一、无血清细胞培养研究取得重大突破（论文文献综述）
宋继军[1]（2021）在《猪圆环病毒2型悬浮培养及灭活疫苗工艺优化》文中研究说明猪圆环病毒病（Porcine Circovirus disease,PCVD）在世界范围内普遍存在,是影响世界养猪产业的重大疾病之一,同时也是影响中国养猪产业能否健康顺利发展的重大疾病之一。猪圆环病毒2型（Porcine Circovirus Type2,PCV2）是断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）、皮炎肾病综合征（PNDS）的主要病原,PMWS在加拿大最早被发现。此病可以造成养猪业的巨大损失。目前无有效的药物治疗此病,接种疫苗被认为是最有效的防控办法。而疫苗制备过程中,抗原的制备是最重要的环节,直接影响疫苗的质量。目前,大部分生物制品企业多采用转瓶培养工艺或偶见采用微载体全悬浮培养工艺进行猪圆环病毒2型抗原的培养。运用传统的转瓶工艺,培养出的病毒效价低、批间差异大、质量不稳定、生产成本高;运用微载体全悬浮培养技术又存在剪切力耐受度低、血清用量高、生产成本高、转球工艺复杂等不足。从行业发展和产业化背景等考虑,应用悬浮培养细胞系通过生物反应器培养参数的控制开展大规模动物病毒培养,可以起到降本增效、提高产品品质和提高企业的核心竞争力。本研究采用纯悬浮培养细胞技术和细胞生物反应器生产猪圆环病毒2型抗原,摸索并优化纯悬浮培养过程中涉及的重点质量控制点,开展对抗原纯化和抗原灭活生产工艺的研究,为大规模生产抗原提供可靠的数据支持,同时对应用该工艺制备的疫苗产品进行质量、安全性和效力性评估。（1）PK15细胞培养技术全悬浮培养研究采用PK15全悬浮培养细胞,用体积为150 ml的平行生物反应器系统,摸索适合悬浮细胞培养的各种参数,包括初始接种细胞密度的优化、溶氧参数的确定、pH参数的确定、搅拌转速选择、补液方式的优化。研究结果表明最佳培养条件为:细胞接种密度为5×105cells/ml;溶氧参数为40～50%;pH参数为7.0～7.4,当7.2时细胞生长最佳;搅拌转速为100～120 r/min;补液方式采取逐步加液。（2）猪圆环病毒2型（LG株）悬浮培养参数研究采用PK15细胞的全悬浮培养研究参数,运用平行生物反应器,对猪圆环病毒2型（LG株）悬浮培养参数开展进一步研究,包括接毒细胞浓度的优化、接毒剂量的优化、收毒时间的优化、全悬浮和转瓶培养方法的比较等。研究结果表明:最佳细胞接种浓度为5×105cells/ml;最佳接毒剂量确定为5%同步接种;最佳收获时间确定为120小时;全悬浮培养法收获的病毒滴度优于转瓶培养法收获的病毒滴度。（3）猪圆环病毒2型（LG株）抗原纯化工艺的研究对纯悬浮培养工艺收获的猪圆环病毒2型（LG株）抗原液进行细胞破碎优化和抗原纯化研究。细胞破碎采用低温超高压细胞破碎仪与传统冻融方法比较。抗原纯化引入中空纤维柱过滤和膜包过滤的方式进行纯化,比较纯化前后蛋白含量和病毒效价变化。研究结果表明:采用低温超高压细胞破碎仪能够很好的破碎悬浮培养后的细胞,与传统的反复冻融方法相比,具有破碎效果好和生产效率高等特点;0.45μm和100 k D中空纤维过滤技术可以很好地用于猪圆环病毒2型（LG株）疫苗的纯化生产工艺中,有效地提高了疫苗质量,产业化前景较好。（4）猪圆环病毒2型（LG株）抗原灭活工艺的研究采用灭活剂BEI与传统的灭活剂甲醛对猪圆环病毒2型（LG株）抗原液进行灭活效果比较,并做灭活检验。同时针对新的灭活剂开展安全性试验和免疫效力试验。研究结果表明:采用1.0‰浓度的BEI在32℃条件下48小时能够完全灭活猪圆环病毒2型（LG株）,灭活后的病毒安全试验和效力试验合格;用此方法制备的疫苗抗体产生的时间和抗体效价峰值均优于传统工艺甲醛灭活的疫苗。（5）猪圆环病毒2型（LG株）试验室试制的研究采用优化确定的全悬浮细胞培养工艺、抗原处理工艺及灭活工艺在试验室试制了3批猪圆环病毒2型（LG株）灭活疫苗,进行全项半成品和成品检验。研究结果表明:经过对实验室试制的半成品和成品样本等进行检测,证明新摸索的工艺所确定的参数能够符合圆环灭活疫苗（LG株）的生产要求,说明在实验室条件下能够制备出符合规定的合格疫苗。（6）猪圆环病毒2型（LG株）灭活疫苗安全性试验研究采用优化确定的全悬浮细胞培养工艺、抗原处理工艺及灭活工艺在生产车间试制了5批猪圆环病毒2型（LG株）灭活疫苗,进行全项成品检验后,开展了单剂量免疫仔猪试验、单剂量重复免疫仔猪试验、大剂量免疫仔猪试验和母猪安全性试验等安全性试验研究。研究结果表明:用新工艺方法生产的猪圆环病毒2型（LG株）灭活疫苗,对仔猪和妊娠母猪安全可靠、无毒副作用。（7）猪圆环病毒2型（LG株）灭活疫苗效力性试验研究采用优化确定的全悬浮细胞培养工艺、抗原处理工艺及灭活工艺在生产车间试制了5批猪圆环病毒2型（LG株）灭活疫苗,进行全项成品检验后,进行灭活疫苗效力性试验研究,包括疫苗免疫攻毒效检猪增重率评价试验、运用荧光定量PCR法评价疫苗免疫效力试验、免疫攻毒后病毒排毒规律及组织病毒载量测定试验、疫苗免疫持续期与抗体消长规律测定试验、最小免疫剂量试验及抗体与攻毒保护相关性试验、猪圆环病毒灭活疫苗（LG株）保存期试验、猪圆环病毒灭活疫苗（LG株）母猪被动免疫试验。研究结果表明:用新工艺方法生产的猪圆环病毒2型（LG株）灭活疫苗,通过疫苗免疫可有效抵御强毒攻击引起的猪只增重率下降,以增重率指标作为评价疫苗免疫效果的指标,简便易行,直观可信,能够反映出疫苗真实效果;荧光定量PCR方法能够定量检测病毒载量,可作为疫苗免疫效果评价指标之一;疫苗免疫刺激产生的抗体能够抵抗强毒的攻击;疫苗免疫持续期至少为6个月,该疫苗具有良好的免疫原性,刺激产生抗体快,持续时间长,能够提供充分的免疫保护;疫苗对仔猪最小免疫剂量为每头猪0.5 ml,用最小免疫剂量接种试验猪,于免疫28日后血清抗体全部阳转和免疫保护率为100%,抗体效价越高,获得的免疫保护效力越好,血清抗体效价可以作为PCV2灭活疫苗效力检验手段之一,用IPMA法测定血清抗体效价达到800倍以上,可获得100%免疫保护率;疫苗的保护期确定为2～8℃下保存,保存期为18个月;疫苗对母猪安全是安全的,被动免疫母猪对所产仔猪具有良好的免疫保护作用。上述研究结果表明,应用优化后的PK15细胞全悬浮培养技术、生物反应器大规模生产猪圆环病毒2型（LG株）抗原技术、抗原纯化技术、抗原灭活技术等最终制备的猪圆环病毒2型（LG株）灭活成品疫苗,各项检测指标都符合现行国家标准,安全性和免疫效果评价,对仔猪和母猪安全且免疫效果良好,可替代传统工艺生产的疫苗用于圆环病毒2型疾病的防控。优化工艺后生产的疫苗具有抗原含量高、杂蛋白含量低、无副反应、批间稳定、生产效率高、生产成本低等优点,符合国家科技发展需求,能够提高企业的技术竞争力,增加企业的净利润,拥有很好的市场应用前景。
