素钠还能减慢ICa.L的稳态失活以及加快ICa.L的失活-复活过程。此外,鱼腥草素钠还可有效地增强兔心室肌细胞的收缩力。结论:鱼腥草素钠具有Ⅰ类抗心律失常药物特性,并且鱼腥草素钠可增大ICa.L以及增强心肌细胞收缩力使其对于心力衰竭等心功能不全并发心律失常患者治疗有独特的优势。因此,鱼腥草素钠有望成为一种新型应用广泛的抗心律失常药物。
姚岚,方芳[4]（2017）在《作用于心肌细胞离子通道的抗心律失常中药研究进展》文中认为心肌电生理信号传导的基础是各种离子通过心肌细胞膜上的通道形成跨膜电流。当离子通道结构、数目及功能异常时将会导致离子通道跨膜平衡的破坏,使各主要离子通道间数目比例改变从而诱发心律失常。近年来中医对心肌细胞跨膜离子通道异常导致的心律失常有一定的研究,发现多种中药成分具有抑制离子转运、调节膜内外离子浓度、改变动作电位等作用,进而抑制心律失常的发生。对中医药单药及成方总结与归纳,对作用于心肌细胞离子通道的抗心律失常中药进行综述。
李俊平,郭丽丽,陈中,袁蓉,王阶[5]（2016）在《钙超载与心肌缺血再灌注损伤及中药干预策略》文中研究说明据国家心血管病中心最近发布的报告显示,心血管病占居民疾病死亡构成的40%以上,为我国居民的首位死因,其中冠心病死亡率在逐年上升。血运重建能快速打开堵塞血管、恢复冠脉血供,成为治疗冠心病的重要手段。但是血运重建也只是一种局部治疗,并不能终止冠心病的病理发展进程,加之治疗后出现的一系列再灌注损伤,严重制约了冠心病的治疗效果。心肌缺血再灌注损伤是个复杂的病理过程,与氧自由基、钙超载、能量代谢障碍等密切相关。再灌注时可见心肌细胞内钙超载,而钙超载亦可通过多种机制造成心肌细胞进一步损伤。钙超载是心肌细胞损伤和死亡的共同通路,故防治钙超载是阻止I/R的重要举措。临床常用的钙通道阻滞剂防治钙超载取得很大进展,它们均能作用于血管平滑肌的L型Ca通道从而抑制钙超载,但也有因其作用靶点单一而副作用大的不足,故临床应用受到一定限制。中医药是个伟大的宝库,其中不少药物具有类似钙拮抗作用,开发应用此类药物弥补西药治疗的不足成为当代中医人的重要任务。
李俊平[6]（2016）在《益气活血安神法通过抑制钙超载减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的实验研究》文中提出研究背景再灌注治疗是冠心病急性心肌梗死（AMI）治疗史上里程碑式的进展,其手段主要有三种：静脉溶栓、经皮冠状动脉腔内成形及支架植入术（PTCA+PCI）.冠脉旁路移植术（CABG）,随着介入器械和技术的日臻成熟,PCI已成为治疗冠心病AMI的主要手段。但是,再灌注治疗只是一种局部治疗手段,并不能终止冠心病的病理发展进程,加之治疗后出现的一系列心肌缺血再灌注损伤（MIRI）,严重制约了冠心病的治疗效果。在MIRI过程中炎症反应、氧化损伤、钙超载及能量利用障碍等都发挥着重要作用,其中钙超载是造成心肌细胞损伤和死亡的共同通路,故防治钙超载是减轻MIRI的重要举措。目前针对MIRI的西医干预多限于实验研究,很多药物尚未应用于临床,只有苯磺酸氨氯地平防治其他器官（如肝脏、卵巢）再灌注治疗后钙超载的实验报道。但由于苯磺酸氨氯地平是通过作用于血管平滑肌的L型Ca通道从而抑制钙超载,存在作用靶点单一、可明显抑制心肌细胞收缩功能,副作用较大,故临床应用有一定局限性。中药也有钙拮抗作用,但其具体作用特点及机制与临床常用有效西药钙通道阻滞剂苯磺酸氨氯地平（络活喜）的异同未见报道。基于心肌缺血再灌注损伤的中医病因病机,结合多年临床经验导师创制出益气活血复方（以下简称复方）,功在益气活血,凉血安神,其主要组成为黄芪、丹参、三七、银杏、酸枣仁等提取物。围绕“防治钙超载”和“保护心功能抑制心室重构”这两大目标,进行益气活血复方对心肌缺血再灌注大鼠心肌损伤保护作用及机制的研究,拟为益气活血复方防治MIRI特色和优势分析提供实验依据。目的观察益气活血复方对心肌缺血再灌注损伤大鼠心室早期重构、心脏射血分数、和心肌梗死区／缺血区比例的影响；并从1miRNA-133调控钙超载及细胞凋亡角度探讨益气活血复方的作用机制。方法225只雄性Wistar大鼠,体重为300±20g,随机分为假手术组、模型组、络活喜组、益气活血复方高、中、低剂量6组,预防性给药7天后,结扎大鼠心脏冠脉左前降支,50min后复灌,制作大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。分别于造模前、造模后及复灌48h行心脏射血分数及心室内径检测,后处死大鼠,取血,离心取血清,剪取心脏,以依文思蓝-TIC双染色评估心肌梗死区与缺血区面积百分比,据此选择益气活血复方最优剂量进行后续机制探讨。每组取6只大鼠,行HE染色及TUNEL染色,取缺血区心肌组织,比色法检测心肌钙离子含量,Western blot法检测左心室缺血区心肌组织SERCA、CasR、MAPK通路、CytC、Caspase-3及Bcl-2蛋白的表达,Real-Time PCR法检测大鼠左心室缺血区心肌组织miRNA-133的表达。结果（1）心脏EF值：①造模术后：与假手术组相比,其余5组EF值均有不同程度的降低,差异具有统计学意义（P<0.05）；余各组间无差异。②复灌48h：模型组较造模术后EF值明显降低,差异具有统计学意义（P<0.05）,余各组均有不同程度升高,但较造模术后无差异。③复灌48h：与假手术组相比,各组心脏EF值均有显着下降,差异具有统计学意义（P<0.01）；与模型组相比,益气活血复方高、中、低剂量组均能显着提高EF值,差异具有显着统计学意义（P<0.05）,但三者之间无差异；络活喜组与模型组无明显差异。（2） LVIDd及LVIDs: ①LVIDd:与假手术组相比,模型与低剂量组LVIDd明显增大,差异具有统计学意义（P<0.05）；余各组与假手术无明显差异。与模型组相比,高剂量组LVIDd显着降低,差异具有统计学意义（P<0.05）；余络活喜、中剂量及低剂量与模型组无差异。②LVIDs:与假手术组相比,模型组LVIDs显着增大,差异具有统计学意义（P<0.01）;余各组间无明显差异。与模型组相比,高剂量及中剂量组LVIDs显着降低,差异具有统计学意义（P<0.01）,但二者之间无差异。（3）心肌梗死／缺血区比率（梗死区／缺血区比率大于30%小于60%）：与模型组相比,络活喜及高剂量组均能显着减小心肌梗死／缺血区比率,差异具有统计学意义（P<0.05）；但络活喜及高剂量两组间无明显差异。