一、柔嫩艾美耳球虫对四种抗球虫药的交叉抗药性试验（论文文献综述）
李超,汤新明,吕艳丽,于咏兰,刘贤勇,索勋[1]（2021）在《我国鸡球虫抗药性现状和抗药机制研究进展》文中研究表明球虫病严重威胁养鸡业健康发展。随着抗球虫药物的使用,鸡球虫的抗药性越来越普遍,增加了该病的防控难度。本文对十年来鸡球虫抗药性调查文献进行了梳理,发现我国各地区鸡球虫对大部分常用药物均具有中度以上的抗药性,华东和华南地区最严重,西北和东北地区的抗药性最弱。在各类药物中,对聚醚离子载体类药物和地克珠利的检测最多,对前者接近一半地区达到完全抗药,而对地克珠利基本为中度抗药,对其他化学合成药物过半数达完全抗药。当然由于地区差异,同一地区仍存在敏感性不同的虫株。各种药物的抗药性产生机制不一样,可能涉及虫体的结构蛋白改变如SAG家族蛋白、细胞膜离子通道、糖或脂肪酸代谢酶如苹果酸脱氢酶或能量代谢酶如细胞色素氧化酶。随着鸡球虫抗药性逐步得到解析,系统监测、科学用药和免疫预防等综合举措将极大消减球虫病对养鸡业的影响,提升经济与社会效益。
程振扬[2]（2021）在《柔嫩艾美耳球虫配子体GAM22蛋白的真核表达及其免疫保护效力评价》文中研究指明鸡球虫病是一种呈全球性分布的寄生性原虫病,其病原有7种,其中柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）和毒害艾美耳球虫（E.necatrix）的致病性最强,分别引起鸡的急性盲肠球虫病和小肠球虫病,给养鸡业造成巨大的经济损失。目前,鸡球虫病的防治措施主要有在饲料或饮水添加药物和接种活虫苗两种方法。长期添加药物已引起耐药、污染环境和危害肉蛋品质等问题。活虫苗虽可产生较强的免疫保护效果,但存在着扩散病原、毒力返强等缺点,且生产成本较高,对免疫后鸡群的饲养管理要求较高。而基因工程疫苗可以解决这些难题。本实验室前期对柔嫩艾美耳球虫配子体蛋白Etgam22和Etgam59基因进行了克隆与原核表达,获得的重组蛋白rEtGAM22和rEtGAM59能被柔嫩艾美耳球虫和毒害艾美耳球虫感染鸡的康复血清识别,可提高免疫鸡的平均增重、降低卵囊产量。在此基础上,本研究利用杆状病毒表达系统对Etgam22基因进行表达,通过动物试验评价其对柔嫩艾美耳球虫和毒害艾美耳球虫感染的免疫保护力,并与原核表达的重组蛋白进行比较,最后通过动物试验评价rEtGAM22和rEtGAM59联合免疫的保护效果,为研制重组配子体抗原亚单位疫苗奠定基础。1.柔嫩艾美耳球虫gam22基因真核表达载体的构建及其反应原性分析将优化后的Etgam22基因插入转座载体pFastbac1构建重组质粒,命名为pFastbac1-Etgam22;然后将pFastbacl-Etgam22转化到DH1OBac感受态细胞,构建重组杆状病毒穿梭载体,命名为Bacmid-Etgam22;将Bacmid-Etgam22转染Sf9细胞获得重组杆状病毒,命名为reBac-Etgam22。重组杆状病毒在Sf9细胞诱导表达,获得真核表达蛋白rEtGAM22-e,其大小约35 kDa。用IFA检测结果显示重组蛋白能被抗原核表达蛋白rEtGAM22-p多克隆抗体识别;Western blot检测结果显示重组蛋白可被鼠抗His单抗特异性识别,也可被鼠抗重组蛋白多克隆抗体,以及柔嫩艾美耳球虫和毒害艾美耳球虫感染的鸡阳性血清特异性识别,显示真核表达蛋白rEtGAM22-e具有良好的反应原性和交叉反应原性。2.真核表达重组配子体蛋白rEtGAM22-e的免疫保护效力分析以黄羽鸡为试验动物,主要以成活率、平均增重、病变记分、卵囊减少率、抗球虫指数、血清抗体水平等为指标,评价杆状病毒表达蛋白rEtGAM22-e对柔嫩艾美耳球虫和毒害艾美耳球虫的免疫保护效果,并与原核表达蛋白rEtGAM22-p和rEtGAM59相比较。结果显示:（1）对柔嫩艾美耳球虫的免疫保护力:免疫组成活率均为100%,未免疫攻虫组为90%;真核表达的重组蛋白rEtGAM22-e组平均增重稍次于重组蛋白rEtGAM59组,但高于原核表达蛋白rEtGAM22-p组;真核表达蛋白rEtGAM22-e组病变记分高于原核表达蛋白rEtGAM22-p组和rEtGAM59组;真核表达蛋白rEtGAM22-e组卵囊减少率高于原核表达蛋白rEtGAM22-p组,但低于rEtGAM59组;原核表达蛋白rEtGAM59组ACI最高,为158.83;真核表达蛋白rEtGAM22-e组血清抗体水平显着高于原核表达蛋白rEtGAM22-p组,但低于rEtGAM59组。（2）对毒害艾美耳球虫的免疫保护力:与对柔嫩艾美耳球虫的相似,但ACI值要低。结论:rEtGAM22和rEtGAM59对柔嫩艾美耳球虫和毒害艾美耳球虫能产生一定的免疫保护力;真核表达的重组蛋白rEtGAM22-e免疫保护力稍高于原核表达的重组蛋白rEtGAM22-p;重组蛋白rEtGAM59免疫保护效力高于重组蛋白rEtGAM22。3.重组配子体蛋白rEtGAM22-e与rEtGAM59联合免疫的保护效力分析按上一章方法,评价rEtGAM22-e和rEtGAM59联合免疫对柔嫩艾美耳球虫和毒害艾美耳球虫的免疫保护效果。结果显示:（1）对柔嫩艾美耳球虫的免疫保护力:各试验组存活率均为100%;除rEtGAM22-e单免组外,其余各免疫组的平均增重均显着大于未免疫攻虫组（P<0.05）,且与未免疫未攻虫组相比差异不显着（P>0.05）;联合免疫低剂量组病变记分最低;联合免疫组卵囊减少率相近,分别为46.21%和44.70%,高于单免组;联合免疫组的抗球虫指数分别为153.43和157.65,高于单免组;联合免疫组的血清抗体水平显着高于单免组（P<0.05）。（2）对攻毒害艾美耳球虫的免疫保护力:与对柔嫩艾美耳球虫的相似,但抗球虫指数分别为158.28和160.34。结论:rEtGAM22-e和rEtGAM59联合免疫保护效力高于单一重组蛋白免疫,联合免疫剂量100 μg（50+50）的保护效力要好于200 μg（100+100）剂量。
廖申权,戚南山,吕敏娜,吴彩艳,李娟,蔡海明,林栩慧,胡俊菁,于林增,张健騑,谢明权,孙铭飞[3]（2020）在《鸡球虫病流行病学、防治药物与疫苗研究进展》文中指出家禽养殖业是畜牧业的基础性产业,我国家禽年出栏量达146亿羽,约占全球养殖量的22%,而鸡球虫病是一种严重危害养禽业健康发展的寄生性原虫病,每年给养鸡业造成巨大的经济损失。该病由一种或多种艾美耳球虫寄生于鸡肠道粘膜上皮细胞引起,可导致大量肠上皮细胞受损、出血甚至死亡。近70年来,国内外学者一直致力于鸡球虫病防治药物和疫苗的研制,传统的抗球虫药物有聚醚类离子载体抗生素和化学合成类药物,传统的鸡球虫病疫苗有强毒活卵囊疫苗和弱毒活卵囊疫苗。近年来,新药与新型疫苗研发技术平台不断发展,为新型抗球虫药物（天然产物药物）和新型疫苗（亚单位疫苗、DNA疫苗和活载体疫苗等）的研制提供新的手段和思路。结合鸡球虫病流行病学、防治药物等方面的研究概况,重点阐述抗球虫药物与鸡球虫病疫苗研发等方面的研究进展,以期为鸡球虫病的综合防控提供理论依据。
