一、兔局灶脑缺血后内源性阿片肽含量变化（论文文献综述）
赖泽林[1]（2020）在《δ阿片肽DADLE对全脑缺血的神经保护及其自噬调控机制研究》文中研究表明在世界范围内,缺血性脑卒中逐渐成为了威胁人类生命健康的一大疾病,且临床上针对该疾病的治疗手段仍十分有限。近年来,围绕delta阿片受体（delta opioid receptor,DOR）对脑缺血的神经保护作用日益受到研究者的关注。本实验室前期研究结果表明,用[d-Ala2,d-Leu5]脑啡肽（DADLE,DOR激动剂）激活DOR可以显着减轻脑缺血损伤,对脑缺血引起的认知损伤有明显改善作用。此外,DOR活化可以改善脑缺血3天后神经元存活,促进星形胶质细胞活化,减少受损的星形胶质细胞。然而,DADLE激活DOR促进缺血神经元存活的具体机制却并不清楚。我们在体外研究中关注到,DADLE激活DOR通过促进自噬可以显着减轻星形胶质细胞糖氧剥夺（oxygen glucose deprivation,OGD）损伤。而近年来的研究报道均表明,自噬在脑缺血损伤中发挥重要的作用。其中,自噬启动相关的Unc-51样激酶（UNC-51 like kinase 1,ULK1）主要受到腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase,AMPK）和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）的调节。因此,我们推测DADLE激活DOR改善缺血神经元存活可能与AMPK介导自噬途径调控有关。本课题在Sprague Dawley大鼠全脑缺血损伤模型和SH-SY5Y细胞糖氧剥夺再灌注（oxygen glucose deprivation/reperfusion,OGD/R）损伤模型上进行研究,结合组织化学、细胞和分子生物学技术手段,探究DADLE激活DOR对脑缺血损伤后神经元自噬变化的影响及其AMPK介导的自噬调控机制。课题内容分为两部分,具体内容如下:1.DOR活化对大鼠全脑缺血损伤后细胞自噬的影响及其分子机制研究为了模拟临床脑缺血损伤,构建大鼠全脑缺血损伤模型。采用脑缺血后处理（Ischemia postconditioning,IPO）方式,经侧脑室给予不同药物处理,通过蛋白免疫印迹（Western blotting）检测DADLE对脑缺血后DOR的影响。通过Western blotting检测自噬相关蛋白LC3和P62的变化,反映DOR活化对脑缺血损伤后自噬的影响。通过NeuN标记神经元,观察大鼠海马神经元存活情况,探究自噬对DOR介导神经保护作用的影响。同时,通过GFAP标记星形胶质细胞,观察大鼠海马CA1区星形胶质细胞状态,探究自噬对DOR调控缺血后星形胶质细胞活化的影响。利用免疫荧光（immunofluorescence,IF）和Western blotting研究脑缺血后DOR介导自噬调控机制。实验结果表明:1)DADLE可以显着提高缺血后DOR表达水平。2)DOR活化提高缺血后LC3 II/LC3 I水平,降低P62水平,促进细胞自噬。DADLE与自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-Methyladenine,3-MA）联用消除了DOR对改善缺血CA1神经元存活和调控缺血后星形胶质细胞活化的保护效果。3)脑缺血损伤后,DOR活化激活AMPK/mTOR/ULK1信号通路促进自噬。DADLE与AMPK抑制剂Dorsomorphin（Compound C）联用消除了DOR活化改善缺血CA1神经元存活的保护作用。2.DOR活化对SH-SY5Y细胞OGD/R损伤后自噬的影响及其分子机制研究我们构建SH-SY5Y细胞OGD/R损伤模型,体外模拟脑缺血损伤。通过细胞活性实验检测不同剂量DADLE和DOR抑制剂Naltrindole对SH-SY5Y细胞的影响,并探究OGD/R损伤后DOR活化对细胞活力的影响。通过Western blotting检测LC3和P62的变化,以及mCherry-GFP-LC3B腺病毒感染实验观察细胞自噬流（autophagic flux）的变化,研究DOR活化对OGD/R损伤后细胞自噬的影响。