（4）心肌组织钙含量：与假手术组相比,模型组钙离子显着升高,差异具有统计学意义（P<0.01）；络活喜及高剂量组含量显着降低,差异具有统计学意义（P<0.05）,但络活喜及高剂量二者组间无明显差异。（5）对SERCA2A及CasR表达的影响：①SERCA2A与假手术相比,模型组心肌SERCA2A表达水平明显降低,差异具有统计学意义（P<0.01）：与模型组相比,络活喜和高剂量组表达水平均显着升高,差异具有统计学意义（P<0.01）,但络活喜和高剂量组间无明显差异。②CasR:与假手术组相比,模型、络活喜及高剂量组CasR表达水平显着升高,差异具有显着统计学意义（P<0.01）；与模型组相比,高剂量组显着降低,差异具有统计学意义（P<0.01）;高剂量与络活喜组相比,心肌CasR表达水平显着降低,差异具有统计学意义（P<0.01）。（6）心肌细胞凋亡检测：与假手术相比,各组心肌凋亡指数均有显着升高,差异具有统计学意义（P<0.01）；与模型组相比,络活喜及高剂量均能显着降低心肌凋亡指数,差异具有统计学意义（P<0.01）,但二者组间无明显差异。（7）对CytC、Caspase-3及Bcl-2表达的影响：①CytC:与假手术相比,模型及高剂量组心肌CytC表达均有明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）；络活喜与假手术之间无明显差异：与模型组相比,络活喜及高剂量组均有明显降低,差异具有统计学意义（P<0.05）,但络活喜与高剂量组间无明显差异。②CasPase-3:与假手术相比,模型、络活喜及高剂量组CasPase-3表达均有明显升高,差异具有统计学意义（P<0.01）；与模型组相比,络活喜及高剂量组均有明显降低,差异具有统计学意义（P<0.01）,但络活喜与高剂量组间无明显差异。③Bcl-2：与假手术相比,模型和络活喜组均有明显降低,差异具有统计学意义（P<0.01）,高剂量与假手术组间无差异；与模型组相比,络活喜和高剂量组均有明显升高,差异具有统计学意义（P<0.01）：与络活喜组相比,高剂量组显着升高,差异具有统计学意义（P<0.01）。（8）对P38、JNK、ERK1/2表达的影响：①P38：与假手术相比,模型、络活喜及高剂量组P38表达水平明显升高,差异具有统计学意义（P<0.01）；与模型组相比,络活喜和高剂量组显明显降低,差异具有统计学意义（P<0.01）;络活喜与高剂量组间无明显差异。②.JNK：与假手术组相比,模型组表达水平明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）；余各组间无明显差异。③ERK1/2：与假手术相比,模型、络活喜及高剂量组ERK1/2表达水平均有明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）；与模型组相比,络活喜组显着降低,差异具有统计学意义（P<0.01）；与络活喜组相比,高剂量组明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）。（9）对miRNA-133表达的影响：与模型组相比,假手术、络活喜及高剂量组miRNA-133表达明显升高,差异具有统计学意义（P<0.01）；与假手术相比,络活喜及高剂量组无明显差异;络活喜与高剂量组之间无明显差异。结论（1）益气活血复方和络活喜均可减小大鼠心肌缺血再灌注损伤时心肌梗死面积；此外益气活血复方还能提高再灌注引起的心脏EF值降低、抑制LVIDd、LVIDs的增大,从而抑制MIRI早期左心室的恶性重构,改善心功能,其综合效应明显优于络活喜。（2）益气活血复方能抑制心肌缺血再灌注损伤钙超载,并减轻钙超载引起的线粒体途径的心肌细胞凋亡。（3）益气活血复方可能通过上调miRNA-133水平、调节p38MAPK通路来发挥保护受损心肌的作用。
刘娜[7]（2015）在《银杏叶提取物凝胶骨架片的制备及其体外释放的生物活性评价》文中研究指明目的：本文选取银杏叶提取物为模型药物,通过单因素考察及正交实验制备银杏叶提取物凝胶骨架片,以银杏叶提取物总黄酮醇苷不同时间点累计释放度为评价指标,采用溶出仪进行体外释放度测定；选择抗氧化和扩张血管这两个与模型药物临床应用密切相关的药理指标,采用药理学实验方法,建立药理指标的变化与模型药物浓度良好的线性关系,以选择的生物活性指标对自制凝胶骨架片进行体外释放度测定,研究成分指标与生物活性指标评价体外释放度的相关性,以建立一种符合中药多成分特点又简单快速评价该制剂体外释放特征的手段和方法。方法：（1）以总黄酮醇苷不同时间点累积释放度为指标,采用紫外分光光度法对骨架材料的种类、用量、填充剂的种类、压片硬度、压片方法进行单独考察,并结合f2相似因子法进行相似性判断,以找出对药物释放行为具有显着性影响的因素；采用正交实验,以药物不同时间点累积释放度为考察指标,采用L9（34）正交表进行处方优化,确定亲水凝胶骨架片的最终处方；分别以紫外分光光度法及高效液相色谱法测定总黄酮醇苷及三个主要的黄酮苷元不同时间点累积释放度,比较总黄酮醇苷及三个苷元释放行为的相似性；（2）抗氧化生物活性指标-提取物量效关系的建立：采用DPPH法、ABTS法及FRAP法,分别建立生物活性指标与药物浓度的线性相关关系；扩张血管生物活性指标-提取物量效关系的建立：体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC-T1）,建立氯化钴诱导的细胞缺氧损伤模型；随机将细胞分为5组,测定5组细胞上清液中ET-1、NO的水平,建立银杏叶提取物与细胞上清液中NO. ET-1含量变化的相关性；以生物活性指标与药物浓度所建方程的线性相关系数r、呈线性相关时的最低浓度、操作繁简、重复性为考察指标,选择相对合适的测定方法；（3）采用高效液相色谱法对自制凝胶骨架片进行体外释放度测定,同时不同时间点溶出液进行ABTS实验,测定ABTS自由基清除率,以线性回归方程的相关系数r值及f2相似因子法建立银杏叶提取物凝胶骨架片体外释放的成分指标-生物活性指标相关性。