于钰[4]（2020）在《柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸磷酸蛋白酶和ASNA1同源ATP酶特性研究》文中研究指明鸡球虫病是由几种艾美耳球虫寄生鸡肠道引起的一种严重的寄生虫病。目前,该病主要还是依赖于药物防治,抗球虫药物的广泛使用也加剧了球虫耐药性的产生。然而至今都没有找到球虫耐药性形成的机制,也没有找到控制球虫产生耐药性的靶基因。为了深入研究球虫耐药性产生的分子机制,我们实验室前期以柔嫩艾美耳球虫敏感株为基础分别诱导了对地克珠利和马杜拉霉素耐药的虫株,并利用转录组测序的方法对这两株耐药株以及柔嫩艾美耳球虫敏感株进行比较分析,成功获得了在敏感株和耐药株中差异表达的基因。本研究从差异表达基因中,选取了在两株耐药株中均显着上调表达的2个基因进行相关研究,这2个基因为柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶（EtSTP）和ASNA1同源ATP酶（EtASNA1）。1.EtSTP和EtASNA1基因的克隆和表达以柔嫩艾美耳球虫敏感株cDNA第一链为模板,成功克隆了 EtSTP和EtASNA1基因,核苷酸序列分析表明,EtSTP的开放阅读框序列含528 bp,编码175个氨基酸残基,预测分子量为19.0 kDa;EtASNA1的开放阅读框序列含408 bp,编码135个氨基酸残基,预测分子量为14.6 kDa。分别将2个基因的ORF连接到原核表达载体pGEX-6p-l,成功构建了原核重组表达质粒pGEX-6p-EtSTP和pGEX-6p-EtASNA1,转化到大肠杆菌BL21感受态细胞后,用IPTG诱导表达获得了重组蛋白rEtSTP和rEtASNA1,2个蛋白均为包涵体表达。分别用纯化的重组蛋白免疫兔和小鼠,成功获得相应的多克隆抗体。2.EtSTP和EtASNA1在柔嫩艾美耳球虫中的功能特性分析利用实时荧光定量PCR和Western Blot,分析了EtSTP和EtASNA1在柔嫩艾美耳球虫未孢子化卵囊、孢子化卵囊、子孢子和第二代裂殖子的mRNA转录水平和蛋白表达水平,结果显示,EtSTP和EtASNA1均在未孢子化卵囊和第二代裂殖子阶段高表达,在子孢子阶段最低。利用间接免疫荧光定位,对EtSTP和EtASNA1在子孢子的分布进行分析,结果表明,EtSTP主要位于子孢子除折光体外的大部分区域,子孢子侵入鸡DF-1细胞后,EtSTP主要位于虫体的表面和带虫空泡膜上,且随着虫体的发育,EtSTP的荧光强度增强;EtASNA1在游离或侵入DF-1细胞的子孢子,均始终位于虫体的大部分区域。体外抑制试验显示,经兔anti-rEtSTP和anti-rEtASNA1抗体作用后,子孢子入侵细胞能力明显下降,在400μg/mL浓度下,anti-rEtSTP的抑制率可达32%,anti-rEtASNA1的抑制率为20%。3.EtSTP和EtASNA1基因在柔嫩艾美耳球虫敏感株与耐药株之间的差异分析利用透射电镜观察了敏感株和耐药株第二代裂殖子的超微结构,发现耐药株的淀粉颗粒明显增多。利用实时荧光定量PCR和Western Blot,分析EtSTP和EtASNA1在敏感株和地克珠利耐药株、马杜拉霉素耐药株孢子化卵囊的转录与翻译水平,结果显示EtSTP和EtASNA1在2个耐药株中的表达量均远高于敏感株;利用实时荧光定量PCR分析田间分离的柔嫩艾美耳球虫地克珠利耐药株和不同浓度地克珠利耐药株、马杜拉霉素耐药株的mRNA转录水平,结果显示EtSTP和EtASNA1在野生耐药株的转录水平显着高于敏感株,而且在2个耐药株随耐药浓度的升高转录水平逐渐上升。此外,分析了敏感株和2个耐药株感染鸡与体外接种DF-1细胞后,在药物作用下EtSTP和EtASNA1表达量的变化,结果表明加入药物会引起其表达量上调。这些结果对深入研究球虫耐药机制及寻找药物靶点提供了一定的理论基础。
华恩玉[5]（2020）在《堆型艾美耳球虫配子体蛋白EaGAM56与EaGAM82的原核表达及其免疫保护作用研究》文中进行了进一步梳理鸡球虫病是一种严重危害养鸡业的寄生原虫病,据不完全统计每年球虫病给家禽养殖业造成的经济损失超过30亿美元。长期以来,鸡球虫病的防控主要依赖药物。但随着球虫耐药性的不断增强以及药物残留危害食品安全,鸡球虫病的防控措施由药物防治转向疫苗免疫预防。目前,用于临床的鸡球虫病疫苗主要是活虫苗,亚单位疫苗仅见有一种,即由分离于巨型艾美耳球虫（Eimeriamaxima）配子体的3种蛋白研制而成。堆型艾美耳球虫（E.acervulina）是养鸡场流行最广泛的鸡球虫之一,可引起鸡的亚临床球虫病,影响鸡的生长发育,降低饲料利用率。迄今,国内外对堆型艾美耳球虫配子体蛋白及其基因少有报道,其重组蛋白的免疫保护力也尚无见有报道。为此,本文对堆型艾美耳球虫配子体蛋白56基因（Eagam56）与82基因（Eagam82）进行了克隆和序列分析,分别构建了 2个基因的原核表达质粒,诱导表达后鉴定了重组蛋白的免疫原性,并经动物免疫保护试验评价了重组蛋白对堆型艾美耳球虫的免疫保护力,研究结果将为研制重组配子体抗原亚单位疫苗奠定基础。1.堆型艾美耳球虫Eagam56基因的克隆表达与免疫原性分析提取堆型艾美耳球虫（扬州株）卵囊的基因组DNA,PCR扩增Eagam56基因片段,克隆至pGEM-T-Easy载体;经测序、密码子优化后连接至pET-28a（+）质粒,构建pET-28a（+）-Eagam56表达载体,转化至大肠杆菌BL21;重组菌经酶切和测序鉴定后进行诱导表达,表达产物分别进行SDS-PAGE分析、Western-blot鉴定以及免疫原性分析。结果显示,克隆的Eagam56基因全长为1323 bp,具有一个大小为1323 bp的完整开放阅读框,编码440个氨基酸;与Genbank上的Eagam56基因序列对比,其同源性为99.9%;用在线软件对该基因编码区抗原性进行预测,发现Eagam56基因含有10个抗原决定簇,其中3个位于酪氨酸、脯氨酸富集区;重组蛋白大小约49 kDa,以可溶蛋白形式居多,可被HIS单抗特异性识别,也可被鼠抗重组蛋白多克隆抗体,以及堆型艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫（E.necatrix）、巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫（E.tenella）感染的鸡阳性血清特异性识别,显示重组蛋白EaGAM56具有良好的免疫原性和交叉抗原性。2.堆型艾美耳球虫Eagam82基因的克隆表达与免疫原性分析提取堆型艾美耳球虫（扬州株）卵囊的基因组DNA,PCR扩增Eagam82基因片段,克隆至pGEM-T-Easy载体;经测序、密码子优化后连接至pET-28a（+）质粒,构建pET-28a（+）-Eagam82表达载体,转化至大肠杆菌BL21;重组菌经酶切和测序鉴定后,对表达产物进行SDS-PAGE分析、Western-blot鉴定以及免疫原性分析。