通过单丹磺酰尸胺（Monodansylcadaverine,MDC）染色实验和Western blotting对DOR活化诱导自噬的调控机制进行探究。实验结果表明:1)DADLE激活DOR可以减轻细胞OGD/R损伤。2)DADLE可以提高OGD/R损伤后DOR水平。3)DOR活化提高OGD/R损伤后LC3 II/LC3 I水平,并降低P62水平,促进损伤后细胞自噬。同时,DOR活化改善OGD/R损伤引起的自噬流障碍。4)OGD/R损伤激活AMPK/mTOR/ULK1信号通路促进自噬,而DOR活化进一步促进AMPK/mTOR/ULK1信号通路,增强OGD/R损伤后细胞自噬。DADLE与Compound C联用抑制了DOR介导自噬升高的作用。综上所述,脑缺血损伤后,DADLE激活DOR通过AMPK/mTOR/ULK1信号通路促进神经元自噬,改善缺血神经元存活,发挥神经保护作用。课题研究结果为DOR介导神经保护作用提供了新的实验证据,首次揭示了DOR介导自噬对缺血神经元的影响,加深对DOR调控下游分子通路的理解和认识,进一步扩充完善了DOR在脑缺血损伤中具体神经保护机制,而AMPK依赖的DOR介导自噬机制可以提供新的思路和药物靶标,有助于寻找脑缺血治疗的新方案。
万娟[2]（2019）在《JAK2/STAT3和胸腺素β4分别在电针内脏镇痛与耐受中的作用研究》文中研究表明电针能治疗多种疼痛（包括躯体疼痛和内脏疼痛）,对电针躯体镇痛的研究发现,电针可诱导多种镇痛物质（如脑啡肽、内啡肽、强啡肽等）和抗镇痛物质（如八肽胆囊收缩素、孤啡肽等）的释放。电针镇痛是中枢多种物质共同作用的结果。目前电针缓解内脏疼痛的研究进展缓慢,这主要是由于没有合适的模型。本研究旨在建立合适的内脏超敏模型,研究针刺缓解内脏超敏的中枢分子机制。电针在反刍动物（山羊）的镇痛效果最好,本研究电针试验拟在山羊上进行。由于山羊试验成本较高,本试验先建立大鼠内脏超敏模型,在此基础上再建立山羊回肠炎性内脏超敏模型。反复或持续电针会引起电针镇痛效应下降,产生“电针耐受”现象,电针耐受是电针治疗的负效应,是电针临床应用的主要障碍之一。研究表明抗镇痛性物质在电针耐受中发挥了重要的作用。近期的研究发现胸腺素β4（Tβ4）具有抗电针镇痛的作用,进一步探索Tβ4在电针耐受中的作用,以阐明电针耐受的机理。1.三硝基苯磺酸诱导回肠炎性内脏超敏模型的建立炎症性肠病（IBDs）是免疫介导的慢性、间歇性复发的肠道炎症。内脏超敏反应是IBDs的一个重要的病理生理机制,近几年受到越来越多的关注。70%的IBDs患者在疾病发展的急性期和恢复期,炎性介质持续释放,导致肠壁神经末梢敏感化,并引起腹痛。2/3的IBDs患者表现为回肠末端透壁性炎症。而现有的报道都是基于结肠炎而展开的,显然不太适合研究IBD引起的内脏超敏。IBD患者是否存在内脏超敏存在争议,并且缺乏证据。为解决这一争议,本试验旨在用2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）诱导大鼠回肠炎模型,并观察内脏超敏的存在。在此基础上,建立山羊回肠炎性内脏超敏模型。将雄性SD大鼠麻醉,打开腹腔,分别在距回肠末端15 cm处的肠腔注射TNBS（0.6 mL,80 mg/kg,溶于30%乙醇中）,对照组注射等体积的30%乙醇或生理盐水。分别在第1、3、7、14、21和28天,评估大鼠在20、40、60、80和100 mmHg结直肠扩张压力（CRD）下的内脏运动反应（VMR）。CRD测试后,立即安乐死大鼠,采集回肠末段样品,ELISA法检测髓过氧化物酶（MPO）和细胞因子（TNF-α,IL-1β和IL-6）含量;免疫组织化学法测定T11背根神经节中降钙素基因相关肽（CGRP）水平。结果显示:TNBS组大鼠在第3天开始表现透壁炎症,在第7天最明显,随后炎症逐渐恢复,在第21天未见明显病变。回肠炎大鼠CRD引起的VMR在第721天显着高于对照大鼠（P<0.05）,背根神经节中CGRP免疫反应阳性细胞在第721天显着增加（P<0.05）,且与大鼠VMR正相关。表明TNBS回肠腔注射,诱导了透壁回肠炎,并引发内脏超敏,该内脏超敏可持续到第21天。在此基础上,采用30 mg TNBS-40%乙醇溶液（1.2 mL）注射到山羊距回肠韧带15 cm处的回肠壁,对照组注射等量的生理盐水,在第3、7、14、21和28天评估山羊回肠炎症和内脏运动反应。