结果：（1）选择两种骨架材料混合（A）、混合比例（B）、填充剂用量（C）作为三个因素,因素的三个水平如下：A K4M-K15M混合使用、K4M-K100M混合使用及K15M-K100M混合使用,B 4：1、3：1、2：1,C 5%、7%、10%,各因素对药物释放度的影响顺序为：HPMC混合>填充剂用量>混合比例,因素的各水平优劣顺序为：A：2>3>1,B:2>3>1, C:3>1>2,优化后的最佳组合为A2B2C3。分别采用紫外分光光度法及高效液相色谱法对三批骨架片不同时间点的累积释放度进行测定,计算得f2均>50表明总黄酮醇苷及其三个主要黄酮苷元的释放行为是相似的；（2）三种抗氧化生物活性指标测定方法结果：①以DPPH自由基清除率为纵坐标,药物浓度为横坐标,得到的线性方程相关系数r=0.9993,其浓度范围是200-1200μg.ml-1,达到线性相关关系的最低浓度为200μg.ml-1;②以ABTS自由基清除率为纵坐标,得到的线性方程相关系数r=0.9998,其浓度范围是6.25～100μg.ml-1,达到线性相关关系的最低浓度为200 μg.ml-1;③以还原能力为纵坐标,所得线性方程相关系数r=0.9437,其浓度范围是1.5～50 μg.ml-1,达到线性相关关系的最低浓度为1.5 μg.ml-1;（3）统计结果表明除0.1mM外,氯化钴各浓度组与正常对照组相比,细胞活力均有所降低（P<0.05）,且各浓度组之间均有显着性差异（P<0.05）,实验过程中选择浓度为1 mM。单纯缺氧组细胞上清液中NO含量明显降低（P<0.05）,ET-1含量明显升高（P<0.05）,提示离体模型成立；银杏叶提取物不同浓度组与正常细胞组相比,NO分泌量具有显着性差异（P<0.05）,除GBE浓度为3.125 μg. ml-1时,提取物各浓度组与损伤组相比,均具有显着性差异（P<0.05）；银杏叶提取物各浓度组与损伤组和正常组相比均具有显着性差异（P<0.05）；银杏叶提取物可显着干扰细胞损伤模型NO、ET-1的释放,且干扰作用与银杏叶提取物浓度呈一定的线性相关,将银杏叶提取物的浓度与对应的加样后细胞上清液NO、ET-1含量做相关性分析,得到药物浓度的对数与给药后细胞上清液中NO、ET-1含量相关系系数分别为r--0.9759和r=0.9379,结合抗氧化生物活性测定方法所得方程的相关系数、可重复性、成线性的最低浓度、精密度等,最终选择抗氧化这一生物活性指标,选择的测定方法为ABTS法；（4）以银杏叶提取物缓释片体外溶出液ABTS清除率为因变量Y,药物累积释放度为自变量X,建立回归方程,其相关系数r=0.998,结果表明二者相关性良好；将生物效应的清除率表征为药物累积释放百分率,采用f2相似因子法比较生物指标与化学指标测得骨架片累计释放度的相似性,计算得f2=66.40>50,表明生物指标与化学指标测得药物累计释放百分率是相似的,这表明ABTS自由基清除率实验方法可以作为一种既符合中药多成分特点又简单快速评价该制剂体外释放特征的手段和方法。结论：实验表明,自制银杏叶提取物凝胶骨架片经紫外分光光度法及高效液相色谱法测定后,其体外释药行为基本符合缓释制剂特征,ABTS自由基清除率实验方法可以作为一种既符合中药多成分特点又简单快速评价该制剂体外释放特征的手段和方法。
曹永[8]（2015）在《五参二连颗粒对病毒性心肌炎心肌细胞保护作用的实验研究》文中研究说明目的:通过体内外实验研究五参二连颗粒对乳大鼠及病毒性心肌炎小鼠心肌细胞的保护作用。方法:体外实验:制备Wistar乳大鼠心肌细胞,培养观察后随机分成两部分,一部分用于测定五参二连颗粒心肌细胞毒性;另一部分在人工接种柯萨奇病毒B3后,随机分为正常组、病毒组、五参二连颗粒及利巴韦林不同剂量组。采用ELISA法检测心肌损伤标志物（肌钙蛋白Ⅰ、肌红蛋白及肌酸激酶同工酶）,MTT法检测五参二连颗粒抗病毒效果。体内试验:建立BalB/c小鼠病毒性心肌炎模型,随机分为模型组、正常组、利巴韦林组及五参二连颗粒大、中、小剂量组,每组10只小鼠,各组小鼠均连续灌胃给药6天并观察一般情况,在末次给药2小时后终止实验,称重并根据检测要求采集标本,随后对所取标本进行心肌酶指标检测、脏器指数检测、NK杀伤细胞检测及心肌组织病理学检测。结果:五参二连颗粒及利巴韦林半数中毒浓度（TC50）分别为415.28±1.82μg/mL、376.49±2.77μg/mL;柯萨奇病毒B3感染乳大鼠心肌细胞后,ELISA法检测心肌损伤指标显示,五参二连颗粒在250μg/mL时与模型组及利巴韦林组相比较,肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌钙蛋白（cTnI）及肌红蛋白（MYO）浓度均明显下降（P<0.05）,说明五参二连颗粒此浓度可明显减轻心肌细胞由病毒感染造成的损伤。MTT法检测五参二连颗粒抗病毒效果显示,五参二连颗粒对病毒性心肌炎的治疗指数为13.02±0.94,体外抗病毒治疗指数明显高于利巴韦林组 6.93±0.93（P<0.05）。心肌组织光镜下检查结果发现模型组小鼠心肌外膜下可见大量炎性细胞浸润灶,灶内可见心肌细胞坏死,偶见心肌细胞浊肿变性、肌纤维断裂等,模型组病理积分（3.02±0.3）与正常组相比P<0.01,表明造模成功;同时五参二连颗粒大、中剂量组病理积分与利巴韦林组相比P<0.01,说明五参二连颗粒在减轻柯萨奇病毒B3对小鼠心肌组织损伤方面优于利巴韦林。五参二连颗粒大、中剂量组及利巴韦林组脾指数和胸腺指数有升高迹象,表明受试药物具有明显调节体内免疫作用（P<0.05）;NK杀伤作用的检测结果表明五参二连颗粒大、中剂量均能提高NK细胞杀伤能力,与模型组及正常组相比P<0.05。小鼠心肌酶检测结果显示,五参二连颗粒大、中剂量组与模型组及利巴韦林组相比CK-MB、cTnI均明显下降（P<0.05）,提示五参二连颗粒大、中剂量可以保护心肌细胞,减轻CVB3导致的心肌损害,有助于心肌修复。结论:五参二连颗粒具有一定的抑制柯萨奇病毒B3增殖作用,可以减轻柯萨奇病毒B3造成的心肌损伤,并激发机体的免疫调节机制,对心肌细胞具有一定保护作用。
郭明,刘玥,许琳,付长庚,陈可冀[9]（2014）在《中药银杏制剂的心血管药理效应:机制与展望》文中指出银杏是传统的活血化瘀中药,银杏制剂是现代科技开发的植物药中最为成功的案例之一.目前研究较多的银杏制剂是银杏酮酯,其主要活性成分为银杏黄酮、银杏内酯等,具有较为广泛的心血管药理效应,对多种心血管疾病具有较好的预防和治疗效果.本文对中药银杏制剂的主要活性成分、心血管药理效应及其机制、研究展望做一述评.