结果显示,克隆的Eagam82基因全长为1704bp,具有一个大小为1704bp的完整开放阅读框,编码568个氨基酸;与Genbank上的Eagam8基因序列对比,其同源性为99.4%;用在线软件对该基因编码区抗原性进行预测,发现Eagam82基因含有15个抗原决定簇,其中2个位于酪氨酸、脯氨酸富集区;重组蛋白大小约82 kDa,以可溶蛋白形式为多;可被HIS单抗特异性识别,也可被鼠抗重组蛋白多克隆抗体,以及堆型艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫感染的鸡阳性血清特异性识别,显示重组蛋白EaGAM82具有良好免疫原性和交叉抗原性。3.重组蛋白rEaGAM56和rEaGAM82及其联合免疫对堆型艾美耳球虫的免疫保护力以黄羽肉鸡为试验动物,以鸡的增重、相对增重率、卵囊减少率、病变记分、抗球虫指数（ACI）以及血清抗体水平等为评价指标,评价重组蛋白rEaGAM56、rEaGAM82以及2种重组蛋白联合应用的免疫保护效果。结果显示,rEaGAM56与rEaGAM82高（200 μg/鸡）、中（100 μg/鸡）剂量免疫组以及联合免疫组,鸡临床症状减轻。随着免疫剂量的增加,鸡的相对增重率与卵囊减少率增加,平均肠道病变记分减少。联合免疫高剂量组（各100 μg/鸡重组蛋白）的相对增重率与卵囊减少率达73.74%和74.27%。rEaGAM56、rEaGAM82、联合免疫高剂量组的 ACI 分别为 148.24、143.92 和 148.74。rEaGAM56的免疫保护力较rEaGAM82的强,rEaGAM56和rEaGAM82免疫鸡后均能产生血清抗体。结论:两种重组蛋白免疫均能产生一定的免疫保护力。
王海霞[6]（2020）在《柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药株的诱导及耐药相关基因特性的初步分析》文中认为球虫病是世界上危害严重的寄生虫病之一,对养鸡业造成了巨大的经济损失。随着药物的广泛使用及不合理使用,耐药性成为无法避免的问题,但球虫耐药性形成的机制至今不清楚,也没有找到控制球虫产生耐药性的靶基因。本研究通过实验室诱导获得了柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药虫株,观察了盐霉素耐药株和敏感株子孢子和裂殖子的超微结构,分析了盐霉素耐药株和敏感株的差异表达基因,检测了3个鸡球虫田间分离株的耐药状况,利用单卵囊分离技术获得22个柔嫩艾美耳球虫盐霉素田间耐药株,对柠檬酸合酶（EtCS）、甲硫氨酸氨基肽酶（EtMetAP）、锚蛋白重复序列（EtANK）3个球虫耐药相关基因的特性进行了初步分析。1.柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药株的实验室诱导与电镜观察采用药物浓度递增法,以15 mg/kg（药物/饲料）为起始诱导浓度,经过24次传代,用鸡体药敏试验检测,获得对盐霉素60 mg/kg完全耐药的柔嫩艾美耳球虫耐药株。利用透射电镜观察了盐霉素耐药株子孢子和裂殖子的超微结构,发现耐药株虫体的形态变得不规则、细胞膜粗糙与肿胀、细胞核形状变得不规则甚至溶解、微线减少、支链淀粉增多等。2.柔嫩艾美耳球虫敏感株和耐药株的比较转录组学分析利用RNA-seq对柔嫩艾美耳球虫敏感株和盐霉素耐药株的子孢子和裂殖子进行转录组测序分析。结果显示,与敏感株相比,耐药株子孢子获得17个上调表达基因、13个下调表达基因;耐药株裂殖子获得606个上调表达基因、496个下调表达基因,子孢子和裂殖子共有差异表达基因18个。GO分析发现,耐药株子孢子的差异表达基因主要参与离子结合过程,耐药株裂殖子的差异表达基因主要参与细胞蛋白质代谢过程。用qPCR对差异表达基因进行了验证,结果与转录组测序结果基本一致。3.鸡球虫田间分离株的耐药程度检测与柔嫩艾美耳球虫盐霉素田间耐药株的分离从安徽不同养殖场收集样品,获得3个鸡球虫田间株（AH1、AH2、AH3）,通过鸡体药敏试验检测了田间株对5种抗球虫药物（地克珠利、盐霉素、癸氧喹酯、甲基盐霉素、氯苯胍）的耐药程度,除AH2对氯苯胍中度耐药外,所测虫株对其他药物完全耐药。用琼脂糖技术分离获得22个柔嫩艾美耳球虫单卵囊分离株,用qPCR分析了4个差异表达基因在2个单卵囊分离株及安徽1混合种的mRNA转录水平,与转录组测序结果一致。4.三个耐药相关基因特性的初步分析对3个球虫耐药相关基因（EtCS、EtMetAP、EtANK）进行克隆、表达与纯化,制备相应抗体,分析3个基因在柔嫩艾美耳球虫球虫未孢子化卵囊、孢子化卵囊、子孢子、裂殖子的转录水平和翻译水平,结果表明这三个基因在四个阶段的转录水平和翻译水平不一致,可能是翻译后修饰的结果。间接免疫荧光表明,EtCS、EtMetAP、EtANK分别定位于子孢子除折光体外的细胞质中、子孢子表面、子孢子的顶端、都定位于裂殖子的细胞膜和细胞质中。体外抑制实验表明,这3个蛋白都参与了子孢子入侵DF-1细胞的过程。用EtCS处理鸡巨噬细胞后发现,EtCS可与巨噬细胞结合,抑制巨噬细胞的增殖及NO的产生。对敏感株和不同耐药株进行转录水平分析,发现这3个基因在柔嫩艾美耳球虫地克珠利耐药株和马杜拉霉素耐药株中表达都显着上调,而在盐霉素耐药株中差异不显着,与转录组结果一致。但这3个基因在耐药株中的蛋白翻译水平与转录结果不一致。利用qPCR分析3个基因在单卵囊分离的盐霉素田间耐药株、安徽1混合种、单卵囊分离的地克珠利田间耐药株的mRNA转录水平,结果显示,与敏感株相比,3个基因在安徽1混合种的转录水平都很低;在3株地克珠利田间耐药株中,除EtCS在其中2株下调表达外,其余都上调表达;在3株盐霉素田间耐药株中,EtMetAP表达上调和EtCS表达下调,EtANK差异不明显;与盐霉素转录组结果不一致,可能是由于分离的田间耐药株存在多重耐药性。结论:本研究利用诱导获得的柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药株和敏感株进行比较转录组学分析获得差异表达基因,用田间分离的柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药株进行了验证,选取3个耐药相关基因进行初步分析,结果为进一步研究球虫耐药性产生的分子基础提供了基础。