结果显示TNBS在第37天诱导山羊明显的回肠炎症,回肠炎山羊内脏超敏在第7天开始出现,持续到第28天。该模型模拟了IBDs的临床表现,可为探讨肠道炎症和内脏超敏的发病机制提供思路,有助于进一步治疗内脏超敏。2.电针通过调节疼痛下行传导系统中JAK2/STAT3信号通路缓解山羊内脏超敏目前认为炎症、心理和肠道异常感觉和运动功能障碍等会导致外周和中枢敏感化,并引起内脏超敏,但其确切机制尚不完全清楚。细胞因子（如IL-6）激活的JAK2/STAT3信号通路是中枢敏化的关键信号通路,并促进了超敏反应的发生。因此,JAK2/STAT3信号通路可能是治疗人和动物超敏反应的潜在靶点。电针是一种传统中医治疗方法,安全且无并发症,可能成为治疗内脏超敏的一种有效辅助手段,但其具体机制尚不清楚。电针通过激活（或抑制）下行抑制（或易化）系统产生镇痛,该系统主要包括中脑导水管周围灰质（PAG）-延髓头端腹内侧区（RVM）-脊髓背角（SCDH）产生镇痛作用。电针是否通过PAG-RVM-SCDH轴的JAK2/STAT3信号通路调节内脏超敏有待证实。为探索电针治疗内脏超敏的效果及中枢机制,本试验建立山羊回肠炎性内脏超敏模型（1.2 mL,30 mg TNBS-40%乙醇溶液回肠壁注射）,第7天开始每3 d用电针刺激内脏超敏山羊双侧“后三里”穴,每次30 min,共6次。在第7、10、13、16、19和22天记录山羊结直肠扩张（CRD）引起的疼痛行为反应和内脏运动反应（VMR）。第22天采集脑和T11脊髓,用免疫印迹和实时荧光定量PCR法检测脊髓中IL-6、JAK2和STAT3的蛋白和mRNA水平,免疫组化法观察这些物质在中脑导水管周围灰质腹外侧区（vlPAG）、RVM（主要是中缝大核,NRM）、SCDH、孤束核（NTS）和迷走运动背核（DMV）中的分布。结果显示:注射TNBS-乙醇溶液的山羊表现腹泻以及明显VMR和疼痛行为反应,vlPAG、NRM、NTS和DMV中IL-6及磷酸化JAK2（pJAK2）和STAT3（pSTAT3）水平增加,SCDH中这些物质的蛋白和mRNA水平增加。电针缓解山羊腹泻、VMR及疼痛行为反应,降低vlPAG、NRM、SCDH和NTS中IL-6、pJAK2和pSTAT3水平,减少DMV中IL-6和pJAK2水平,而不影响SCDH中这三种物质的mRNA水平。以上结果表明电针可能通过抑制PAG-RVM-SCDH中JAK2/STAT3信号通路缓解山羊内脏超敏。3.胸腺素β4参与慢性电针耐受适当间隔时间的电针能产生良好镇痛效果,但是反复或持续电针会引起电针镇痛效应下降,即产生“电针耐受”。电针耐受是电针治疗的一种负效应,引起了临床工作者和研究人员的极大关注。大量的研究表明电针在诱导阿片肽（如脑啡肽（ENK）、内啡肽（END）、强啡肽（DYN）等）释放,产生镇痛的同时,也引起抗阿片肽（如八肽胆囊收缩素（CCK-8）、孤啡肽（OFQ）等）的释放增加。尽管相关研究阐明了这些活性物质的作用及其相互间的关系,但电针耐受的具体机制仍不清楚。近期的研究发现Tβ4具有抗电针镇痛的作用,其抗电针镇痛的机理值得关注,且其在电针耐受中的作用及其与经典针刺镇痛相关的阿片肽类和抗阿片肽类及其受体等物质的关系值得研究。由于躯体镇痛模型容易复制,电针耐受的研究一般建立在躯体镇痛耐受的基础上。大鼠每天电针1次,每次30 min,连续8 d,建立电针耐受模型。侧脑室微注射Tβ4抗体或其siRNA以评估Tβ4对电针耐受的影响。观察Tβ4 siRNA注射后,各脑区（下丘脑、丘脑、皮层、中脑和延髓）中Tβ4、阿片肽（ENK、END和DYN）、抗阿片肽（CCK和OFQ）、μ阿片受体（MOR）和CCK B型受体（CCKBR）的mRNA和蛋白在第1、4和8天的表达谱。结果显示:各脑区的Tβ4水平在第1、4和8天增加,并与鼠尾潜伏期（TFL）变化率相关。反复电针期间,Tβ4抗体和其siRNA均延缓大鼠电针耐受的形成。Tβ4 siRNA使各脑区Tβ4水平下降,导致大多数脑区ENK、END、DYN和MOR水平增加,但不影响多数脑区OFQ、CCK-8和CCKBR水平。除延髓外,其他脑区中Tβ4水平与ENK、END、DYN或MOR水平负相关,Tβ4水平与某些脑区中OFQ或CCK-8水平正相关。这些结果表明Tβ4可能通过负向改变中枢神经系统内源性阿片肽及其受体水平,及正向影响其中抗阿片肽水平而促进电针耐受的形成。