刘宇[10]（2014）在《通阳活血方对受损兔窦房结细胞起搏电流电生理及信号转导机制研究》文中认为背景：流行病学调查表明,病态窦房结综合征（sick sinus syndrome,SSS,简称病窦）,是临床难治性的重大疑难心血管疾病,属慢性渐进性疾病,高发病率、高危险性已经引起人们的普遍关注。因此,病窦的治疗及研究成为亟待解决的医学疑难问题。SSS目前尚无根治措施,西医治疗以阿托品、肾上腺素、氨茶碱等药物提高心率为主,副作用大；安装及更换单腔起搏器大约为2.89万费用较贵,且存在严重的禁忌症和并发症。因此,寻求安全、有效、廉价的治疗方法成为一种迫切需要。窦房结是心脏自律性的发源地,其起搏功能的正常对维持心脏正常的泵血功能尤为重要。早在上个世纪50年代,细胞膜兴奋理论认为,细胞膜离子通道的综合作用是心脏起搏的主要机制（membrane clock,膜钟）,其中包括超极化激活的起搏电流（If）、内向整流钾电流（IK1）、SCN5A编码的钠电流（INa）、钙电流（ICa）等。窦房结细胞（SNC）超极化激活环核苷酸门控（HCN）通道（hyperpolarization-activated current,简称If通道）在维持SNC自律性方面具有举足轻重的作用,SSS的产生与SNC结构的破坏、活性和自律性的降低直接相关近年研究表明,大多数学者认为SSS临床表现以本虚标实为主,本虚以气虚、阳虚多见,提出从整体入手,通过多环节、多靶点缓解病情,提高患者生存率、改善生存质量。中国中医科学院广安门医院刘志明老中医临证70余年经验认为SSS的临证以阳虚血瘀为主,故提炼治疗SSS有效方剂—通阳活血方（THR）,为原创经验方。前期对该方进行了多中心临床研究表明该方治疗病窦疗效确切、安全性好；基础实验研究表明该方通过多靶点、多途径起作用。因此,深入挖掘名老中医治疗病窦的宝贵经验,探讨修复受损窦房结结构和功能的电生理机制,具有重要的临床意义和应用价值。目的：在以往用于细胞研究的乳兔窦房结细胞（SNC）分离方法基础上进行改良,成功分离、培养出适用于全细胞膜片钳技术的乳兔SNC,进一步探讨THR含药血清、中药原液以及主要有效成分对乳兔缺血再灌SNC动作电位（AP）相关参数、起搏电流的影响和信号转导机制,以揭示THR治疗SSS的细胞电生理机制,为名老中医经验方治疗病窦提供科学依据,为传承名老中医经验提供借鉴。方法：1.将采用“双酶解+差速贴壁”法分离的乳兔SNC分为正常组、模型组、100、200、300μl通阳活血含药血清组及100μl空白血清组,除正常组,其余各组细胞均模拟缺血-再灌注（I-R）法制备乳兔SNC损伤模型,并利用全细胞膜片钳技术观察空白血清及通阳活血方含药血清对各组SNC自发性搏动频率、作电位时程APD20、APD50、APD90、最大舒张电位（MDP）、动作电位幅值（APA）的影响。2.将采用“双酶解+差速贴壁”法分离的乳兔SNC分为正常组、模型组、100、200、300μl含药血清组及通阳活血中药原液组,除正常组,其余各组细胞模拟I-R法制备SNC损伤模型,并利用全细胞膜片钳技术观察THR中药原液及含药血清对各组SNC超极化环核苷酸门控阳离子通道电流起搏电流（If）电流-电压曲线及相关门控机制的影响。3.将采用“双酶解+差速贴壁”法分离的乳兔SNC分为正常组、模型组、100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L人参Rb1、黄芪甲苷,除正常组,其余各组细胞模拟I-R法制备SNC损伤模型,并利用全细胞膜片钳技术观察人参Rb1、黄芪甲苷对各组SNC超极化环核苷酸门控阳离子通道电流起搏电流（If）电流-电压曲线及相关门控机制的影响。4.将采用“双酶解+差速贴壁”法分离的乳兔SNC分为正常组、模型组、1μmol/L激动剂Forskolin和100μmol/L选择性抑制剂H89,除正常组,其余各组细胞模拟I-R法制备SNC损伤模型,并利用全细胞膜片钳技术观察Forskolin、H89高中低剂量对各组SNC超极化环核苷酸门控阳离子通道电流起搏电流（If）电流-电压曲线及相关门控机制的影响。结果：1.“双酶解+差速贴壁”差速贴壁5d后细胞主要呈3种形态：梭形、蜘蛛形与多边形,梭形细胞数目最多（61.5±6.8）,搏动频率快,（136±12）次/min；蜘蛛形细胞胞体较大,多伸有伪足,搏动频率较梭形细胞慢（106±9）次/min；少量多边形细胞体积较大、少伪足且无搏动,细胞平坦、胞浆清亮。2.与正常组比较,模拟I-R造模后SNC的APD20由正常（25.7±4.8）ms延长至（82.6±5.3）ms,具有显着统计学差异（P<0.05）,于造模后细胞外液分别加入100、200、300μl通阳活血方含药血清后,APD20分别缩短至（42.7±6.7）ms.（53.3±6.5）ms.（41.5±6.4）ms,差别均具有统计学意义（P<0.05）,三个含药血清组之间比较则无统计学差异。与正常组比较,模拟I-R造模后SNC的APD5o由正常（78.79±5.3）ms延长至（152.5±5.6）ms,具有极显着统计学差异（P<0.01）,于造模后细胞外液分别加入100、200、300μl通阳活血方含药血清后,APD5o分别缩短至（98.2±6.4）ms.（123.9±4.9）ms.（114.2±4.9）ms,差别均具有统计学意义（P<0.01）,其中100μl含药血清组缩短比200、300μl含药血清组更明显（P<0.05）,但200lμl和300μl含药血清组比较无统计学意义。与正常组比较,模拟I-R造模后SNC的APD90虽有延长,但无统计学意义（P>0.05）。于造模后细胞外液分别加入100、200、300μ1通阳活血方含药血清后,APD90的改变无统计学意义（P>0.05）。3.与正常组比较,模拟I/R造模后SNC的MDP由正常的（-65.6±4.8）mV变为（-53.9±5.8）mV,APA则由正常的（85.2+3.8）mV降低至（73.7±4.9）mV,均具有显着性统计学差异（P<0.01）。分别加入100、200、300μl通阳活血方含药血清后,各组MDP值无明显改变（P>0.05）,100μl和300μl含药血清分别使APA升高至（84.3+4.8）mV和（83.4±6.3）mV,具有显着性统计学差异（P<0.01）,但两组间比较无统计学意义：与模型组比较,200μl含药血清对APA虽有升高,但无统计学差异。与模型组比较,100μl空白血清组MDP及APA均无明显改变（P>0.05）4.