关欣,周景文,堵国成,陈坚[2]（2021）在《培育肉生产技术发展研究》文中研究说明培育肉指不经饲养和屠宰动物、而是通过体外培养动物细胞来生产获得的新型肉制品,被视为最有可能解决传统牲畜生产导致资源消耗、环境污染、公众健康等问题的有效方案之一。本文概括了培育肉生产流程与关键技术,梳理了培育肉技术的国际发展态势,剖析了我国培育肉技术发展态势及行业发展面临的问题,据此提出我国培育肉生产技术的发展建议。研究发现,培育肉生产涉及细胞生物学、组织工程、发酵工程、食品工程等多学科领域的技术融合与综合运用,世界培育肉技术的发展处于起步和上升阶段;尽管行业领先企业已实现技术集成与产业化示范,但培育肉的工业化生产尚未完全实现,诸多关键技术瓶颈亟待突破。研究认为,我国培育肉行业起步较晚,面临研究基础薄弱、技术研发思路单一、产业化进程缓慢等问题,未来应加大对相关基础研发的政策和资金支持,加强跨行业交流并促进校企合作,注重消费者对培育肉的接受度与口味营养需求。
王思涵[3]（2021）在《氟化修饰聚酰胺-胺载体介导miR-23b递送治疗牙周炎的研究》文中进行了进一步梳理牙周炎是口腔主要疾病之一,其临床表现为牙龈出血、牙周袋形成、牙槽骨吸收甚至牙齿松动脱落。牙周炎的发病机理极其复杂,主要是由肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）和 IL-6 等炎症介质可与其相应的受体结合,激活NF-κB信号通路,使得破骨细胞膜上的NF-κB 受体活化因子（receptor activator of nuclear factor-κB,RANK）和其配体核因子 κB 受体活化因子配体（receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL）相结合,引起牙槽骨吸收。临床上常用的治疗手段有牙周基础治疗、药物治疗和牙周外科手术治疗,但这些方法仍存在局限性,如不能有效降低牙周组织内炎症因子的表达水平、药物副反应等。因此,设计一种标本兼治的治疗方案对牙周炎的治疗具有至关重要的意义。近年来,随着人们对miRNA认识的不断深入,越来越多的学者发现miRNA的异常表达可出现在众多疾病的发生发展中。因此,基于miRNA的基因治疗已成为一种具有广泛应用前景的生物医学疗法。miRNA是一段长度为18-25个核苷酸组成的非编码RNA,它通过靶向3’-UTR区域中带有部分互补序列的目标mRNA,达到抑制mRNA翻译或者降解mRNA的目的。在miRNA下调或缺失所引发的疾病中,通过递送miRNA至靶组织或靶细胞中以恢复miRNA的表达水平,发挥与内源miRNA相同的生物学功能,可达到缓解疾病发生发展的目的。在类风湿性关节炎中,miR-23b表达量下降,递送miR-23b使其靶向TAB2/3能够调控其下游的NF-κB信号通路,最终降低炎症因子如IL-17表达水平,达到治疗类风湿性关节炎的目的。牙周炎的发病机理与类风湿性关节炎相似,因此,我们推测miR-23b可能在牙周炎中具有同样的效果。由于miRNA极其不稳定、自身带有负电荷并且易被肾脏清除等缺点,使其不容易进入到细胞中发挥功能,因此miRNA必须依赖高效的基因递送体系才能实现作为基因药物的疗效,发挥其生物学功能。目前,常用的基因传输载体主要分为病毒类载体和非病毒类载体。与病毒类载体相比,非病毒类载体具有更好的生物安全性及生产简单的优势。其中,聚酰胺-胺（polyamidoamine,PAMAM）是一种理想的载体,主要是由于PAMAM表面具有高密度的正电荷,能够有效组装核酸分子,同时PAMAM中的三级胺结构能够通过“质子海绵效应”使纳米复合物从内涵体快速逃逸出来。然而,其转染过程仍存在细胞毒性大、转染效率低的缺点。前期研究中,课题组利用氟化修饰手段对PAMAM表面进行修饰,在降低PAMAM表面正电荷密度的同时,增加了载体与细胞膜的亲和力,极大提升了基因转染效率。本研究中,我们以前期构建的氟化修饰PAMAM为载体,实现miR-23b的高效、精准递送,旨在构建一条牙周炎精准基因治疗技术路线。具体研究内容如下:1、在第二章中,我们旨在探讨miR-23b在牙周炎中的表达水平变化及其在牙周炎导致的骨缺损中对成骨方面的影响。从临床牙周炎患者及大鼠牙周炎模型中提取牙龈组织,qPCR技术检测发现牙周炎病患者及大鼠牙周炎模型中牙龈组织内miR-23b的含量明显降低,表明miR-23b在牙周炎进程中发挥关键的作用。以氟化修饰PAMAM为载体,介导miR-23b递送至成骨细胞,通过ALP活性检测试剂盒、ALP染色、ARS染色、qPCR及Western blotting等技术检测成骨细胞中ALP、矿化结节表达量及成骨相关因子（RUNX2、ALP、OCN、OPN）的表达水平。结果表明,miR-23b可显着提高成骨细胞中成骨相关因子（RUNX2、ALP、OCN、OPN）的表达水平,在早期成骨（ALP染色）和晚期成骨（ARS染色）中均有一定的促进作用,说明miR-23b能够促进成骨细胞分化,为改善骨重塑方面提供了良好的技术支撑。2、在第三章中,我们旨在探讨体外条件下miR-23b的抗炎效果及相关机制研究。以氟化修饰PAMAM为载体,递送miR-23b至LPS刺激RAW264.7细胞的炎症细胞模型后,通过qPCR、ELISA及Western blotting等技术检测相关炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β的表达变化及p-p65蛋白、p65蛋白表达水平变化。结果表明,miR-23b能够通过靶向TAB2、TAB3以及IKK-α,抑制p65蛋白的磷酸化,调控NF-κB信号通路,有效抑制体外条件下细胞炎症因子（TNF-α、IL-6、IL-1β）的产生,为牙周炎的抗炎治疗奠定了一定的研究基础。3、在第四章中,我们旨在探讨体内条件下miR-23b的抗炎效果及相关机制研究。通过结扎丝环绕大鼠上颌第一磨牙一圈的方法建立牙周炎模型,以氟化修饰PAMAM为载体,递送miR-23b至大鼠牙周组织后,通过临床指标检测、micro-CT、qPCR及免疫组化等技术检测牙槽骨的吸收程度、相关炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β的表达变化,并通过H&E染色评价纳米复合物的生物安全性。结果表明,miR-23b递送能有效缓解牙周组织内的炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β表达、抑制炎症细胞浸润程度、缓解牙周炎所引起的牙槽骨吸收,实现牙周炎的有效治疗。综上所述,本研究发现了 miR-23b在牙周炎牙龈组织中表达异常,系统探究miR-23b在牙周炎发生发展中的调控机制,为基于miRNA的牙周炎精准基因治疗策略提供理论依据。同时,我们以氟化修饰PAMAM为载体,实现miR-23b的高效、精准递送,探究miR-23b递送后对成骨及炎症抑制的效果与机制。本研究的开展,为深入揭示miR-23b在牙周炎中的作用机制提供新的思路,同时也为开发高效miRNA药物递送体系提供重要的理论支撑和技术指导。