沈佳晨[7]（2020）在《帕托珠利混悬液在仔猪的药动学及生物利用度研究》文中研究指明帕托珠利为妥曲珠利的主要活性代谢产物,不仅具有抗球虫活性,而且对新孢子虫、弓形虫、鞭毛虫等原虫也均显示出良好的活性。目前帕托珠利已被开发用于治疗马原虫性脑脊髓炎（EPM）,但迄今尚未见批准用于其他动物方面的报道。目前可用于猪球虫病防控的药物品种很少,而帕托珠利的抗球虫活性有望开发用于预防仔猪球虫病。本研究通过对帕托珠利混悬液在仔猪体内的药动学特征以及口服给药的生物利用度的研究,旨在为其在防治仔猪球虫病方面的临床合理给药提供依据。1、猪血浆中帕托珠利含量的HPLC检测本研究建立了猪血浆中帕托珠利含量的HPLC测定法法。猪血浆中帕托珠利采用乙酸乙酯液液萃取和净化,采用C18反向色谱柱进行分离,高效液相色谱紫外检测器检测,检测波长为250nm,外标法定量。流动相为乙腈-0.2%乙酸水溶液（体积比53:47）,流速1mL/min,柱温35℃。结果表明,帕托珠利血药浓度在0.1010.00μg/mL范围内线性关系良好（R>0.999）,方法检测限和定量限分别为0.04μg/mL和0.1μg/mL,批内和批间的回收率均大于90%,批内和批间的精密度RSD分别小于5%和9%。本研究确立了猪血浆中帕托珠利的净化和测定方法,适用于猪血浆中帕托珠利含量的测定。2、帕托珠利混悬液在仔猪的药动学和生物利用度研究采用平行实验设计。16头40日龄健康仔猪随机分成两组,每组8头（公母各半）,分别进行单剂量静脉注射（6mg/kg bw）或单剂量口服给药（15mg/kg bw）,所有猪给药前禁食12h,给药2h后恢复正常饮食。给药后按预定的采血点采集血样,血浆中帕托珠利含量采用经验证的HPLC检测方法进行测定。实测血药浓度数据采用Graphad prism 8.0拟合药时曲线图,并用Winnonlin5.2计算药动学参数。结果显示,单剂量静脉注射帕托珠利注射液后帕托珠利在仔猪体内主要药动学参数如下:平均消除半衰期（T1/2β）为136.98h,平均滞留时间（MRT）为165.92h,平均药时曲线下面积（AUC0-t）为1570.97h.μg/mL,平均表观分布容积（Vz）为695.59 mL/kg,平均血浆清除率（CL）为3.77 mL/h·kg。单剂量口服帕托珠利混悬液后帕托珠利在仔猪体内主要药动学参数如下:平均消除半衰期（T1/2β）为134.05h,平均达峰时间（Tmax）为42.00h,平均峰浓度（Cmax）为14.03μg/mL,平均滞留时间（MRT）为173.19h,平均药时曲线下面积（AUC0-t）为2831.00 h·μg/mL,帕托珠利混悬液口服给药绝对生物利用度为72.08%。结果表明,帕托珠利在仔猪体内分布较差,消除缓慢;帕托珠利混悬液口服给药后在仔猪体内吸收良好,消除时间缓慢。
图门巴雅尔,王治维,胡明明,赵志超,刘畅,李磊[8]（2019）在《常陆合剂对人工感染鸡柔嫩艾美耳球虫的疗效观察》文中研究指明为研究常陆合剂对鸡球虫病的防治效果,采用以1×105个/mL浓度,对14日龄蛋公雏经口感染柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊液进行模型制备,并与攻虫当天开始饮水给药,试验组按体积百分比分为常陆合剂高（1%）、中（0.75%）、低（0.5%）剂量组,地克珠利组（0.02%）,不给药攻虫组及不给药不攻虫组,试验周期9 d。结果显示:与不给药攻虫组相比较,所有给药组的鸡盲肠病变形态及病变计分明显下降;所有给药组的鸡存活率均高于不给药攻虫组;所有给药组的相对增重率均高于不给药攻虫组;各组抗球虫指数（ACI）值分别为常陆合剂高剂量组177.33、常陆合剂中剂量组164.57、常陆合剂低剂量组161.14、地克珠利组178.41,均达到中等效力抗球虫药物水平;22日龄,不给药攻虫组的谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）值显着高于常陆合剂各剂量组、地克珠利组及不给药不攻虫组（P<0.05）,而白蛋白（ALB）、总蛋白（TP）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）等指标均显着低于其他各组（P<0.05）。结果表明,常陆合剂作为一种纯中药抗球虫制剂具有良好的抗球虫效果,值得进一步深入研究。
王海霞,赵其平,朱顺海,黄兵,董辉,王青杰,余水兰,于钰,梁珊珊,韩红玉[9]（2021）在《柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药株的实验室诱导》文中指出为了研究耐药性柔嫩艾美耳球虫产生耐药性的机理,本研究在实验室条件下,采用药物浓度递增的方法,以15 mg/kg为起始诱导浓度,对柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药性进行诱导。经过10次传代,获得了对60 mg/kg盐霉素耐药的柔嫩艾美耳球虫虫株。以抗球虫指数、最适抗球虫活性百分率、病变记分减少率和相对卵囊产量四项指标综合判定柔嫩艾美耳球虫对盐霉素的耐药性。其中抗球虫指数为156.92,最适抗球虫活性百分率为32.38,病变记分减少率为53.85,相对卵囊产量为28.17。结果显示,成功获得了柔嫩艾美耳球虫对盐霉素完全耐药的虫株,为进一步从分子水平研究球虫抗药性奠定基础。
刘国辉[10]（2019）在《不同球虫疫苗商品肉鸡免疫效果研究》文中提出鸡球虫病是危害严重的寄生虫病之一,以往主要依靠药物来进行防治,但是耐药性的产生较快,食品安全要求越来越高,尤其是欧盟要求肉鸡不使用球虫药,依靠免疫方法来控制鸡球虫病,逐渐成为出口欧盟肉鸡球虫病防控的主要手段。本试验通过对规模化地面养殖商品肉鸡,使用不同球虫疫苗、不同免疫剂量、不同免疫方式与用药对照组比较。利用每克粪便球虫卵囊数值（OPG）进行计数,球虫肉眼病变评分,肠道损伤肉眼病变评分等方法,对免疫后鸡的卵囊排出情况、感染程度和肠道损伤程度进行对比评估。通过对成活率、单只均重、料肉比、欧洲指数、ND、AI抗体等指标进行数据分析,对比鸡只健康状况和生产成绩。筛选出最佳免疫方案,为将来商品肉鸡正确球虫免疫提供第一手数据支持。试验结果表明:（1）Y疫苗1倍量0天喷雾组与Y疫苗0.6倍量0天喷雾组,两组均在免疫后19天出现了OPG均值最高峰;但0.6倍量组峰值低,高峰出现后,OPG均值下降缓慢,又在免疫后23天和33天出现两个较小峰值,因此,1倍量OPG均值趋势明显好于0.6倍量。从球虫眼观病变评分、肠道眼观病变评分结果看1倍量与0.6倍量差异不显着,说明损伤与剂量关系不大,可能与疫苗本身毒力关系更大。从生产成绩方面Y疫苗1倍量与0.6倍量差异不显着。（2）Z疫苗1倍量3天拌料组嗉囊饱食率（91%±2.22%）高于Y疫苗0天喷雾组舌尖红染率（81%±3.11%）,拌料组有更多的鸡可以接触到疫苗,每只鸡可以接触到更多的疫苗。Z疫苗1倍量3天拌料组免疫后17天出现OPG高峰,早于Y疫苗1倍量喷雾或0.6倍量喷雾组免疫后19天出现OPG高峰,更有利于尽早建立免疫力,后期补偿性生长。从球虫眼观病变评分、肠道眼观病变评分结果看Z疫苗1倍量3天拌料组病变程度较Y疫苗1倍量或0.6倍量喷雾组轻,进一步说明3日龄拌料组好于0日龄喷雾组,同时,说明Z疫苗本身毒力低于Y疫苗,符合供应商提供的说明。