正常组窦房结细胞If峰值电流密度为（-43.48±1.08）pA/pF,模拟I/R后SNCIf峰值电流密度降至（-19.64±2.14）pA/pF,具有极显着性差异（P<0.01）分别加入100、200、300μl通阳活血方含药血清后If峰值电流密度有不同程度的增大,分别升高至（-94.90±0.66）pA/pF、（-115.37±1.62）pA/pF、（-122.54±1.11）pA/pF（P<0.01）.空白血清组与模型组比较,If峰值电流密度无明显变化。分别于正常细胞外液加入100μl通阳活血方含药血清及空白血清后,含药血清组If峰值电流密度较正常组有所升高（P<0.05）,空白血清组则无明显变化。模拟I/R后SNC在分别加入100、200、300μl通阳活血方原液后,If峰值电流密度亦有不同程度的增大,分别升高至（-60.27±1.47） pA/pF、（-69.70±1.67） pA/pF、（-76.03±1.59） pA/pF （P<0.01）。分别于正常细胞外液加入100μl通阳活血方中药原液后,If峰值电流密度有所升高（P<0.01）。5.正常组窦房结细胞If峰值电流密度为（-43.48±1.08） pA/pF,模拟I/R后SNC If峰值电流密度降至（-19.64±2.14）pA/pF,具有极显着性差异（P<0.01）。加入100、200、400μmol/L人参Rb1后,If峰值电流密度有不同程度的增大,分别升高至（-22.99±1.75）pA/pF（P<0.05）、（-24.39±2.38） pA/pF、（-40.55±1.33）pA/pF（P<0.01）。分别于正常细胞外液加入100μmol/L人参Rb1, If峰值电流密度较正常组有所升高,但无统计学意义（P>0.05）。模拟I/R后SNC在分别加入100、200、400μmol/L黄芪甲苷后,If峰值电流密度亦有不同程度的增大,分别升高至（-30.43±1.98） pA/pF、（-34.83±1.6） pA/pF、（-52.72±1.7） pA/pF （P<0.01）。分别于正常细胞外液加入100μmol/L黄芪甲苷后,If峰值电流密度有所升高（P<0.05）6.正常组窦房结细胞If峰值电流密度为（-43.48±1.08） pA/pF,模拟I/R后SNC If峰值电流密度降至（-19.64±2.14） pA/pF,具有极显着性差异（P<0.01）。参照文献,在浴液中加入10μmol/LH89后,If峰值电流密度有不同程度的减小,下降至（-11.56±2.34） pA/pF （P<0.01）。后于浴液中分别加入100μl的含药血清和中药原液,If峰值电流密度有不同程度的升高,分别升高至（-12.45±2.16） pA/pF （P>0.05）、（-11.84±1.75） pA/pF （P>0.05）。在浴液中加入1μmol/L Forskolin后,If峰值电流密度有不同程度的上升至（-25.82±1.53）pA/pF （P<0.05）。后于浴液中分别加入100μl的含药血清和中药原液,If峰值电流密度有不同程度的升高,分别升高至（-61.03±2.48） pA/pF （P<0.01）（-51.60±2.47） pA/pF （P<0.01）结论：1.通阳活血方含药血清可加快乳兔受损SNC自发性搏动频率,缩短作电位时程APD20、APD50,增大乳兔受损SNC的APA,同时可保护乳兔受损SNC形态结构,从而提高心率,2.通阳活血方含药血清及中药原液能电压依赖性增大受损乳兔SNC的If电流密度,加快If通道稳态激活,恢复降低的If电流密度,以缩短SNC动作电位的舒张去极,从而提高其自律性。3.人参Rb1、黄芪甲苷可电压依赖性增大受损乳兔SNC的If电流密度,加快If通道稳态激活,恢复降低的If电流密度,以缩短SNC动作电位的舒张去极。4.通阳活血方含药血清及中药原液作用于If受PKA信号转导的影响。5.通阳活血方可能是通过上述机制增强SNC If以缩短动作电位时程,改善SNC起搏功能,从而加快心率。
二、银杏叶提取物761对乳鼠心室肌细胞钙通道的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、银杏叶提取物761对乳鼠心室肌细胞钙通道的影响（论文提纲范文）
（1）miRNA-129-1-3p在芦丁减轻吡柔比星所致心脏毒性并增敏抗乳腺癌药效中的介导作用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩写词对照表 |
| 第1篇 前言 |
| 第2篇 文献综述 蒽环类药物致乳腺癌患者心脏毒性的研究进展 |
| 1.1 蒽环类药物心脏毒性临床表现 |
| 1.1.1 蒽环类药物心脏毒性发病率 |
| 1.1.2 蒽环类药物心脏毒性临床类型 |
| 1.1.3 蒽环类药物心脏毒性病理特征 |
| 1.2 蒽环类药物所致心脏毒性的发生机制 |
| 1.2.1 氧化应激 |
| 1.2.2 内质网应激和肌浆网钙稳态 |
| 1.2.3 线粒体功能障碍 |
| 1.2.4 铁调节蛋白紊乱 |
| 1.2.5 炎症反应 |
| 1.2.6 细胞自噬 |
| 1.2.7 细胞凋亡 |
| 1.3 蒽环类药物所致心脏毒性的药物防治 |
| 1.3.1 右雷佐生 |
| 1.3.2 卡维地洛 |
| 1.3.3 他汀类药物 |
| 1.3.4 辅酶Q10 |
| 1.3.5 中药 |
| 1.4 蒽环类药物所致心脏毒性与miRNAs |
| 1.4.1 miRNAs简介 |
| 1.4.2 心脏miRNAs表达的变化 |
| 1.4.3 循环miRNAs表达的变化 |
| 1.4.4 miRNAs在预防和治疗中的作用 |
| 1.5 乳腺癌与miRNAs |
| 1.5.1 诊断与分型 |
| 1.5.2 治疗 |
| 1.5.3 预后 |
| 1.6 miRNAs在蒽环类药物致乳腺癌患者心脏毒性中应用的展望 |
| 第3篇 实验研究 |
| 第1章 RUT减轻THP所致心脏毒性的miRNA生物信息学分析及miRNA-129-1-3p/GRIN2D介导的Ca~(2+)通路的构建 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 实验试剂 |
| 1.1.2 实验仪器 |
| 1.1.3 主要溶液配制 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 细胞培养 |
| 1.2.2 miRNA芯片生物信息学分析及信号通路构建 |
| 1.2.3 双荧光素酶报告基因实验 |
| 1.2.4 统计分析 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.3.1 生物信息学分析预测miR-129-1-3p靶基因和Ca~(2+)通路的联系 |