穆佳琦[4]（2021）在《新城疫病毒强毒株感染鸡巨噬细胞过程中关键宿主miRNA的筛选及功能分析》文中进行了进一步梳理新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）强毒株感染导致的新城疫（Newcastle Disease,ND）是一种急性、高度接触性传染病,其对易感禽的致死率高达100%,被世界动物卫生组织（Office International Des Epizooties,OIE）列为法定报告动物疫病,也属于我国农业农村部和海关总署动物疫病名录中的一类动物疫病。然而NDV弱毒株不会导致禽类的致死性感染,只会给机体造成相对轻微的呼吸系统临诊表现或者无临床症状的肠道感染,因此常常被用作疫苗来进行免疫接种。虽能在临床上观察到NDV强、弱毒株感染机体或细胞后引起的不同程度宿主免疫应答反应、机体病理损伤、细胞因子风暴等现象,但是NDV强、弱毒感染宿主过程中的具体差异机理尚未完全揭露。microRNA（miRNA）是广泛存在于动、植物体中的一类内源性长度为18～25nt的单链非编码小RNA,通过碱基互补等方式来降解或干扰靶基因mRNA转录进而调控目的基因表达。在病毒与宿主的博弈中,已证实多种miRNA可通过不同机制在不同毒力病毒感染复制差异中行使重要功能。然而,miRNA在NDV强、弱毒感染宿主过程中是否发挥重要功能尚属空白。因此,筛选出NDV强、弱毒感染宿主细胞过程中关键差异宿主miRNA并进行功能分析,有利于阐明NDV强、弱毒感染宿主过程中的差异机制,也可为NDV强毒感染致病机理的揭示奠定理论基础,亦可为从miRNA角度防控ND提供新思路。本研究分为以下三个部分:1.新城疫病毒强、弱毒感染鸡巨噬细胞过程中差异miRNA表达谱的分析本研究首先分别用MOI=0.1、2和5三种不同感染剂量的NDV强、弱毒代表株（基因Ⅶ型强毒株NA-1和基因Ⅱ型弱毒疫苗株LaSota）感染鸡巨噬细胞,于感染后6、12、24、48和72小时分别收取感染细胞上清和细胞RNA,利用q PCR、病毒滴度测定和免疫荧光实验等技术手段测定病毒增殖和细胞病变情况来评价体外病毒感染细胞模型的建立情况。结果显示:MOI=2的感染剂量能让NDV强、弱毒均在细胞内有效增殖,然而当感染剂量MOI=0.1和5时,细胞出现病变时间较晚或较早以及细胞病变程度较轻或较重,因此本研究选用MOI=2的感染剂量感染鸡巨噬细胞24、48小时后的细胞样品进行高通量测序。高通量数据显示:相比于弱毒LaSota感染组,强毒NA-1感染24 h和48 h后,分别有130（上调87,下调43）个和196（上调68,下调128）个差异表达的miRNA,并且有33个miRNA持续性差异表达;从中随机选取10个miRNA进行qPCR验证,结果与高通量测序结果基本一致。2.新城疫病毒强毒感染鸡巨噬细胞过程中关键miRNA的筛选及其靶基因的验证为探索NDV强、弱毒感染过程中差异表达miRNA功能,以miRNA的靶基因是否参与病毒感染或免疫过程作为筛选条件,利用生物学软件筛选NDV强、弱毒感染过程中关键miRNA并对其靶基因进行验证。结果显示:从前期得到的强、弱毒感染后持续差异表达的33个miRNA中共筛选出12个与病毒感染或免疫相关的miRNA;进一步研究发现,与未感染组相比,只有gga-novel-217-5p及其靶基因TAK1结合蛋白1（TAB1）的表达水平在NDV强毒感染后明显改变,而弱毒感染组未观察到此现象;与此同时,与转染gga-novel-217-5p无关序列相比,gga-novel-217-5p抑制剂的转染显着上调靶基因TAB1的表达水平,模拟物的转染显着下调TAB1的表达水平,而gga-novel-217-5p突变体（第2～10位种子区关键序列突变）的转染不引起TAB1表达水平的变化,证实gganovel-217-5p与TAB1确实存在靶向关系。综上所述,本章成功筛选到NDV强、弱毒感染过程中的关键的miRNA gga-novel-217-5p与其靶基因TAB1,预示gga-novel-217-5p/TAB1轴在NDV强毒感染鸡巨噬细胞过程中行使重要功能。3.新城疫病毒强毒感染鸡巨噬细胞过程中关键miRNA的功能分析研究表明TAB1是NF-κB信号通路中至关重要的上游介质,通过一系列级联反应触发NF-κB活化,从而调控下游细胞因子的表达,本章旨在探究gganovel-217-5p/TAB1轴在NDV强毒感染过程中的功能及其作用方式。从NDV强、弱毒感染鸡巨噬细胞后差异表达的细胞因子水平入手,gga-novel-217-5p抑制剂的转染能显着上调鸡巨噬细胞中细胞因子IL-1β、iNOS、TNF-α和IFN-α的表达水平。进一步的实验结果证实,gga-novel-217-5p/TAB1轴通过调控NF-κB的抑制物IκB-α磷酸化水平,进而激活NF-κB信号通路。综上所述,本章证实了NDV强毒感染鸡巨噬细胞细胞后通过下调宿主gga-novel-217-5p的表达,导致其靶基因TAB1的表达水平上调,进而促进IκB-α磷酸化来激活NF-κB信号通路,最终导致更高水平的细胞因子表达。
朱紫瑜,王冠,庄英萍[5]（2021）在《大规模哺乳动物细胞培养工程的现状与展望》文中指出近年来,随着对疫苗和治疗性蛋白类药物等多种生物制品需求量增加以及产品质量要求的提高,细胞大规模培养技术也不断发展。为了增加产量、降低成本,生产更安全有效的药物,大规模细胞培养过程的开发至关重要,而动物细胞的工艺优化和规模放大具有挑战性。提高细胞培养工艺表达量、扩大细胞培养生产规模、保证表达抗体质量稳定成为目前大规模细胞培养过程中亟待解决的问题,迫切需要进一步研究和开发细胞培养工艺。本文围绕以上问题,系统综述了通过优良细胞株的构建、培养基设计与无血清培养基的开发、基于过程分析技术（PAT）培养工艺的优化与放大,建立合适的大规模培养体系,实现细胞的高密度培养和产物的高效表达。与此同时,细胞培养过程中产生的多源异质数据基本依靠低效的人工处理与判断,缺乏深层次的全局因素考虑。为此,未来希望通过人工智能深度挖掘数据之间的关系并指导细胞培养过程工艺优化与放大,实现真正的智能生物制造。
王守伟,孙宝国,李石磊,李雨爽,孙金沅,李莹莹[6]（2021）在《生物培育肉发展现状及战略思考》文中进行了进一步梳理随着全球生物培育肉及相关产业的快速发展,全方位分析该领域面临的问题及瓶颈,借鉴欧美发达国家经验,为我国未来食品发展指明方向具有重要意义。本文从缓解养殖业压力、保障肉类供应安全、提升食品科技发展水平方面阐述我国发展生物培育肉的必要性。从全球生物培育肉产业的发展、资本投入、监管和技术发展角度梳理欧美、日本发达国家的现状和趋势及可借鉴的经验,同时分析我国在该领域的发展和面临的学科融合、产业环境、监管法规、关键技术不完善等问题,提出发展我国生物培育肉的发展规划和攻克关键技术、培育优势企业、建立监管体系的对策建议。