从生产成绩看,Z疫苗成绩优于Y疫苗。（3）各组出栏成活率为92.19%±2.93%,93.57%±1.33%,92.19%±5.17%,92.76±4.32%。各组间成活率差异均不显着（P>0.05）,说明球虫免疫对成活率几乎没有影响。（4）各组ND抗体分别为7.21±0.67,6.70±1.22,7.01±1.01,7.06±0.60;H9抗体分别为7.22±1.23;6.94±1.55;6.53±1.29;6.95±0.90。各组间ND、H9抗体差异均不显着（P>0.05）,说明球虫免疫对出栏前体液免疫ND、H9抗体几乎没有影响。（5）使用活疫苗进行球虫免疫快大型商品肉鸡,可以取得满意效果,防治球虫感染效果优于用药对照组。但从单只均重（试验组低于对照组0.27kg,0.23kg,0.09kg）、料肉比（试验组高于对照组0.14,0.13,0.09）、欧洲指数（试验组低于对照组50.2,46.4,30.5）等生产成绩看,用药对照组较疫苗免疫组优势明显。
二、柔嫩艾美耳球虫对四种抗球虫药的交叉抗药性试验（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、柔嫩艾美耳球虫对四种抗球虫药的交叉抗药性试验（论文提纲范文）
（1）我国鸡球虫抗药性现状和抗药机制研究进展（论文提纲范文）
| 1 我国鸡球虫抗药性现状 |
| 1.1 文献检索与筛选 |
| 1.2 我国各地区鸡球虫抗药性现状 |
| 1.2.1 华东地区： |
| 1.2.2 华南地区： |
| 1.2.3 西南地区： |
| 1.2.4 西北地区： |
| 1.2.5 东北地区： |
| 1.2.6 华北地区： |
| 1.2.7 华中地区： |
| 2 球虫抗药性机制研究 |
| 2.1 抗药虫株的获得 |
| 2.2 常见抗球虫药物抗药机制研究 |
| 2.2.1 聚醚离子载体类药物： |
| 2.2.2 三嗪类： |
| 2.2.3 磺胺类药物： |
| 2.2.4 癸氧喹酯和氯羟吡啶： |
| 3 结论及展望 |
（2）柔嫩艾美耳球虫配子体GAM22蛋白的真核表达及其免疫保护效力评价（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 文献综述 |
| 1 鸡球虫免疫机理 |
| 2 鸡球虫病疫苗类型 |
| 3 本研究的目的与意义 |
| 参考文献 |
| 第一章 柔嫩艾美耳球虫配子体蛋白gam22基因真核表达载体的构建及其反应原性分析 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二章 真核表达重组配子体蛋白rEtGAM22-e的免疫保护效力分析 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 重组配子体蛋白rEtGAM22-e与rEtGAM59联合免疫的保护效力分析 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
| 附录 |
（3）鸡球虫病流行病学、防治药物与疫苗研究进展（论文提纲范文）
| 1 鸡球虫病流行病学 |
| 1.1 鸡球虫的感染与繁殖 |
| 1.2 流行病学特征 |
| 1.2.1 鸡球虫病流行情况 |
| 1.2.2 鸡球虫病流行的影响因素 |
| 2 鸡球虫病防治药物开发 |
| 2.1 聚醚类离子载体抗生素 |
| 2.2 化学合成类药物 |
| 2.3 天然产物药物 |
| 2.4 鸡球虫抗药性研究 |
| 3 鸡球虫病疫苗研制 |
| 3.1 活卵囊疫苗 |
| 3.1.1 强毒活卵囊疫苗 |
| 3.1.2 弱毒活卵囊疫苗 |
| 3.2 重组疫苗 |
| 3.2.1 DNA疫苗 |
| 3.2.2 亚单位疫苗 |
| 3.2.3 活载体疫苗 |
| 4 展望 |
（4）柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸磷酸蛋白酶和ASNA1同源ATP酶特性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略表 |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 鸡球虫病概述 |
| 1.2 抗球虫药物作用机理及耐药机制 |
| 1.2.1 聚醚离子载体类药物 |
| 1.2.2 化学合成类 |
| 1.3 鸡球虫耐药性的检测方法 |
| 1.3.1 笼饲试验 |
| 1.3.2 细胞检测 |
| 1.4 耐药虫株的诱导 |
| 1.5 耐药相关基因的研究 |
| 1.6 展望 |
| 第2章 EtSTP和EtASNA1基因的克隆和表达 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.2.1 实验虫株和实验动物 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.2.3 实验仪器 |
| 2.2.4 柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊的收集与纯化 |
| 2.2.5 孢子化卵囊总RNA的提取和cDNA第一链的制备 |
| 2.2.6 基因的克隆及生物信息学分析 |
| 2.2.7 原核重组表达质粒的构建 |
| 2.2.8 重组蛋白的表达与纯化 |
| 2.2.9 重组蛋白反应原性的检测 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊的收集与纯化 |
| 2.3.2 孢子化卵囊总RNA的提取 |
| 2.3.3 基因的克隆和序列分析 |
| 2.3.4 重组蛋白的表达与纯化 |
| 2.3.5 重组蛋白反应原性的分析 |
| 2.4 讨论 |
| 第3章 EtSTP与EtASNA1蛋白特性和功能的初步分析 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.2.1 实验虫株、动物和细胞 |
| 3.2.2 实验试剂 |
| 3.2.3 实验仪器 |
| 3.2.4 柔嫩艾美耳球虫敏感株四个阶段虫体的收集与纯化 |
| 3.2.5 qPCR分析EtSTP和EtASNA1在柔嫩艾美耳球虫敏感株四个发育阶段的mRNA转录水平 |
| 3.2.6 重组蛋白多克隆抗体的制备及IgG的纯化 |
| 3.2.7 Western Blot分析EtSTP和EtASNA1在柔嫩艾美耳球虫敏感株四个发育阶段的蛋白翻译水平 |
| 3.2.8 EtSTP和EtASNA1在虫体中的分布定位 |
| 3.2.9 兔抗重组蛋白多克隆抗体对子孢子入侵DF-1细胞的影响 |