| 1.3.2 双荧光素酶报告基因实验 |
| 1.4 本章小结 |
| 第2章 miRNA-129-1-3p在 RUT减轻THP诱导的小鼠心肌细胞损伤中的介导作用 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 药品及试剂 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.1.3 主要溶液配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 实验用药配制 |
| 2.2.3 CCK-8 细胞毒性-增殖检测 |
| 2.2.4 实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR) |
| 2.2.5 细胞转染 |
| 2.2.6 ROS检测 |
| 2.2.7 细胞丙二醛检测 |
| 2.2.8 超氧化物歧化酶检测 |
| 2.2.9 Fluo-3 AM钙离子检测 |
| 2.2.10 TUNEL细胞凋亡检测 |
| 2.2.11 Western blot |
| 2.2.12 统计分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 RUT、THP对心肌细胞作用的最佳浓度和时间确定 |
| 2.3.2 RUT逆转THP处理的HL-1细胞中miR-129-1-3p下调和GRIN2D mRNA上调 |
| 2.3.3 miR-129-1-3p转染至HL-1细胞中的效率评价 |
| 2.3.4 RUT和miR-129-1-3p改善THP诱导的HL-1细胞损伤 |
| 2.4 本章小结 |
| 第3章 miRNA-129-1-3p在 RUT协同THP抑制乳腺癌4T1细胞增殖、迁移及侵袭中的介导作用 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 药品及试剂 |
| 3.1.2 实验仪器 |
| 3.1.3 主要溶液配制 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 HC11及4T1细胞培养 |
| 3.2.2 实验用药配置 |
| 3.2.3 CCK-8细胞毒性-增殖检测 |
| 3.2.4 qPCR |
| 3.2.5 细胞转染 |
| 3.2.6 平板克隆形成实验 |
| 3.2.7 划痕实验 |
| 3.2.8 Transwell迁移和侵袭实验 |
| 3.2.9 Fluo-3 AM钙离子检测 |
| 3.2.10 Western blot |
| 3.2.11 统计分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 RUT和/或THP对乳腺(癌)细胞作用及最佳浓度和时间确定 |
| 3.3.2 RUT协同THP上调4T1细胞miR-129-1-3p、下调GRIN2D mRNA的表达 |
| 3.3.3 miR-129-1-3p mimics/inhibitor成功转染至4T1细胞 |
| 3.3.4 miR-129-1-3p介导4T1细胞增殖、迁移、侵袭的作用 |
| 3.4 本章小结 |
| 第4章 miRNA-129-1-3p在RUT对乳腺荷瘤与THP心脏毒性复合模型小鼠心肌保护及增敏抗肿瘤的介导作用 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 药品及试剂 |
| 4.1.2 实验仪器 |
| 4.1.3 主要溶液配制 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.14T1细胞培养 |
| 4.2.2 实验动物 |
| 4.2.3 乳腺荷瘤与心脏毒性小鼠复合模型的复制方法 |
| 4.2.4 实验分组及处理因素 |
| 4.2.5 小鼠血液标本的采集 |
| 4.2.6 小鼠肿瘤、心脏、肝脏及肺组织标本的采集 |
| 4.2.7 心电监测 |
| 4.2.8 心脏系数的测定 |
| 4.2.9 血清乳酸脱氢酶、肌酸激酶检测 |
| 4.2.10 血清MDA检测 |
| 4.2.11 血清SOD检测 |
| 4.2.12 小鼠肿瘤、心脏、肝脏及肺组织HE染色 |
| 4.2.13 肿瘤组织免疫组织化学染色 |
| 4.2.14 qPCR |
| 4.2.15 心肌与肿瘤组织中Ca~(2+)水平检测 |
| 4.2.16 TUNEL检测心肌与肿瘤组织细胞凋亡 |
| 4.2.17 Western blot |
| 4.2.18 统计分析 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 小鼠一般状况及体重变化 |
| 4.3.2 小鼠肿瘤生长情况 |
| 4.3.3 小鼠心电图变化 |
| 4.3.4 小鼠心脏系数变化 |
| 4.3.5 小鼠血清LDH及CK变化 |
| 4.3.6 小鼠血清MDA、SOD变化 |
| 4.3.7 小鼠肿瘤、心脏、肝脏及肺组织病理学改变 |
| 4.3.8 小鼠肿瘤组织中Ki67 变化 |
| 4.3.9 小鼠心肌和肿瘤组织中miR-129-1-3p和GRIN2D mRNA的变化 |
| 4.3.10 小鼠心肌和肿瘤组织中钙含量变化 |
| 4.3.11 小鼠心肌和肿瘤组织的细胞凋亡 |
| 4.3.12 小鼠肿瘤组织中与迁移、侵袭相关蛋白表达的变化 |
| 4.4 本章小结 |
| 第4篇 讨论 |
| 1.1 THP诱导小鼠心肌细胞损伤模型及乳腺荷瘤与THP心脏毒性复合小鼠模型的复制 |
| 1.1.1 THP诱导的小鼠心肌细胞损伤模型的复制 |
| 1.1.2 乳腺荷瘤与心脏毒性复合小鼠模型的复制 |
| 1.2 RUT改善THP所致小鼠HL-1 细胞/心肌损伤中的作用及机制 |
| 1.2.1 RUT改善THP所致小鼠HL-1 细胞/心肌损伤中的作用 |
| 1.2.2 RUT改善THP所致小鼠HL-1 细胞/心肌损伤中的作用机制 |
| 1.3 RUT增敏THP抗小鼠乳腺癌中的作用及机制 |
| 1.3.1 RUT增敏THP抗小鼠乳腺癌中的作用 |
| 1.3.2 RUT增敏THP抗小鼠乳腺癌的作用机制 |
| 第5篇 结论 |
| 创新点 |
| 今后工作展望 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（3）芦荟苷和鱼腥草素钠对心肌电生理的影响及其抗心律失常作用的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩写词表 |