胡曼丽[3]（2018）在《针刺诱导神经环路激活及中脑导水管周围灰质基因差异表达研究》文中研究指明电针（Electroacupuncture,EA）是一种治疗疼痛的有效方法。通过传统物理和药理学手段已经确定许多参与针刺镇痛的神经核团和区域,但单个核团或区域并不能阐明针刺镇痛的神经机制,针刺镇痛激活的神经环路还有待研究。大量的研究表明电针可以诱导多种镇痛物质（如脑啡肽、内啡肽、强啡肽等）和抗镇痛物质（如胆囊收缩素、孤啡肽、血管紧张素Ⅱ等）的释放。显然,针刺镇痛是中枢多种物质共同作用的综合表现。由于在不同神经核团中神经元功能各异,神经元内信号分子参与调节针刺镇痛的机制还不清楚。因此,本研究旨在探索针刺镇痛的相关神经环路、物质及分子信号通路。1.针刺不同穴位激活的共同神经环路为探索针刺镇痛的相关神经环路,本研究通过标记激活的神经元,比较分析针刺不同穴位激活的中枢神经核团或区域。选取28只杂交雄性山羊（30±2 kg）,随机分为四组:空白对照组,“百会-三台”假针组,“百会-三台”电针组,双侧后三里电针组。电针组山羊电针1次（60 Hz,30 min）;对照组山羊仅做保定处理;假针组山羊只扎针、不通电。采用钾离子透入法测定山羊痛阈。记录电针前后的山羊痛阈值,计算痛阈变化率。待测痛后山羊迅速处死,采取大脑和脊髓组织样。采用免疫酶组织化学方法检测尾核、伏核、外侧隔区、内侧隔区、下丘脑室旁核、下丘脑腹内侧核、弓状核、基底杏仁核、僵核、臂旁核、蓝斑、孤束核、垂体、中脑导水管周围灰质腹外侧（vlPAG）、中缝大核（NRM）、巨细胞网状核（Gi）和脊髓背角（SCDH）中c-Fos蛋白表达水平。试验结果显示,“百会-三台”和后三里电针组山羊痛阈在电针后显着升高（p<0.05）。“百会-三台”电针组山羊的痛阈变化率显着高于后三里电针组（p<0.05）。与空白组相比,电针后三里或“百会-三台”组穴都能诱导c-Fos免疫样阳性神经元在内侧隔区、下丘脑腹内侧核、弓状核、基底杏仁核、缰核、垂体前叶、臂旁核、蓝斑、vlPAG、NRM、Gi和SCDH内显着增加（p<0.05）。与后三里电针组相比,电针“百会-三台”组穴诱导c-Fos免疫样阳性神经元在基底杏仁核内显着增加（p<0.05）,但在内侧隔区、下丘脑室旁核、缰核和SCDH内显着减少（p<0.05）。这些结果提示弓状核-中脑导水管周围灰质-中缝大核/蓝斑-脊髓背角和下丘脑-垂体是电针不同穴位激活的共同神经环路。2.电针山羊中脑导水管周围灰质基因差异表达为全面了解电针对中枢神经系统基因表达的影响,本研究采取电针山羊PAG进行转录组高通量深度测序,运用q PCR方法对测序结果进行验证,并通过侧脑室微注射技术进一步研究差异基因胸腺素β4在电针镇痛中的作用。选取三对纯种波尔山羊（30±2 kg）,按照配对试验方法进行同窝配对,每对山羊中一只接受电针为电针组,另一只接受对照处理为对照组。电针组山羊接受1次电针（60Hz,30min）。采用钾离子透入法测定山羊痛阈。记录电针前和电针0 h和4 h后的山羊痛阈,计算痛阈变化率。在4 h测完痛阈后,6只山羊迅速处死,取PAG分别进行测序建库。利用生物信息学方法对电针组与对照组的差异表达基因进行功能富集分析。在q PCR验证试验中,选取测序结果中表达量高的15个差异基因进行验证。选取差异基因胸腺素β4进行进一步研究。在探索胸腺素β4（Tβ4）在电针镇痛中的作用试验中,分别建立生理模型和炎症模型进行侧脑室注射。在生理模型试验中,选取72只SD大鼠（250±20 g）随机分为两组（n=36）,即电针组与对照组,各组大鼠分别接受侧脑室注射1μg/μL Tβ4、0.1μg/μL Tβ4、0.01μg/μL Tβ4、Lip-Tβ4-si RNA（Tβ4沉默用si RNA）、Lip-C-si RNA（negative si RNA）或PBS（每6只大鼠注射同一种药物）。注射后,电针组大鼠接受1次电针。每组大鼠注射前和电针后测定鼠甩尾反射时间（TFL）,计算TFL变化率。在炎症模型试验中,选取54只SD大鼠（250±20 g）随机分为三组,即炎症电针组（CFA+EA,n=24）、炎症对照组（CFA+CON,n=24）和生理对照组（Saline+CON,n=6）。