谢良志[7]（2021）在《生物药产业蓬勃发展早期的奠基性系统开发——缅怀王义翘教授的开创性研究和成就》文中研究表明以单克隆抗体药物及重组蛋白为代表的生物药在肿瘤、自身免疫性疾病、病毒感染等多个重大疾病的预防及治疗领域发挥了重要作用,已成为全球制药行业的主攻方向之一。动物细胞培养技术和工艺放大是生物药产业化的核心技术,存在巨大挑战,在20世纪90年代初仍被认为是一个很难破解的"黑箱",是制约行业发展的关键瓶颈之一。自60年代开始,王义翘教授领导的实验室和美国麻省理工学院生物技术工程中心（Biotechnology Process Engineering Center, MIT-BPEC）对动物细胞培养技术进行了全方位系统的研究和探索,涵盖了从贴壁细胞的微载体培养到CHO细胞的无血清悬浮培养,从批次培养、连续培养、灌流培养到高密度流加培养过程中的关键技术和工程问题,包括细胞代谢有毒副产品的控制、高密度流加培养工艺的过程控制、蛋白质糖基化多样性质量分析和控制、搅拌和鼓泡导致的细胞损伤等关键瓶颈。王义翘教授团队数十年的前瞻性研究和多学科交叉合作在动物细胞代谢调控、数十种营养物质的化学计量平衡配比、无血清培养基的开发、有毒代谢副产物的控制、大分子生物药的糖基化多样性分析和质量控制、生物反应器的设计和工艺放大等一系列关键技术的研发方面取得了突破性的前沿成果,为90年代后高密度流加培养工艺在生物技术产品大规模商业化生产中的广泛应用奠定了坚实的基础,为推动全球生物制药技术和产品的蓬勃发展做出了不可磨灭的伟大贡献。本文作者结合90年代初期在王义翘教授实验室学习期间的亲身经历,试图从自己熟悉的专业领域总结王教授团队在生物药产业化起步阶段针对动物细胞培养的关键技术攻关方面取得的重要成果,从一个侧面概述王教授1965—1995三十年间所开展的前沿性研究对全球生物制药此后近30年来的蓬勃发展所做出的奠基性工作和杰出贡献。谨以此文致敬和缅怀恩师王义翘教授!
苏志国[8]（2021）在《王义翘先生和BPEC对生物化学工程发展的巨大作用》文中进行了进一步梳理王义翘先生是美国麻省理工学院生物技术过程工程中心（BPEC）的创始人。在他的领导下,BPEC通过协同创新和生物化学工程（生化工程）的前沿探索,取得了显着的成就。（1）引领了生化工程进入生物制药新时代。与最初的生化工程概念相比,BPEC的重点发生了很大的转变,目标分子不再局限于抗生素、化学品和燃料等小分子,而是拓展到抗体、细胞因子、血液蛋白质和疫苗抗原等生物大分子,解决这些生物药品大规模生产所遇到的工程科学问题。（2）开启了动物细胞培养工程。当细胞生物学家忙于通过增加滚瓶的数量来扩大生产时,BPEC通过流体力学和传质分析,最大限度地减少剪切应力和扩散限制,成功地实现了动物细胞的生物反应器培养,设计出大规模培养的最佳培养基组成和添加策略,获得了蛋白质翻译后修饰随时间变化的规律,提高了动物细胞反应器的目标蛋白质产量。（3）创新了高质量生物大分子的分离纯化技术,建立了亲和膜、反胶束、电辅助分离等新方法。利用准弹性光散射技术,研究了蛋白质的再折叠和聚集机制,发明了聚乙二醇稳定再折叠中间体的新技术。（4）建立了生化工程协同创新和人才培养体系,促进了BPEC成员之间密切合作和与生物技术企业的密切合作,吸引和培养了众多在生化工程领域有建树的年轻人才。本文还对王义翘先生和BPEC对我国生化工程发展的启示和借鉴做了简要的评述。
方佳成[9]（2021）在《泛实体瘤相关抗原图谱的构建及其在抗体偶联药物和嵌合抗原受体T细胞上的应用》文中研究说明癌症已经成为危害人类健康的主要疾病,据世卫组织国际癌症研究机构数据显示,2020年,全球男性和女性将合计出现约1930万和1000万的新发病例和癌症死亡病例,其中的1800万例和930万例将来自实体瘤。然而,对肿瘤治疗的系统评估数据显示,欧洲药物管理局在2009-2013年度批准的大多数抗癌药物未能对患者的整体生命质量产生重大改善。因此,需要继续提高抗肿瘤药物的临床疗效。抗体偶联药物（Antibody-Drug Conjugates,ADC）和嵌合抗原受体（Chimeric Antigen Receptor,CAR）T细胞疗法是发展迅速的肿瘤靶向治疗技术,它们通过特异性识别在恶性细胞和正常组织细胞之间差异过表达的靶标抗原,达到辨识肿瘤和消融肿瘤的目的。ADC和CAR-T实现安全性与有效性的关键,在于其所识别的靶标抗原是否具备足够的肿瘤特异性。因而,鉴别出理想的靶标抗原至关重要。理想的靶标抗原由恶性细胞特异性表达,然而肿瘤特异性抗原屈指可数。肿瘤相关抗原在肿瘤细胞上表达升高,在正常细胞上限制性表达,这一特性使得它们亦能够作为有效定位恶性肿瘤的靶标分子。目的:以发现理想的肿瘤相关抗原为出发点,着力于打造肿瘤相关抗原发现新平台,构建全面的泛实体瘤肿瘤相关抗原图谱,为癌症研究人员和广泛的科学与医药界科研工作者提供研究便利。方法:1.使用经统一处理的TCGA和GTEx的RNA序列数据,对19种类型实体瘤中的20242个HUGO基因进行差异分析;通过将阈值设置为Benjamini-Hochberg adjusted p值为0.01,log2Fold Change为1.0,保留那些在肿瘤细胞群中显着差异表达的HUGO基因;结合蛋白质亚细胞定位信息,排除不具备胞外结构域的蛋白;使用集成了GTEx,HPA和FANTOM5的m RNA表达信息和HPA和HPM的蛋白质丰度信息的数据集,获取在正常组织中受限表达的蛋白分子;使用公开的Blood Spot平台,发现那些在骨髓Lin-CD34+CD38-CD90+CD45RA-HSCs和Lin-CD34+CD38-CD90-45RA-MPPs中限制性表达的蛋白分子。2.将RNA测序的读段计数数据转换为TPM格式,并将每个基因在其配对适应症和正常组织中的TPM值作为差异表达分析的输入数据。采用非参数Mann-Whitney U检验分析,计算并绘制每个候选靶标分子在特定适应症中的表达相比其在各个人体正常组织中的表达的差异表达谱。3.提取并整理TCGA中泛癌表型数据中的癌组织学分级,病理分级和TNM分期信息;通过挖掘MC3（“多中心多癌种突变识别”）TCGA MAF（“突变注释格式”）数据,确定靶标基因的非沉默体细胞突变（SNP和INDEL）。结合m RNA表达数据,汇编用于评价靶标基因的异质表达模式的综合数据集。4.从TCGA下载并提取靶标基因组变异数据,从Onco KB收集致癌或功能性基因组变异信息,注释并统计靶标基因的变异类型及发生频率,确定在临床上有应用价值的携带特异性驱动变异的功能性靶标。5.通过杂交瘤技术制备CDH17特异性单克隆抗体,进而运用流式细胞术、过表达共定位分析、结合亲和力检测、抗体测序和可变区序列进化关系分析等,多重表征抗体的各项指标。通过偶联mc-Val Cit PABC-MMAE,制备CDH17靶向型ADC。结合体外杀伤实验与细胞内化评估,完成效应分子的初筛验证。6.通过构建KM12SM和COLO205结肠癌细胞系CDX动物模型,综合评估chi2E21-MMAE和chi2F12-MMAE的体内抗肿瘤活性。通过制备和人鼠CDH17蛋白交叉反应的ADC分子,并对给药的荷瘤小鼠的心/肺/肝/肾/结肠/直肠/脾脏进行HE染色,评估CDH17靶向型ADC对小鼠的组织毒性。7.通过慢病毒载体感染CD3+T细胞,制备LYPD3靶向型CAR-T细胞。通过对CAR-T细胞进行分化检测,确定其向效应细胞持续分化的能力。通过体外细胞杀伤实验和细胞因子分泌检测,研究LYPD3靶向型CAR-T细胞对肿瘤细胞的的特异性杀伤作用。通过对荷瘤小鼠循环血中的CAR-T细胞进行计数和检测肿瘤组织中的T细胞浸润水平,揭示LYPD3靶向型CAR-T细胞在小鼠体内发挥持久抗肿瘤作用的机制。结果:1.开发专门的算法和汇编整合有泛实体瘤和正常组织的大型转录组、蛋白质组和基因组信息的综合数据集。2.系统地识别肿瘤相关抗原。