| 第一部分 影响兔心室肌细胞钠、钾和钙电流中草药单体的筛选 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 结果 |
| 1.3 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 芦荟苷通过调节电压门控型离子通道抑制室性心律失常 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 兔心室肌细胞的分离 |
| 2.2.2 溶液和试剂 |
| 2.2.3 兔心室肌细胞电生理的记录 |
| 2.2.4 Langendorff-灌流的兔心脏心电图的记录 |
| 2.2.5 数据分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 芦荟苷对心室肌细胞动作电位的作用 |
| 2.3.2 芦荟苷对ATXⅡ-诱导产生的心室肌细胞APD延长和EADs以及Ca~(2+)诱导产生的DADs的作用 |
| 2.3.3 芦荟苷对心室肌细胞I_(Ca.L)的作用 |
| 2.3.4 芦荟苷和海豚毒素(TTX)对心室肌细胞的I_(Na.L)作用 |
| 2.3.5 芦荟苷对心室肌细胞I_(Na.P)的作用 |
| 2.3.6 芦荟苷对心室肌细胞I_(Kr)和I_(K1)的作用 |
| 2.3.7 芦荟苷对乌头碱诱导产生的离体兔心脏室性心律失常的作用 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 鱼腥草素钠通过调节心室肌细胞门控型离子通道及收缩力发挥其心脏保护作用 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 试剂与溶液 |
| 3.2.2 兔心室肌细胞的分离 |
| 3.2.3 兔心室肌细胞离子通道电流的记录 |
| 3.2.4 兔心室肌细胞收缩的检测 |
| 3.2.5 数据分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 鱼腥草素钠对兔心室肌细胞I_(Na.P)的作用 |
| 3.3.2 鱼腥草素钠对兔心室肌细胞I_(Na.L)的作用 |
| 3.3.3 鱼腥草素钠对兔心室肌细胞I_(Ca.L)的作用 |
| 3.3.4 鱼腥草素钠对心室肌细胞收缩的作用 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 心律失常与心肌细胞离子流的关系及中草药单体干预作用的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录1 攻读博士学位期间取得的科研成果 |
| 附录2 攻读博士学位期间参加的科研项目 |
| 致谢 |
| 外文论文一 |
| 外文论文二 |
（4）作用于心肌细胞离子通道的抗心律失常中药研究进展（论文提纲范文）
| 1 概况 |
| 2 中药单药 |
| 3 结语 |
（5）钙超载与心肌缺血再灌注损伤及中药干预策略（论文提纲范文）
| 1 钙超载及其机制 |
| 1.1 NHE及NCX激活 |
| 1.2 SERCA表达及活性降低 |
| 1.3 线粒体膜损伤及功能障碍 |
| 2 钙超载引起I/R的机制及西医防治 |
| 2.1 Ca2+做为细胞内第二信使可激活多种生物酶 |
| 2.2 线粒体功能障碍 |
| 2.3 心肌收缩功能障碍及心律失常 |
| 2.4 减轻钙超载对心脏的保护 |
| 3 中医药干预钙超载 |
| 3.1 具有钙拮抗剂作用的中药及中药注射剂 |
| 3.1.1 单味中药钙拮抗剂 |
| 3.1.2 具有钙拮抗作用的中药注射剂 |
| 3.2 具有钙拮抗剂作用的中药复方 |
| 3.3 目前存在的问题及应对策略 |
（6）益气活血安神法通过抑制钙超载减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 文献综述 |
| 综述一 心肌缺血再灌损伤的西医研究进展 |
| 1 心肌缺血再灌注损伤及表现 |
| 2 心肌缺血再灌注损伤的可能机制 |
| 3 心肌缺血再灌注损伤的干预 |
| 4 结语 |
| 参考文献 |
| 综述二 心肌缺血再灌注损伤的中医研究进展 |
| 1 历代医家对胸痹的认识 |
| 2 对心肌缺血再灌注损伤中医病因病机认识 |
| 3 益气活血安神立法依据 |
| 4 方药组成与解析 |
| 5 结语 |
| 参考文献 |
| 综述三 中药干预钙超载研究进展 |
| 1 钙超载及其机制 |
| 2 钙超载引起MIRI的机制及西医防治 |
| 3 中医药干预钙超载 |
| 4 目前存在的问题及应对策略 |
| 参考文献 |
| 实验研究 益气活血复方对大鼠心肌缺血再灌注损伤影响的实验研究 |
| 研究背景 |
| 实验一 益气活血复方对大鼠心肌缺血再灌注损伤后心脏射血分数和梗死区/缺血区面积百分比的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 益气活血复方对大鼠心肌缺血再灌注损伤后心肌钙超载及细胞凋亡的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验三 益气活血复方对心肌缺血再灌注大鼠钙超载、细胞凋亡下游信号通路的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附件 |
（7）银杏叶提取物凝胶骨架片的制备及其体外释放的生物活性评价（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| Abbreviations |
| 第一部分 综述 |
| 第一章 银杏叶提取物的药理作用及制剂研究进展 |
| 第一节 银杏叶提取物的药理作用综述 |
| 第二节 银杏叶提取物相关制剂的研究概况 |
| 第二章 中药口服缓控释制剂的研究进展 |
| 第一节 中药口服缓控释制剂体内外评价方法的研究进展 |
| 第二节 中药口服缓控释制剂的研究概况 |
| 第三章 生物活性测定法在药物评价中的应用研究 |
| 第一节 生物活性测定法的含义及研究思路 |
| 第二节 生物活性测定法的应用 |
| 前言 |
| 第二部分 银杏叶提取物凝胶骨架片的处方前研究及制备 |
| 第一章 银杏叶提取物凝胶骨架片溶出度测定方法的建立 |
| 1 银杏叶提取物总黄酮醇苷HPLC分析方法 |