CFA+EA或CFA+CON组大鼠足底注射CFA（0.1m L/只）,各组大鼠分别接受侧脑室注射0.1μg/μL Tβ4、Lip-Tβ4-si RNA、Lip-C-si RNA或PBS注射（每6只大鼠注射同一种药物）。生理对照组大鼠足底注射生理盐水（0.1m L/只）,侧脑室注射PBS。CFA+EA组分别于0 d、2 d、4 d、6 d、8 d、10 d和13 d施予电针。所有大鼠于足底注射药物前和注射后1 d、3 d、7 d、14 d测定足底机械痛阈（PWT）,计算PWT痛阈变化率。结果显示,电针后电针组山羊痛阈显着高于对照组山羊痛阈（p<0.05）。测序分析得到2651个差异表达基因（DEGs）,其中1709个基因上调,852个基因表达下调。这些差异基因富集在30条KEGG pathways和149条GO terms。进一步q PCR验证结果显示,甲硫脑啡肽、阿黑皮素原、前强啡肽原、κ-阿片肽受体、谷氨酸受体、兴奋性氨基酸转运体1、γ氨基丁酸B型受体、酸性纤维蛋白、芳香族氨基酸脱羧酶、突触结合蛋白1、安定绑定蛋白、前蛋白转换酶1抑制剂、胸腺素β4、胸腺素β10和前列腺F合酶基因的表达趋势与高通量测序结果一致,验证了测序结果的可靠性。测序结果提示,电针上调的谷氨酸受体及转运体、γ氨基丁酸受体及转运体、丝裂原激活的蛋白激酶、突触结合蛋白可能通过谷氨酸能突触、γ氨基丁酸能突触、MAPK、核糖体、泛素蛋白体等途径参与调节针刺镇痛。生理模型侧脑室注射结果显示,EA+Tβ4组大鼠TFL显着低于EA+PBS组大鼠TFL（p<0.05）。在炎性模型中,CFA+EA+Tβ4组大鼠PWT在注射CFA后第1 d、7 d和14 d都显着低于CFA+EA+PBS组大鼠PWT（p<0.05）。CFA+EA+Lip-Tβ4-si RNA组大鼠PWT在注射CFA后第1 d、3 d、7 d和14 d都显着低于CFA+EA+PBS组大鼠PWT（p<0.05）。提示Tβ4在生理和炎症情况下都参与调节电针镇痛。
黄培赞[4]（2017）在《急性乙醇中毒对大鼠创伤性脑损伤后GFAP、AQP4表达的影响》文中指出目的:探讨急性乙醇中毒对大鼠创伤性脑损伤（TBI）后血清及脑组织神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、水通道蛋白4（AQP4）表达的影响,并分析其分子生物学机制。方法:45只大鼠根据体质量按随机分组法分为实验1,2组及对照组,共3组,每组各有15只。实验1,2组大鼠分别给予乙醇浓度（乙醇用蒸馏水稀释）为30%、60%,剂量为1 ml/100g（体重）液体灌胃,同时对照组给予相同剂量的蒸馏水灌胃。于灌胃后1h后采用改进的Feeney’ s自由落体硬膜外撞击法将各组大鼠制作成创伤性脑损伤的模型。（1）在造成TBI后1h、6h、24h,分别从各组中随机抽取5只大鼠抽血,进行高速离心后行血清中GFAP、AQP4的含量测定。（2）各组在抽血后将大鼠采用断头法处死,并迅速完整取出大脑,行脑组织中GFAP、AQP4的含量测定。结果:（1）实验1,2组比对照组大鼠血清及脑组织中AQP4和GFAP的表达均有显着增加（p<0.05）。（2）实验2组比1组大鼠血清及脑组织中AQP4和GFAP的表达增加更明显（p<0.05）。（3）随着伤后时间延长,三组大鼠血清及脑组织中AQP4和GFAP的表达越明显（24h内）。结论:急性乙醇中毒可加重大鼠TBI的程度,且血液中乙醇浓度越高,伤后时间越长,TBI的程度越严重。
孙丽莉[5]（2016）在《头穴透刺预处理对脑缺血再灌注大鼠内源性神经干细胞的影响》文中研究指明目的:根据中医“治未病”思想,研究探讨头穴透刺预处理对大鼠脑缺血再灌注后内源性NSCs的增殖、分化以及对BDNF、b FGF的影响,明确头穴透刺预处理对脑缺血性卒中的预防与治疗作用,从干细胞这一角度,探讨头穴透刺预处理预防缺血性脑卒中的可能机制。方法:实验选取雄性Wistar大鼠120只,采用随机数字表方法将大鼠随机分为:假手术组、模型组、实验组,每组各40只,每组又分为3、7、14、21d四个时间点,每个时间点10只;采用改良线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型（MCAO）,实验组于造模前连续针刺7d,针刺选取百会透双侧太阳穴,每次针刺治疗时间为20分钟,针刺治疗后造模,模型组仅造模,不做其他处理,假手术组除不插线外,余操作同模型组;通过腹腔注射Brdu来标记增殖的细胞,分别于3、7、14、21d四个时间点取材来对实验对象进行观察研究。