通过我们的肿瘤相关抗原发现平台,筛选得到75个潜在的肿瘤相关抗原分子。特别是BACE2、CDH17、CELSR1、CELSR2、COL17A1、COL23A1、CRIM1、DSC3、GPR87、LYPD3、MUC17、NOX1、PTPRN2、SCTR、TRPM8、VCAM1等分子值得做进一步的临床前研究。3.基于CDH17蛋白定向开发的ADC分子可以在体内显着消融KM12SM和COLO205异种移植瘤,并对高表达CDH17蛋白的结肠癌病人来源的异种移植瘤表现出一定的肿瘤抑制效果。chi2F12-MMAE在体外对高药敏度的COLO205显示高水平的细胞毒性（IC50=60.9p M）,chi2E21-MMAE和chi1A13-MMAE对COLO205的抑瘤水平相当（IC50:925.8 p M vs.998.3 p M）。两次单药静脉注射（Q2W）chi2E21-MMAE或chi2F12-MMAE,均能以剂量依赖性的方式抑制KM12SM在小鼠体内的生长,但无法完全清除肿瘤。在COLO205 CDX模型中,按同样的给药方式静注chi2F12-MMAE,1.5 mg/kg剂量的第一针治疗可以起到平缓异种移植肿瘤增长的效果,且两周后的第二针治疗亦能继续起到溶瘤效果;3 mg/kg的中剂量治疗组有部分小鼠的肿瘤在后期出现反弹;6 mg/kg的高剂量治疗可以根治异种移植瘤。4.CDH17靶向型ADC在小鼠体内具有相对可控的组织毒性。制备了能和人鼠CDH17蛋白交叉反应的ADC分子677-MMAE,观察到在677-MMAE给药组小鼠的结直肠的局部组织中有炎症反应,聚集了大量的淋巴细胞;但在其它组织中没有出现炎症反应。此外,在观察期内,小鼠对chi2E21-MMAE、chi2F12-MMAE或677-MMAE的体内耐受良好,用药期间未有小鼠死亡个例出现,亦没有观察到10%以上的减重。5.LYPD3靶向型CAR-T细胞能够在小鼠体内对PC9异种移植肿瘤发挥持久的抗肿瘤作用。且小鼠对LYPD3-CAR-T的耐受良好,在观察期内未有小鼠死亡个例出现,亦没有观察到10%以上的减重。进一步调查发现,LYPD3-CAR-T细胞不仅在小鼠外周血中大量存在,还在高响应LYPD3-CAR-T治疗的PC9异种移植瘤组织中大量浸润。此外,LYPD3-CAR-T治疗组的小鼠脾脏内出现大量CD3+T细胞,但在对照组中却没有。CAR-T细胞的记忆表型对于激发持久的免疫应答至关重要。数据显示,LYPD3-CAR-T细胞在输注前,其中的Tn/Tscm细胞和Tcm细胞比例分别高达52.4%和21.7%,具有良好的向效应细胞分化的潜能。结论:通过开发肿瘤相关抗原识别算法和整合来自19种实体瘤和正常组织的大型转录组、蛋白质组和基因组数据,完成了泛实体瘤相关抗原的探索。通过考察CDH17靶向型ADC和LYPD3靶向型CAR-T细胞在模型小鼠中的抗肿瘤活性,例证了CDH17和LYPD3蛋白分别作为ADC和CAR-T靶标开发的可行性。
王雪[10]（2021）在《不同培养体系对人脐带间充质干细胞增殖及向神经干细胞分化的影响》文中研究表明
二、无血清细胞培养研究取得重大突破（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、无血清细胞培养研究取得重大突破（论文提纲范文）
（1）猪圆环病毒2型悬浮培养及灭活疫苗工艺优化（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 猪圆环病毒概述 |
| 1.1.1 病毒生物学特性 |
| 1.1.2 病毒基因结构 |
| 1.2 流行病学研究 |
| 1.2.1 猪圆环病毒病发病史 |
| 1.2.2 猪圆环病毒易感动物 |
| 1.2.3 猪圆环病毒传播途径 |
| 1.3 疫苗种类 |
| 1.3.1 灭活疫苗 |
| 1.3.2 弱毒活疫苗 |
| 1.3.3 亚单位疫苗 |
| 1.3.4 其它疫苗 |
| 1.4 生物反应器种类和发展 |
| 1.5 悬浮培养技术的应用 |
| 1.6 悬浮培养的细胞系 |
| 1.6.1 幼仓鼠肾细胞 |
| 1.6.2 中国仓鼠卵巢细胞 |
| 1.6.3 非洲绿猴肾细胞 |
| 1.6.4 犬肾细胞 |
| 1.6.5人胚胎肾细胞293 |
| 1.6.6 猪肾细胞 |
| 1.6.7 其它细胞 |
| 1.7 产业化背景-为何要做悬浮培养 |
| 1.7.1 行业要求和标准 |
| 1.7.2 行业发展趋势 |
| 1.8 研究的目的和意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 细胞和毒种 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.1.4 试验动物 |
| 2.1.5 试验动物管理 |
| 2.1.6 病毒载量测定操作规范 |
| 2.1.7 培养液配置 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 PK15细胞培养技术全悬浮培养研究 |
| 2.2.2 猪圆环病毒2型(LG株)悬浮培养参数研究 |
| 2.2.3 猪圆环病毒2型(LG株)抗原纯化工艺的研究 |
| 2.2.4 猪圆环病毒2型(LG株)抗原灭活剂的优化 |
| 2.2.5 猪圆环病毒2型(LG株)实验室试制的研究 |
| 2.2.6 猪圆环病毒2型(LG株)安全性试验研究 |
| 2.2.7 猪圆环病毒2型(LG株)灭活疫苗效力性试验研究 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 PK15细胞培养技术全悬浮培养研究 |
| 3.1.1 初始接种细胞密度的优化 |
| 3.1.2 溶氧(DO)参数的确定 |
| 3.1.3 pH参数的确定 |
| 3.1.4 搅拌转速选择 |
| 3.1.5 补液方式的优化 |
| 3.2 猪圆环病毒2型(LG株)悬浮培养参数研究 |
| 3.2.1 接毒细胞浓度的优化 |
| 3.2.2 接毒剂量的优化 |
| 3.2.3 收毒时间的优化 |
| 3.2.4 全悬浮和转瓶培养方法的比较 |
| 3.3 猪圆环病毒2型(LG株)抗原纯化工艺的研究 |
| 3.3.1 细胞破碎 |
| 3.3.2 抗原液的纯化 |
| 3.4 猪圆环病毒2型(LG株)抗原灭活剂的优化 |
| 3.4.1 BEI灭活猪圆环病毒2型(LG株)抗原试验结果 |
| 3.4.2 两种灭活剂灭活效果结果 |
| 3.4.3 安全性试验 |
| 3.4.4 免疫效力试验 |
| 3.5 猪圆环病毒2型(LG株)实验室试制研究 |
| 3.5.1 抗原的生产及半成品检验结果 |
| 3.5.2 成品疫苗检验结果 |
| 3.6 猪圆环病毒2型(LG株)灭活疫苗安全性试验研究 |
| 3.6.1 单剂量免疫仔猪试验 |
| 3.6.2 单剂量重复免疫仔猪试验 |
| 3.6.3 大剂量免疫仔猪试验 |
| 3.6.4 母猪免疫安全性试验 |
| 3.7 猪圆环病毒2型(LG株)灭活疫苗效力性试验研究 |