| 3.2.10 数据分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 EtSTP和EtASNA1在柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段的mRNA转录水平 |
| 3.3.2 EtSTP和EtASNA1在柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段的翻译水平 |
| 3.3.3 EtSTP和EtASNA1在柔嫩艾美耳球虫体内的分布定位 |
| 3.3.4 兔抗重组蛋白rEtSTP和rEtASNA1多克隆抗体对子孢子体外入侵DF-1细胞的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 第4章 EtSTP和EtASNA1在柔嫩艾美耳球虫敏感株与耐药株中的差异分析 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料和方法 |
| 4.2.1 实验虫株和实验动物 |
| 4.2.2 实验试剂 |
| 4.2.3 实验仪器 |
| 4.2.4 柔嫩艾美耳球虫耐药株的传代,收集与纯化 |
| 4.2.5 敏感株与耐药株第二代裂殖子超微结构比较 |
| 4.2.6 药物孵育对子孢子入侵DF-1细胞的影响 |
| 4.2.7 RNA的提取和cDNA第一链的合成 |
| 4.2.8 EtSTP和EtASNA1在敏感株和耐药株中DNA的扩增与比较 |
| 4.2.9 EtSTP和EtASNA1在敏感株和耐药株中转录水平的分析 |
| 4.2.10 EtSTP和EtASNA1在敏感株和耐药株中蛋白翻译水平的分析 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 敏感株与耐药株第二代裂殖子的透射电镜观察 |
| 4.3.2 药物孵育对子孢子入侵DF-1细胞的影响 |
| 4.3.3 比较敏感株和耐药株EtSTP和EtASNA1的DNA序列 |
| 4.3.4 EtSTP在敏感株和地克珠利耐药株及马杜拉霉素耐药株中的表达水平 |
| 4.3.5 EtASNA1在敏感株和地克珠利耐药株及马杜拉霉素耐药株中的表达水平 |
| 4.4 讨论 |
| 第5章 qPCR检测EtSTP和EtASNA1在不同耐药株中的转录水平 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料和方法 |
| 5.2.1 实验虫株和实验动物 |
| 5.2.2 实验试剂 |
| 5.2.3 实验仪器 |
| 5.2.4 不同浓度耐药株转录水平的研究 |
| 5.2.5 野生地克珠利耐药株转录水平的研究 |
| 5.2.6 药物作用后对EtSTP和EtASNA1转录水平的影响 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 EtSTP和EtASNA1在不同浓度耐药株转录水平的比较 |
| 5.3.2 野生地克珠利耐药株中EtSTP和EtASNA1的mRNA转录水平的研究 |
| 5.3.3 体外培养观察药物作用虫体后对EtSTP和EtASNA1 mRNA转录水平的影响 |
| 5.3.4 体内试验观察药物作用虫体后对EtSTP和EtASNA1转录水平的影响 |
| 5.4 讨论 |
| 第6章 全文总结 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（5）堆型艾美耳球虫配子体蛋白EaGAM56与EaGAM82的原核表达及其免疫保护作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 文献综述 鸡球虫病防治研究进展 |
| 1 鸡球虫的生物学特征 |
| 2 鸡球虫病的诊断与防治 |
| 3 鸡球虫病的免疫预防 |
| 4 本研究的目的与意义 |
| 第一章 堆型艾美耳球虫配子体蛋白gam56基因的克隆与表达及其免疫原性分析 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第二章 堆型艾美耳球虫配子体蛋白gam82基因的克隆与表达及其免疫原性分析 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第三章 重组蛋白rEaGAM56和rEaGAM82及其联合免疫对堆型艾美耳球虫的免疫保护力 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
（6）柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药株的诱导及耐药相关基因特性的初步分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 耐药性的定义 |
| 1.2 耐药性的类型 |
| 1.2.1 交叉耐药性 |
| 1.2.2 多重耐药性 |
| 1.3 实验室耐药虫株的诱导 |
| 1.4 耐药性检测的方法 |
| 1.4.1 鸡体检测法 |
| 1.4.2 同工酶分析法 |
| 1.4.3 超微结构的比较法 |
| 1.4.4 PCR技术测定法 |
| 1.5 抗球虫药物作用机理及其耐药性 |
| 1.5.1 离子载体类抗生素及其耐药机理 |
| 1.5.2 磺胺类抗球虫药物的耐药性 |
| 1.5.3 喹啉类抗球虫药物耐药性 |
| 1.5.4 抗硫胺素类抗球虫药物耐药性 |
| 1.5.5 吡啶类抗球虫药物的耐药性 |
| 1.5.6 三嗪类抗球虫药物及其耐药性 |
| 1.6 控制鸡球虫耐药性产生的策略 |
| 1.6.1 控制球虫的传播 |
| 1.6.2 合理的用药方案 |
| 1.6.3 综合治疗 |
| 1.6.4 定期检测耐药性 |
| 1.7 展望 |
| 第二章 柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药株的实验室诱导 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 试验虫株 |
| 2.2.3 实验试剂 |
| 2.2.4 实验仪器 |
| 2.2.5 试验药物 |
| 2.2.6 柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药株的实验室诱导 |
| 2.2.7 透射电子显微镜观察盐霉素耐药株与敏感株子孢子和第二代裂殖子的超微结构 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药株的诱导 |
| 2.3.2 诱导虫株的耐药性检测 |