采用神经症状学评分确定模型成功标准,通过TTC染色和HE染色来了解脑缺血再灌注后脑组织的病理学改变。通过免疫组化观察Brdu、Nestin阳性细胞,确定NSCs的增殖情况,通过免疫荧光化学技术观察Brd U/GFAP、Brd U/NSE双标细胞,确定NSCs分化情况。免疫组化法观察BDNF、b FGF变化,确定对NSCs增殖的可能机制。结果:1.实验组与模型组各个时间点比较神经功能缺损评分均降低,实验组在7、14、21d点神经功能评分与模型组比较具有显着性差异（P<0.05）。2.实验组各个时间点与模型组比较Brd U免疫阳性细胞表达均增强,并随时间变化,3d时开始增加,7d时达到高峰,14d开始下降,各个时间点阳性细胞数量与模型组相比,有显着性差异（P<0.05）。3.实验组Nestin免疫阳性细胞表达明显增强,3d时开始增加,7d时达到高峰,7、14、21d与模型组阳性细胞数相比,有显着性差异（P<0.05）。4.实验组Brd U/GFAP、Brd U/NSE免疫荧光双标阳性细胞明显增加,于缺血再灌注后7d达高峰,14d开始下降,与模型组7、14d比较有显着性差异（P<0.05）。5.实验组BDNF的表达明显增强,于缺血再灌注21d时达高峰,与模型组7、14、21d相比有显着性差异（P<0.05）。6.实验组b FGF的表达明显增强,于7d时达高峰。与模型组各个时间点比较有显着性差异（P<0.05）。结论:1、头穴透刺预处理能显着降低脑缺血再灌注后大鼠神经功能症状评分,促进其神经功能恢复。2、头穴透刺预处理能显着促进脑缺血再灌注后大鼠脑组织Brdu、Nestin、Brd U/GFAP、Brd U/NSE表达增加,从而促进NSCs的增殖和分化。3、头穴透刺预处理能促进脑缺血再灌注后大鼠神经营养因子b FGF、BDNF的表达,从而有助于神经功能的恢复。
史文心[6]（2016）在《补阳还五汤联合NGF对短暂性脑缺血再灌注大鼠海马神经递质影响研究》文中研究指明目的:通过研究补阳还五汤联合NGF对短暂性脑缺血再灌注模型大鼠海马神经递质改变,为临床治疗短暂性脑缺血疾病提供更多的理论依据。材料与方法:实验选用Wistar雄性成年大鼠280只,体重220280克,复合颗粒饲料喂养,可自由活动,自由饮食、饮水。大鼠适应性喂养7天后,按照随机数字表随机分成7组:正常组（n=40）、模型对照组（n=40）、模型组（n=40）、模型立即取材组（n=40）、治疗组（n=120）其中包括:中药组（A组;n=40）、NGF组（B组;n=40）、中药+NGF组（C组;n=40）。采用无损伤动脉夹夹闭双侧颈总动脉10min,然后松开动脉夹恢复血液灌注10min,再夹闭10min,这样反复3次制备大鼠短暂性脑缺血再灌注模型。术后治疗A组灌胃给予大鼠补阳还五汤（1.2ml/100g）·d;治疗B组术后肌肉注射NGF（NGF 30μg溶于2ml生理盐水）每天1次;治疗C组大鼠灌胃给予补阳还五汤（1.2ml/100g）·d并且肌肉注射NGF每天1次;模型组、模型对照组灌胃给予大鼠等量0.9%生理盐水（1.2ml/100g）·d;连续给药7d。进行脑卒中指数评分,观察海马组织形态学改变,采用酶组织化学方法测大鼠海马NOS、ACh E平均光密度值及采用酶联免疫吸附试验测定海马组织5-HT、IL-6的浓度。结果:术后模型组和治疗各组大鼠均出现运动减少、毛发蓬乱、反应迟钝、嗜睡及眼睑下垂等卒中症状。光镜下观察,模型组海马神经元出现明显损伤,海马锥体细胞排列紊乱,胞体边界模糊,细胞体积缩小呈三角形或不规则形,与周围组织间隙明显增大,大量神经元脱失,难见形态完整的神经元,海马组织内有大量散乱的细胞碎片。与正常组和模型对照组比较,模型组大鼠海马神经元数量显着减少（P<0.01）,模型组大鼠海马NOS平均光密度值、IL-6浓度显着增加（P<0.01）,ACh E平均光密度值、5-HT浓度显着减少（P<0.01）。与模型组比较,治疗各组神经元数量均有明显增加（P<0.01）,大鼠海马NOS平均光密度值、IL-6浓度显着减少（P<0.01）,ACh E平均光密度值、5-HT浓度显着增加（P<0.01）。结论:NOS、ACh E、5-HT和IL-6均参与了短暂性脑缺血再灌注病理损伤过程,治疗各组用药可减少短暂性脑缺血再灌注后对神经元的损伤,其中治疗C组疗效显着。