| 3.7.1 疫苗免疫攻毒效检试验猪增重率评价试验 |
| 3.7.2 运用荧光定量PCR法评价疫苗免疫效力 |
| 3.7.3 免疫攻毒后病毒排毒规律及组织病毒载量测定 |
| 3.7.4 疫苗免疫持续期与抗体消长规律测定试验 |
| 3.7.5 最小免疫剂量试验及血清抗体与攻毒保护相关性试验 |
| 3.7.6 猪圆环病毒灭活疫苗(LG株)保存期试验 |
| 3.7.7 猪圆环病毒灭活疫苗(LG株)母猪被动免疫试验 |
| 4 讨论 |
| 4.1 PK15细胞培养技术全悬浮培养研究 |
| 4.2 猪圆环病毒2型(LG株)悬浮培养参数研究 |
| 4.3 猪圆环病毒2型(LG株)抗原纯化工艺的研究 |
| 4.3.1 细胞破碎 |
| 4.3.2 抗原液的纯化 |
| 4.4 猪圆环病毒2型(LG株)抗原灭活剂的优化 |
| 4.5 猪圆环病毒2型(LG株)实验室试制研究 |
| 4.6 猪圆环病毒2型(LG株)灭活疫苗安全性试验研究 |
| 4.7 猪圆环病毒2型(LG株)灭活疫苗效力性试验研究 |
| 4.7.1 疫苗免疫攻毒效检试验猪增重率评价试验 |
| 4.7.2 运用荧光定量PCR法评价疫苗免疫效力 |
| 4.7.3 免疫攻毒后病毒排毒规律及组织病毒载量测定 |
| 4.7.4 疫苗免疫持续期与抗体消长规律测定试验 |
| 4.7.5 最小免疫剂量试验及血清抗体与攻毒保护相关性试验 |
| 4.7.6 猪圆环病毒2型灭活疫苗(LG株)保存期试验 |
| 4.7.7 猪圆环病毒2型灭活疫苗(LG株)母猪被动免疫试验 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 缩略词表 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 |
（2）培育肉生产技术发展研究（论文提纲范文）
| 一、前言 |
| 二、培育肉生产的关键技术 |
| （一）种子细胞高效获取技术 |
| （二）细胞冻存技术 |
| （三）体外扩增技术 |
| （四）定向诱导分化技术 |
| （五）肌肉组织三维塑形技术 |
| （六）食品化处理技术 |
| 三、国际培育肉行业发展态势 |
| （一）科研机构领跑行业 |
| （二）初创企业发展迅速 |
| 四、我国培育肉技术的发展现状与面临问题 |
| （一）培育肉技术的发展现状 |
| 1. 培养肉相关研究机构和企业 |
| 2. 培育肉相关专利及产品 |
| （二）培育肉技术发展面临的问题 |
| 1. 行业起步稍晚，研究基础待补强 |
| 2. 研发思路单一，多学科合作欠缺 |
| 3. 生产装备研发能力不足，制约产业化进程 |
| 五、对策建议 |
| （一）加大基础研发投入，构建培育肉核心技术体系 |
| （二）支持跨行业交流，构建跨学科研究联盟 |
| （三）增强校企合作力度，加快培育肉成果转化 |
| （四）关注消费者需求，开发特色培育肉产品 |
（3）氟化修饰聚酰胺-胺载体介导miR-23b递送治疗牙周炎的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 牙周炎研究背景 |
| 1.1.1 牙周炎的发病机制 |
| 1.1.2 成骨细胞与牙周炎的相关性 |
| 1.1.3 牙周炎的治疗手段 |
| 1.2 基因治疗的概念和发展历史 |
| 1.2.1 基于miRNA基因治疗的策略 |
| 1.2.2 miR-23b在不同疾病中的调控及生物学作用 |
| 1.3 基因传输载体现状 |
| 1.3.1 小核酸转染的瓶颈 |
| 1.3.2 基因传输载体 |
| 1.3.3 聚酰胺-胺(PAMAM)载体 |
| 1.4 本论文的立题依据及研究内容 |
| 第2章 FP/miR-23b纳米复合物对成骨分化的研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与仪器 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.2.3 实验中主要试剂的配制 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 样本采集标准 |
| 2.3.2 口腔样本采集 |
| 2.3.3 临床样本中miR-23b的表达水平 |
| 2.3.4 大鼠牙周炎模型建立 |
| 2.3.5 大鼠牙周炎模型样本中miR-23b的表达水平 |
| 2.3.6 细胞提取与培养 |
| 2.3.7 氟化修饰聚酰胺-胺(FP)的合成 |
| 2.3.8 载体细胞毒性评价 |
| 2.3.9 FP体外转染实验 |
| 2.3.10 FP/miR-23b纳米复合物内涵体逃逸实验 |
| 2.3.11 FP/miR-23b纳米复合物胞吞的作用机制分析 |
| 2.3.12 碱性磷酸酶(ALP)活性检测实验 |
| 2.3.13 碱性磷酸酶(ALP)染色实验 |
| 2.3.14 茜素红(ARS)染色实验 |
| 2.3.15 Real-time qPCR检测成骨相关基因表达水平 |
| 2.3.16 Western Blot检测成骨细胞相关标志性蛋白表达水平 |
| 2.3.17 统计学分析 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 临床样本中miR-23b的表达水平变化 |
| 2.4.2 大鼠牙周炎模型中miR-23b的表达水平变化 |
| 2.4.3 FP载体的作用浓度筛选 |
| 2.4.4 FP/miR-23b纳米复合物的体外最佳转染效率分析 |
| 2.4.5 FP/miR-23b纳米复合物内涵体逃逸能力评价 |
| 2.4.6 FP/miR-23b纳米复合物细胞胞吞机制分析 |
| 2.4.7 FP/miR-23b纳米复合物作用后ALP的表达水平分析 |
| 2.4.8 FP/miR-23b纳米复合物对BMSCs成骨分化能力的评价 |
| 2.4.9 FP/miR-23b纳米复合物调控成骨相关基因表达水平分析 |
| 2.5 本章小结 |
| 第3章 FP/miR-23b纳米复合物的体外抗炎效果与机制分析 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料及仪器 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 FP的合成 |
| 3.3.2 FP粒径电位及形态特征 |
| 3.3.3 Real-time qPCR检测炎症因子的表达水平 |
| 3.3.4 ELISA检测相关炎症因子表达水平 |
| 3.3.5 Western blotting检测FP/miR-23b体外抗炎相关靶点蛋白表达水平 |
| 3.3.6 统计学分析 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 FP/miR-23b纳米复合物的表征 |
| 3.4.2 FP/miR-23b纳米复合物胞内抗炎效果评价 |
| 3.4.3 FP/miR-23b纳米复合物抗炎机制研究 |