| 2.3.3 透射电子显微镜观察敏感株与耐药株的超微结构 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 柔嫩艾美耳球虫敏感株与盐霉素耐药株差异基因的筛选与验证 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 实验虫株 |
| 3.2.3 实验药物 |
| 3.2.4 实验试剂 |
| 3.2.5 实验仪器 |
| 3.2.6 敏感株与盐霉素耐药株子孢子和第二代裂殖子的收集与纯化 |
| 3.2.7 敏感株和盐霉素耐药株子孢子和第二代裂殖子转录组测序 |
| 3.2.8 敏感株和盐霉素耐药株子孢子和第二代裂殖子差异表达基因的验证 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 敏感株和盐霉素耐药株子孢子和第二代裂殖子总RNA的提取 |
| 3.3.2 敏感株和盐霉素耐药株子孢子和第二代裂殖子测序数据生物信息分析 |
| 3.3.3 敏感株和盐霉素耐药株子孢子和第二代裂殖子差异基因的筛选 |
| 3.3.4 敏感株和盐霉素耐药株子孢子和第二代裂殖子差异基因的验证 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 现场鸡球虫感染现状和耐药程度调查及盐霉素田间耐药株的分离 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 实验动物 |
| 4.2.2 试验药物 |
| 4.2.3 实验试剂 |
| 4.2.4 实验仪器 |
| 4.2.5 田间株粪便样品的收集及繁殖 |
| 4.2.6 形态学鉴定田间株球虫种类 |
| 4.2.7 多重PCR鉴定球虫种类 |
| 4.2.8 药敏试验验证田间株耐药性 |
| 4.2.9 抗盐霉素田间株单卵囊的分离 |
| 4.2.10 qPCR分析差异表达基因在田间分离株的转录水平 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 形态学鉴定田间株球虫种类 |
| 4.3.2 多重PCR鉴定球虫种类 |
| 4.3.3 药敏试验验证田间株耐药性 |
| 4.3.4 单卵囊分离田间盐霉素耐药株 |
| 4.3.5 差异表达基因在单卵囊分离株和田间混合种转录水平的分析 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 3个耐药相关基因功能特性初步研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 实验动物 |
| 5.2.2 实验虫株、原核表达载体及细胞 |
| 5.2.3 实验试剂 |
| 5.2.4 实验仪器 |
| 5.2.5 敏感株孢子化卵囊的收集与纯化 |
| 5.2.6 敏感株孢子化卵囊总RNA的提取与c DNA的合成 |
| 5.2.7 耐药基因的扩增 |
| 5.2.8 基因的生物信息学分析 |
| 5.2.9 重组表达质粒的构建 |
| 5.2.10 重组蛋白的诱导表达与纯化 |
| 5.2.11 重组蛋白反应原性分析 |
| 5.2.12 抗重组蛋白多克隆抗体的制备 |
| 5.2.13 耐药基因在不同发育阶段和不同耐药株的转录水平分析 |
| 5.2.14 耐药基因在不同发育阶段和不同耐药株的翻译水平分析 |
| 5.2.15 耐药相关蛋白在子孢子入侵DF-1细胞后的定位 |
| 5.2.16 田间盐霉素耐药株和地克珠利耐药株对耐药基因进行验证 |
| 5.2.17 多克隆抗体对子孢子入侵DF-1细胞体外抑制实验 |
| 5.2.18 柠檬酸合酶对体外培养鸡巨噬细胞功能的影响 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 敏感株孢子化卵囊的总RNA提取 |
| 5.3.2 耐药基因的克隆 |
| 5.3.3 基因的生物信息学分析 |
| 5.3.4 重组表达质粒的构建 |
| 5.3.5 重组蛋白的表达与纯化 |
| 5.3.6 重组蛋白的反应原性分析 |
| 5.3.7 三个基因在不同发育阶段的转录水平及翻译水平分析 |
| 5.3.8 三个基因在不同耐药株中的转录和翻译水平分析 |
| 5.3.9 三个基因在田间分离株的mRNA转录水平分析 |
| 5.3.10 三个蛋白在子孢子入侵DF-1细胞后的定位分析 |
| 5.3.11 多克隆抗体对子孢子入侵DF-1细胞体外抑制实验 |
| 5.3.12 柠檬酸合酶对体外培养鸡巨噬细胞功能的影响 |
| 5.3.13 r Et CS对一氧化氮(NO)生成量的测定 |
| 5.4 讨论 |
| 第六章 全文总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（7）帕托珠利混悬液在仔猪的药动学及生物利用度研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第1章 前言 |
| 1. 三嗪类抗球虫药研究进展 |
| 1.1 地克珠利 |
| 1.2 妥曲珠利 |
| 1.3 纳川珠利与沙咪珠利 |
| 2 帕托珠利研究进展 |
| 2.1 理化性质 |
| 2.2 帕托珠利的药理学特性 |
| 2.3 帕托珠利的临床应用 |
| 2.4 三嗪类抗球虫药耐药性研究进展 |
| 3 本研究的目的和意义 |
| 第2章 猪血浆中帕托珠利含量的HPLC检测 |
| 1 材料 |
| 1.1 仪器与设备 |
| 1.2 标准品与试剂 |
| 1.3 试液的配置 |
| 2 方法 |
| 2.1 猪血浆样品预处理 |
| 2.2 色谱条件 |
| 2.3 血浆中帕托珠利含量的定量测定 |
| 2.4 检测限与定量限 |
| 2.5 标准曲线的绘制 |
| 3 方法学验证 |
| 3.1 系统适用性 |
| 3.2 系统残留 |
| 3.3 选择性 |
| 3.4 精密度与准确度 |
| 3.5 回收率 |
| 3.6 稳定性 |
| 4 结果 |
| 4.1 色谱行为 |
| 4.2 检测限与定量限 |
| 4.3 标准曲线与线性范围 |
| 4.4 系统残留 |
| 4.5 准确度与精密度 |
| 4.6 回收率 |
| 4.7 稳定性 |
| 5 讨论 |
| 5.1 提取条件的优化 |
| 5.2 色谱条件的优化 |
| 5.3 线性范围 |
| 6 小结 |
| 第3章 帕托珠利混悬液在猪体内的药动学和生物利用度研究 |
| 1. 材料 |
| 1.1 仪器与设备 |
| 1.2 试剂与试液 |
| 1.3 药品 |
| 1.4 饲料 |
| 1.5 试验动物入选 |
| 2 方法 |
| 2.1 试验设计与给药方案 |
| 2.2 血样采集与保存 |
| 2.3 血浆样品中帕托珠利含量的测定 |
| 2.4 数据分析 |