徐玉东,刘艳艳,王宇,尹磊淼,杨永清[7]（2016）在《针灸调节循环系统功能的国内外研究进展》文中指出心脏和血管功能障碍会导致高血压、冠心病、心肌缺血等循环系统疾病,临床实践和实验研究均表明针灸对循环系统功能具有多层面的调节作用。该文将近年来国内外学者对针灸调节循环系统功能及其生物学机制的研究进行整理分析,以促进对针灸科学内涵更深入和系统的认识,并为创新循环系统疾病的针灸防治研究提供文献参考。
郑妍研[8]（2015）在《头穴透刺对脑缺血大鼠神经干细胞移植后增殖、分化和迁移的影响》文中指出目的:通过建立脑缺血再灌注大鼠模型（MCAO）,研究探讨头穴透刺对脑缺血大鼠神经干细胞（neural stem cells,NSCs）移植后增殖、分化和迁移情况,及其对神经营养因子BDNF和细胞生长因子bFGF表达的影响,明确头穴透刺治疗缺血性卒中的作用机制,为头穴透刺治疗缺血性卒中提供新的理论依据。方法:实验采用改良线栓法制备MCAO,将160只实验大鼠随机分为假手术组、模型组、移植组、头穴透刺组,每组40只。假手术组结扎颈总动脉和颈外动脉,不插线;模型组仅制备模型;移植组于造模3天后侧脑室移植NSCs;头穴透刺组于NSCs移植24小时后对其采取干预措施,百会穴透刺太阳穴。分别于第3天、7天、14天、21天对各组大鼠进行观察。利用NSS评估神经功能缺失状况;利用TTC染色和HE染色了解脑梗塞后脑组织的病理学改变;通过免疫组化法检测Brdu阳性细胞、Nestin阳性细胞随不同的时间点的动态表达,描述NSCs增殖迁移轨迹;应用免疫组化技术,进行BDNF和bFGF免疫组化显色;Brdu/GFAP、BrdU/NSE荧光双标法观察细胞分化情况。结果:1.模型组、移植组和头穴透刺组大鼠神经功能缺失评分均随时间推移有所下降,头穴透刺组7天、14天、21天与模型组相同时间点比较评分下降,具有统计学意义（P<0.05）。2.头穴透刺组BrdU阳性细胞3天时开始增加,14天时到达高峰（P<0.05）,头穴透刺组14天、21天较移植组14天、21天BrdU阳性细胞增加,具有统计学意义（P<0.05）。3.头穴透刺组Nestin免疫阳性细胞3天开始增加,7天时达到高峰,头穴透刺组14天、21天Nestin阳性细胞数量较移植组14天、21天明显增加,具有统计学意义（P<0.05）。4.头穴透刺组3天、7天、14天较移植组相应时间点Brdu/GFAP阳性细胞增多,具有统计学意义（P<0.05）;头穴透刺组7天、14天较移植组7天、14天BrdU/NSE阳性细胞增多,具有统计学意义（P<0.05）。5.头穴透刺可以促进脑缺血后BDNF的表达,头穴透刺组14天、21天较移植组14天、21天BDNF阳性细胞表达增多,具有统计学意义（P<0.05）,21天BDNF阳性细胞的表达达到高峰（P<0.05）。6.头穴透刺可以促进脑缺血后bFGF免疫阳性细胞增多,头穴透刺组7天、14天、21天较移植组相同时间点bFGF免疫阳性细胞表达增加,有统计学意义（P<0.05）。结论:1.头穴透刺能促进脑缺血大鼠NSCs移植后神经功能缺损的改善。2.头穴透刺能促进移植后的NSCs向神经元细胞和神经胶质细胞分化,并能促进移植后的NSCs增殖及神经营养因子BDNF、bFGF的表达。3.头穴透刺与单独神经干细胞移植比较,具有促进移植后的神经干细胞迁移,使其呈现多方向迁移路径的作用。4.头穴透刺通过促进移植后神经干细胞增殖分化及神经营养因子BDNF、bFGF的表达,从而增强了NSCs移植治疗脑缺血的作用。