| 3.5 本章小结 |
| 第4章 FP/miR-23b纳米复合物治疗大鼠牙周炎的研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料及仪器 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 实验仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 大鼠牙周炎模型建立 |
| 4.3.2 临床指标检测 |
| 4.3.3 影像学分析 |
| 4.3.4 Real-time qPCR检测相关炎症因子表达水平 |
| 4.3.5 H&E染色观察牙周组织内炎症浸润程度 |
| 4.3.6 免疫组化(IHC)检测牙周组织内炎症因子表达水平 |
| 4.3.7 FP/miR-23b纳米复合物生物相容性评价 |
| 4.3.8 统计学分析 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 大鼠牙周炎模型建立及临床指标变化 |
| 4.4.2 micro-CT分析牙槽骨吸收情况 |
| 4.4.3 大鼠牙周组织内炎症因子的表达水平 |
| 4.4.4 大鼠牙周组织内炎症细胞浸润分析 |
| 4.4.5 FP/miR-23b纳米复合物的生物相容性评价 |
| 4.5 本章小结 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在读期间科研成果 |
| 致谢 |
（4）新城疫病毒强毒株感染鸡巨噬细胞过程中关键宿主miRNA的筛选及功能分析（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 新城疫与新城疫病毒 |
| 1.1 新城疫 |
| 1.2 新城疫病毒 |
| 1.3 新城疫病毒的复制及致病性 |
| 第二章 microRNA概述 |
| 2.1 miRNA的基本特征 |
| 2.2 miRNA与动物病毒 |
| 2.3 miRNA与 NDV |
| 第二篇 研究内容 |
| 第一章 新城疫病毒强、弱毒感染鸡巨噬细胞过程中差异miRNA表达谱的分析 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 第二章 新城疫病毒强毒感染鸡巨噬细胞过程中关键miRNA的筛选及其靶基因的验证 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 新城疫病毒强毒感染鸡巨噬细胞过程中关键miRNA的功能分析 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 导师简介 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（5）大规模哺乳动物细胞培养工程的现状与展望（论文提纲范文）
| 1 优良细胞株的构建 |
| 1.1 单克隆抗体生产过程中的“产品质量” |
| 1.2 单克隆抗体生产过程中“产品产量” |
| 2 培养环境 |
| 2.1 生长培养基 |
| 2.1.1 基于化学计量模型约束的培养基设计 |
| 2.1.2 代谢废物的脱除 |
| 2.1.3 无血清培养基的开发 |
| 2.2 以过程分析技术（PAT）为核心的大规模细胞培养过程工艺优化与放大 |
| 2.2.1 在线检测（on-line) |
| 2.2.2 近线检测（at-line) |
| 2.2.3 过程数据统计与分析 |
| 2.3 生物反应器中的流场环境 |
| 2.3.1 微载体技术的应用 |
| 2.3.2 微载体浓度对细胞生长的影响 |
| 2.3.3 流体剪切对细胞生长的影响 |
| 3 未来大规模细胞培养平台：从“多尺度”到“智能化” |
| 3.1 基于多尺度参数相关分析的细胞培养过程优化与放大 |
| 3.2 大规模细胞培养过程智能制造 |
| 4 总结与展望 |
（6）生物培育肉发展现状及战略思考（论文提纲范文）
| 1 发展生物培育肉的战略意义分析 |
| 1.1 缓解传统养殖业的压力 |
| 1.2 保障肉类供应安全 |
| 1.3 提升科技发展水平 |
| 2 全球生物培育肉的现状和趋势 |
| 2.1 产业发展 |
| 2.2 资本投入 |
| 2.3 监管 |
| 2.4 技术发展 |
| 3 我国生物培育肉的现状及问题 |
| 3.1 产业发展现状 |
| 3.2 学科间的协同和产学研融合亟需加强 |
| 3.3 产业环境有待优化 |
| 3.4 监管框架尚未搭建，法律法规体系尚未布局 |
| 3.5 关键技术尚待突破 |
| 3.5.1 基础科学研究仍需积累 |
| 3.5.2 工程技术体系有待开发 |
| 3.5.3 亟需攻克极限空间生物培育肉的制造技术 |
| 4 我国发展生物培育肉的战略思考 |
| 4.1 行业规划建议 |
| 4.1.1 总体目标 |
| 4.1.2 五年目标（2021—2025年） |
| 4.1.3 十年目标（2026—2030年） |
| 4.1.4 十五年目标（2031—2035年） |
| 4.2 发展对策建议 |
| 4.2.1 集中优势资源攻克关键技术，预防发达国家形成技术垄断 |
| 4.2.2 扩大投资培育优势企业，推进生物培育肉工业化 |
| 4.2.3 建立产业监管体系，推动生物培育肉市场化 |
（7）生物药产业蓬勃发展早期的奠基性系统开发——缅怀王义翘教授的开创性研究和成就（论文提纲范文）
| 引言：生物药产业蓬勃发展的50年 |
| 1 王义翘教授团队早期开展的基础性研究和开发工作 |
| 2 动物细胞培养过程中有毒副产物的代谢调控研究 |
| 3 动物细胞培养过程中新陈代谢网络分析研究和化学计量模型解析 |
| 4 化学计量平衡控制的动物细胞高密度流加培养工艺开发 |
| 5 动物细胞培养过程中大分子蛋白的糖基化修饰多样性分析和调控 |
| 6 动物细胞培养过程中剪切力对细胞生长和活率的影响研究 |
| 7 细胞培养技术的未来方向和应用前景 |
| 8 总结 |
（8）王义翘先生和BPEC对生物化学工程发展的巨大作用（论文提纲范文）
| 1 引领生物化学工程进入生物制药新时代 |
| 2 开启动物细胞大规模培养工程的研究 |
| 3 激发生物大分子分离纯化工程的创新思维 |
| 4 建立协同创新体系，推动生化工程成果转化和人才培养 |
| 4.1 BPEC是麻省理工学院教授合作创新的平台 |
| 4.2 BPEC与生物技术企业的紧密合作促进成果转化 |
| 4.3 BPEC是世界生化工程杰出人才培养的基地 |
| 5 对我国生物过程科学技术发展的影响和启示 |
| 6 结语 |
（9）泛实体瘤相关抗原图谱的构建及其在抗体偶联药物和嵌合抗原受体T细胞上的应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 抗体偶联药物的知识现状 |
| 引言 |
| 1.1.1 ADC发展简史 |
| 1.1.2 获得监管批准的上市ADC |