| 2.5 绝对生物利用度的计算 |
| 3 结果 |
| 3.1 采血时间 |
| 3.2 临床观察与剔除动物 |
| 3.3 给药后猪血浆中帕托珠利色谱图 |
| 3.4 血药浓度与药动学特征 |
| 4 讨论 |
| 4.1 猪单剂量静注帕托珠利注射剂后的药动学特征 |
| 4.2 猪单剂量口服帕托珠利混悬液后的药动学特征 |
| 5 小结 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 在学期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
（8）常陆合剂对人工感染鸡柔嫩艾美耳球虫的疗效观察（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验动物 |
| 1.2 试验药物及试剂 |
| 1.3 试验动物分组与处理 |
| 1.4 药效评定指标及标准 |
| 1.4.1 体重指标 |
| 1.4.2 临床症状观察 |
| 1.4.3 盲肠病变计分 |
| 1.4.4 卵囊计数 |
| 1.4.5 抗球虫指数(ACI) |
| 1.5 对血清学指标的影响 |
| 1.6 数据统计与分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 临床症状 |
| 2.2 病理剖检 |
| 2.3 常陆合剂的抗球虫效果 |
| 2.4 常陆合剂对血清学指标的影响 |
| 3 讨论 |
（9）柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药株的实验室诱导（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 柔嫩艾美耳球虫虫株 |
| 1.3 试验药物 |
| 1.4 盐霉素耐药株的实验室诱导 |
| 1.4.1 诱导方法 |
| 1.4.2 试验设计 |
| 1.5 诱导后虫株的耐药性检测 |
| 1.5.1 试验分组 |
| 1.5.2 试验步骤 |
| 1.5.3 耐药性判定方法及标准 |
| 2 结果 |
| 2.1 耐药株的诱导 |
| 2.2 诱导虫株的耐药性检测 |
| 2.2.1 ACI检测 |
| 2.2.2 RLS检测 |
| 2.2.3 ROP检测 |
| 2.2.4 POAA检测 |
| 2.2.5 各组鸡的耐药性综合评价 |
| 3 讨论 |
（10）不同球虫疫苗商品肉鸡免疫效果研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.鸡球虫病国内外研究现状 |
| 1.1 鸡球虫病 |
| 1.2 鸡球虫病原的形态及分类 |
| 1.3 鸡球虫病原生物学特性 |
| 1.4 鸡球虫生活史 |
| 1.5 流行病学 |
| 1.6 发病机理 |
| 1.7 症状和病变 |
| 1.8 诊断 |
| 1.9 防治 |
| 2 试验研究的目的和意义 |
| 第二章 不同球虫疫苗商品肉鸡免疫效果研究 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 疫苗、药物、仪器、试剂 |
| 1.2 研究方法 |
| 1.2.1 试验分组 |
| 1.2.2 喷雾免疫方法 |
| 1.2.3 拌料免疫方法 |
| 1.2.4 用药组药物添加方法 |
| 1.3 球虫免疫效果评价 |
| 1.3.1 舌尖红染率、嗉囊饱食率 |
| 1.3.2 卵囊计数(OPG) |
| 1.3.3 球虫肉眼病变评分方法: |
| 1.3.4 肠道病变评分方法: |
| 1.3.5 生产成绩指标: |
| 2.结果 |
| 2.1 舌尖红染率和嗉囊饱食率结果 |
| 2.2 OPG检测结果 |
| 2.2.1 不同剂量的Y疫苗免疫后OPG值 |
| 2.2.2 Z疫苗1 倍量拌料与Y疫苗1 倍量喷雾、Y疫苗0.6 倍喷雾OPG平均值对比 |
| 2.2.3 用药组OPG趋势 |
| 2.3 球虫肉眼病变评分结果比较 |
| 2.4 肠道损伤肉眼病变评分结果比较 |
| 2.5 生产成绩比较 |
| 2.5.1 成活率对比结果 |
| 2.5.2 单只均重对比结果 |
| 2.5.3 出栏料肉比(FCR)结果对比 |
| 2.5.4 出栏欧洲指数(EPI)对比结果 |
| 2.5.5 出栏前ND抗体均值比较 |
| 2.5.6 出栏前H9 抗体比较 |
| 3.讨论 |
| 3.1 OPG监控、肉眼病变评分的目的和意义 |
| 3.2 拌料法与喷雾法影响 |
| 3.3 生产成绩影响 |
| 3.4 对抗体的影响 |
| 3.5 免疫鸡群早期垫料管理 |
| 3.6 应用前景与建议 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 导师组意见 |
| 致谢 |
四、柔嫩艾美耳球虫对四种抗球虫药的交叉抗药性试验（论文参考文献）
- [1]我国鸡球虫抗药性现状和抗药机制研究进展[J]. 李超,汤新明,吕艳丽,于咏兰,刘贤勇,索勋. 寄生虫与医学昆虫学报, 2021(02)
- [2]柔嫩艾美耳球虫配子体GAM22蛋白的真核表达及其免疫保护效力评价[D]. 程振扬. 扬州大学, 2021
- [3]鸡球虫病流行病学、防治药物与疫苗研究进展[J]. 廖申权,戚南山,吕敏娜,吴彩艳,李娟,蔡海明,林栩慧,胡俊菁,于林增,张健騑,谢明权,孙铭飞. 广东农业科学, 2020(11)
- [4]柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸磷酸蛋白酶和ASNA1同源ATP酶特性研究[D]. 于钰. 上海师范大学, 2020(07)
- [5]堆型艾美耳球虫配子体蛋白EaGAM56与EaGAM82的原核表达及其免疫保护作用研究[D]. 华恩玉. 扬州大学, 2020
- [6]柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药株的诱导及耐药相关基因特性的初步分析[D]. 王海霞. 中国农业科学院, 2020
- [7]帕托珠利混悬液在仔猪的药动学及生物利用度研究[D]. 沈佳晨. 扬州大学, 2020(04)
- [8]常陆合剂对人工感染鸡柔嫩艾美耳球虫的疗效观察[J]. 图门巴雅尔,王治维,胡明明,赵志超,刘畅,李磊. 畜牧与兽医, 2019(10)
- [9]柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药株的实验室诱导[J]. 王海霞,赵其平,朱顺海,黄兵,董辉,王青杰,余水兰,于钰,梁珊珊,韩红玉. 中国动物传染病学报, 2021(02)
- [10]不同球虫疫苗商品肉鸡免疫效果研究[D]. 刘国辉. 青岛农业大学, 2019(03)