| 2 银杏叶提取物总黄酮醇苷UV分析方法 |
| 第二章 银杏叶提取物亲水凝胶骨架片的处方工艺研究 |
| 1 仪器与试药 |
| 2 处方工艺研究与结果 |
| 3 小结与讨论 |
| 第三部分 生物活性测定法应用于银杏叶提取物凝胶骨架片体外缓释评价的探索性研究 |
| 第一章 基于抗氧化药效指标的银杏叶提取物生物活性测定方法的选择 |
| 1 仪器与试药 |
| 2 基于抗氧化活性的DPPH实验方法的建立 |
| 3 基于抗氧化活性的ABTS实验方法的建立 |
| 4 FRAP实验方法的建立 |
| 5 抗氧化生物活性指标测定方法比较分析 |
| 第二章 基于扩张血管药效指标与银杏叶提取物量效关系考察 |
| 1 仪器与材料 |
| 2 HUVEC-T1细胞的培养 |
| 3 HUVEC-T1细胞毒性实验 |
| 4 HUVEC-T1细胞损伤模型的建立及实验分组 |
| 5 细胞上清液中NO及ET-1的测定及相关性分析 |
| 6 小结与讨论 |
| 第三章 银杏叶提取物亲水凝胶骨架片体外缓释评价 |
| 1 以成分指标测定银杏叶提取物亲水凝胶骨架片体外释放度 |
| 2 以生物活性指标测定银杏叶提取物缓释片体外释放度 |
| 3 银杏叶提取物缓释片体外释放的成分指标-生物活性指标相关性 |
| 全文总结与讨论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）五参二连颗粒对病毒性心肌炎心肌细胞保护作用的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词 |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 一、中医学对病毒性心肌炎的理论研究 |
| 1.1. 历代医家对病毒性心肌炎的认识 |
| 1.2. 中医对病毒性心肌炎的病因病机的研究 |
| 1.3. 中医辨证论治研究 |
| 1.4. 中医药治疗病毒性心肌炎的机制研究 |
| 1.5. 总结 |
| 参考文献 |
| 二、现代医学对病毒性心肌炎的研究概况 |
| 1.1. 病毒性心肌炎的流行病学 |
| 1.2. 病因与病理生理学 |
| 1.3. 病毒性心肌炎的发病机制 |
| 1.4. 诊断 |
| 1.5. 治疗 |
| 1.6. 预后与转归 |
| 1.7. 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 一、五参二连颗粒体外抗病毒、保护心肌细胞的作用 |
| 1. 实验目的 |
| 2. 实验材料 |
| 3. 实验方法 |
| 4. 统计学方法 |
| 5. 实验结果 |
| 二、五参二连颗粒对病毒性心肌炎小鼠心肌细胞保护作用的研究 |
| 1. 实验目的 |
| 2. 实验材料 |
| 3. 实验方法 |
| 4. 统计方法 |
| 5. 实验结果 |
| 6. 实验结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 讨论 |
| 1. 五参二连颗粒辩证论治的处方依据 |
| 2. 五参二连颗粒组成及方解 |
| 3. 组方药物分析 |
| 4. 研究结果分析 |
| 5. 全文结论 |
| 6. 研究创新点 |
| 7. 存在问题与展望 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（10）通阳活血方对受损兔窦房结细胞起搏电流电生理及信号转导机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 前言 |
| 文献综述 |
| 综述一 中医药治疗病态窦房结综合征的概况 |
| 1 病因病机研究 |
| 2 治则治法研究 |
| 3 古方运用 |
| 4 自拟中药制剂 |
| 5 讨论 |
| 综述二 HCN4基因与心脏节律的关系 |
| 1 超极化激活阳离子通道4基因的电生理特性 |
| 2 超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4基因与心脏节律发生、病变及预后的关系 |
| 3 中药对超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4基因的作用 |
| 4 问题与展望 |
| 实验研究 |
| 实验一 通阳活血方含药血清及原液对受损乳兔窦房结细胞起搏电流的对比研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 实验二 人参Rb1、黄芪甲苷对起搏电流(I_f)的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 实验三 通阳活血方对受损乳兔窦房结细胞起搏电流影响信号转导机制研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
四、银杏叶提取物761对乳鼠心室肌细胞钙通道的影响（论文参考文献）
- [1]miRNA-129-1-3p在芦丁减轻吡柔比星所致心脏毒性并增敏抗乳腺癌药效中的介导作用[D]. 李琪. 吉林大学, 2021(01)
- [2]中药对细胞钙转运的调节作用[J]. 张红霞,石磊,郭一沙,吴晓凤. 武警后勤学院学报(医学版), 2018(08)
- [3]芦荟苷和鱼腥草素钠对心肌电生理的影响及其抗心律失常作用的研究[D]. 曹珍珍. 武汉科技大学, 2018(10)
- [4]作用于心肌细胞离子通道的抗心律失常中药研究进展[J]. 姚岚,方芳. 中西医结合心脑血管病杂志, 2017(09)
- [5]钙超载与心肌缺血再灌注损伤及中药干预策略[J]. 李俊平,郭丽丽,陈中,袁蓉,王阶. 中国中药杂志, 2016(11)
- [6]益气活血安神法通过抑制钙超载减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的实验研究[D]. 李俊平. 中国中医科学院, 2016(01)
- [7]银杏叶提取物凝胶骨架片的制备及其体外释放的生物活性评价[D]. 刘娜. 北京中医药大学, 2015(12)
- [8]五参二连颗粒对病毒性心肌炎心肌细胞保护作用的实验研究[D]. 曹永. 南京中医药大学, 2015(04)
- [9]中药银杏制剂的心血管药理效应:机制与展望[J]. 郭明,刘玥,许琳,付长庚,陈可冀. 中国科学:生命科学, 2014(06)
- [10]通阳活血方对受损兔窦房结细胞起搏电流电生理及信号转导机制研究[D]. 刘宇. 中国中医科学院, 2014(07)