| 1.1.3 临床试验中的在研ADC及其靶标图谱 |
| 1.1.4 抗体骨架和靶标的选择 |
| 1.1.5 连接子类型和偶联技术 |
| 1.1.6 有效载荷 |
| 1.1.7 ADC在体内的工作原理 |
| 1.1.8 ADC对难治性癌症的治疗 |
| 1.1.9 ADC的毒性问题 |
| 1.1.10 ADC耐药机制 |
| 1.1.11 未来展望 |
| 1.2 嵌合抗原受体T细胞的知识现状 |
| 引言 |
| 1.2.1 CAR-T发展简史 |
| 1.2.2 CAR-T细胞的工作原理 |
| 1.2.3 CAR和T细胞受体的结构 |
| 1.2.4 获得监管批准的CAR-T |
| 1.2.5 CAR-T细胞疗法的毒性 |
| 1.2.6 未来挑战、机会和应用 |
| 1.3 本课题的研究目标 |
| 第二章 基于多组学构建泛实体瘤相关抗原图谱 |
| 引言 |
| 2.1 数据采集与分析方法 |
| 2.1.1 正常组织转录组和蛋白组的数据采集 |
| 2.1.2 蛋白质亚细胞定位数据的采集与编译 |
| 2.1.3 人体组织器官的重排与映射 |
| 2.1.4 正常组织的表达及其分级 |
| 2.1.5 基因在肿瘤及其癌旁组织之间的差异表达分析 |
| 2.1.6 基因在肿瘤与其他正常组织之间的差异表达分析 |
| 2.1.7 肿瘤组织转录组、基因组和表型数据的编译 |
| 2.1.8 功能相关突变的注释 |
| 2.1.9 预测肿瘤相关抗原的蛋白过表达率 |
| 2.1.10 肿瘤相关抗原与癌细胞功能状态的相关性分析 |
| 2.1.11 基因集富集得分分析 |
| 2.1.12 临床试验的检索策略 |
| 2.1.13 统计分析 |
| 2.2 分析结果 |
| 2.2.1 组装综合数据集并通过算法识别肿瘤相关抗原 |
| 2.2.2 肿瘤相关抗原的表达谱与差异表达谱 |
| 2.2.3 肿瘤相关抗原的异质表达谱 |
| 2.2.4 预测肿瘤相关抗原的蛋白过表达率 |
| 2.2.5 癌症驱动基因变异全景 |
| 2.2.6 候选肿瘤相关抗原的组合评估 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 靶向CDH17 的新型ADC的制备及抗结直肠癌活性研究 |
| 引言 |
| 3.1 实验动物 |
| 3.2 实验仪器及试剂 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 TCGA与 GTEx中 CDH17的m RNA数据的获取与分析 |
| 3.3.2 免疫原的设计与制备 |
| 3.3.3 制备靶向CDH17 的单克隆抗体的免疫方案 |
| 3.3.4 抗体可变区基因测序 |
| 3.3.5 鼠-人嵌合抗体的构建与表达纯化 |
| 3.3.6 抗体结合亲和力的测定 |
| 3.3.7 CDH17 靶向抗体偶联vc MMAE |
| 3.3.8 细胞内吞实验 |
| 3.3.9 细胞膜蛋白的提取 |
| 3.3.10 免疫沉淀 |
| 3.3.11 免疫沉淀产物的银染 |
| 3.3.12 蛋白免疫印迹 |
| 3.3.13 免疫组化 |
| 3.3.14 免疫荧光 |
| 3.3.15 流式细胞实验 |
| 3.3.16 体外细胞毒性实验 |
| 3.3.17 体内抑瘤活性实验 |
| 3.3.18 统计分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 CDH17 在消化道肿瘤和正常组织中的表达 |
| 3.4.2 CDH17 靶向抗体的多重表征 |
| 3.4.3 CDH17 靶向ADC的制备与表征 |
| 3.4.4 CDH17 靶向ADC在体外的抗肿瘤活性 |
| 3.4.5 CDH17 靶向ADC在 KM12SM结肠癌异种移植模型中的抗肿瘤活性 |
| 3.4.6 CDH17 靶向ADC在 COLO205 结肠癌异种移植模型中的抗肿瘤活性 |
| 3.4.7 荷瘤小鼠对CDH17 靶向ADC的耐受性 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 本章小结 |
| 第四章 靶向LYPD3的CAR-T细胞的抗肺腺癌活性研究 |
| 引言 |
| 4.1 实验动物 |
| 4.2 试剂耗材及设备 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 TCGA与 GTEx中 LYPD3 m RNA数据的获取与分析 |
| 4.3.2 抗体人源化 |
| 4.3.3 慢病毒包装 |
| 4.3.4 CD3+T细胞的复苏与激活 |
| 4.3.5 CD3+T细胞慢病毒感染 |
| 4.3.6 CAR-T细胞分化与耗竭的检测 |
| 4.3.7 CAR-T体外细胞杀伤 |
| 4.3.8 CAR-T体内活性实验 |
| 4.3.9 细胞因子的检测 |
| 4.3.10 统计分析 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 LYPD3 蛋白在肿瘤和正常组织中的表达 |
| 4.4.2 LYPD3 靶向的CAR-T细胞的体外抗肿瘤活性 |
| 4.4.3 LYPD3 靶向的CAR-T细胞在PC9 肺腺癌异种移植模型中抗肿瘤活性 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 本章小结 |
| 第五章 全文总结 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间取得的科研成果 |
| 致谢 |
四、无血清细胞培养研究取得重大突破（论文参考文献）
- [1]猪圆环病毒2型悬浮培养及灭活疫苗工艺优化[D]. 宋继军. 东北农业大学, 2021
- [2]培育肉生产技术发展研究[J]. 关欣,周景文,堵国成,陈坚. 中国工程科学, 2021(06)
- [3]氟化修饰聚酰胺-胺载体介导miR-23b递送治疗牙周炎的研究[D]. 王思涵. 吉林大学, 2021(01)
- [4]新城疫病毒强毒株感染鸡巨噬细胞过程中关键宿主miRNA的筛选及功能分析[D]. 穆佳琦. 吉林大学, 2021
- [5]大规模哺乳动物细胞培养工程的现状与展望[J]. 朱紫瑜,王冠,庄英萍. 合成生物学, 2021(04)
- [6]生物培育肉发展现状及战略思考[J]. 王守伟,孙宝国,李石磊,李雨爽,孙金沅,李莹莹. 食品科学, 2021(15)
- [7]生物药产业蓬勃发展早期的奠基性系统开发——缅怀王义翘教授的开创性研究和成就[J]. 谢良志. 合成生物学, 2021(04)
- [8]王义翘先生和BPEC对生物化学工程发展的巨大作用[J]. 苏志国. 合成生物学, 2021(04)
- [9]泛实体瘤相关抗原图谱的构建及其在抗体偶联药物和嵌合抗原受体T细胞上的应用[D]. 方佳成. 西北大学, 2021(12)
- [10]不同培养体系对人脐带间充质干细胞增殖及向神经干细胞分化的影响[D]. 王雪. 内蒙古医科大学, 2021