吴开春[9]（2014）在《健脾益智法对MCAO大鼠AchE、iNOS、L-ENK的影响》文中指出本文对古今中外资料进行收集整理,并综合各家所论,基于“脾脑相关”理论,从理论和实验的角度,探讨健脾益智法对缺血性脑卒中的治疗作用,为临床寻求治疗缺血性脑卒中的有效方药提供可靠的理论和实验依据。理论研究部分,基于中医“脑为髓海”,“脑藏元神,主神明,总统诸神”理论,从五藏神和情志理论出发,探讨了脑之元神对脾胃的调控作用,及脾作为后天之本,气血生化之源,为元神充分发挥提供了物质基础,作为气机之枢在调衡情志上的重要性,阐述了脾脑之间的相关性。并从该论点出发,深入分析探讨了健脾益智法在缺血性脑卒中治疗上的重要作用,确立了“健脾益智法”为治疗缺血性脑卒中的基本法则。在既往成果的基础上,设立动物实验以期进一步揭示健脾益智法治疗缺血性脑卒中的作用机制。实验研究部分,本实验建立大脑中动脉栓塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）大鼠模型,将大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、西药组、中药组五组。观察健脾益智胶囊对MCAO模型大鼠行为学的影响,并检测MCAO模型大鼠海马区及小肠壁乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase,AchE）、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS,NOS2）、亮氨酸脑啡肽Cleucine-enkephalin, L-ENK, L-EK)等指标变化,以期揭示健脾益智胶囊对缺血性脑卒中的治疗作用机理。研究结果显示,中药组大鼠经过治疗后,在水迷宫实验中潜伏期变短,大鼠跳台实验中犯错受电击次数减少。海马与小肠壁中AchE阳性细胞数均明显增多,iNOS、L-ENK阳性细胞数明显减少,与模型组比较差异显着（P<0.05）,提示健脾益智胶囊可能通过增加胆碱能神经元数量发挥治疗作用；抑制海马内iNOS、L-ENK的表达,而保护局部神经元,发挥其治疗缺血性脑卒中的作用。
殷韵[10]（2014）在《活血开窍汤对大鼠脑缺血再灌注损伤血—脑屏障及S100β和claudin-5的影响》文中研究说明背景与目的脑血管病是威胁人类尤其是中老年人健康的常见病、多发病,具有高发病率、高病死率、高致残率和高复发率等特点。缺血后继发脑损伤是使患者病情加重和影响预后的重要原因,其损伤机制比较复杂,抑制缺血再灌注损伤研究取得的伤是治疗脑血管疾病的重要环节。今年来,国内外研究者对脑缺血再灌注损伤的病理生理机制的研究取得了一定的进展,但是仍缺乏具有针对性的临床治疗策略[1]。活血开窍汤是由导师李平教授从多年临床经验中得出的治疗缺血性脑卒中的有效方剂,由天麻、川芎、葛根、丹参、地龙、牛膝、远志、寄生和赤芍组成。通过多年的临床实践证明,此方具有活血开窍、通络补肾的作用,在治疗脑血管疾病方面具有独特的疗效。本实验通过观察MCAO大鼠脑组织中Claudin-5和血清中S100β的变化,来探讨活血开窍汤对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用及其机制,从而进一步为临床用药提供实验理论和实验依据。方法本课题选用雄性成年SD大鼠为实验对象,研究活血开窍汤对局灶性脑缺血再灌注损伤的保护机制。我们将大鼠随机分为假手术组、模型组、活血开窍汤治疗组（包括不同时间点干预3亚组）。各组在相同环境下分笼饲养,造模完成后按设定的时间点给药,治疗组给予活血开窍汤22mg/100mg/d灌胃,假手术和模型组分别给予等量的生理盐水灌胃,各组每天灌胃1次,连续给药灌胃7天。分别于给药后6h、24h、72h以及第7d从大鼠眼底静脉丛采血3mI检测血清S100β含量,处死前两小时从尾静脉注射EB溶液以观察BBB通透性变化,另采取心脏灌注的方法固定大脑,用于免疫组化观察Claudin-5蛋白含量的变化。结果：经实验观察,与对照组相比,活血开窍汤组II组、川组大鼠脑缺血侧纹状体中EB含量和血清中S100β明显低于模型对照组（P<0.05）,而Claudin-5含量相对较高（P<0.01）。活血开窍汤I组与模型对照组相比,差异不具有统计学意义（P>0.05）。活血开窍汤II组与川组相比,差异不具有统计学意义（P>0.05）。结论：活血开窍汤II组和Ⅲ组可以减轻缺血再灌注大鼠BBB对EB的通透性,降低大鼠大脑纹状体中EB含量以及血清中S100β的含量,且可以有效保护脑缺血事件发生紧密连接蛋白Claudin-5蛋白的破坏从而保护缺血再灌注大鼠血脑屏障。实验结果亦表明,在MCAO后2小时给药组大鼠大脑纹状体中EB含量和血清中S100β含量比24小时组和48小时组高,而大脑皮层中Claudin-5阳性表达率偏低。这表明,在急性期给予活血开窍汤治疗,对血脑屏障的保护作用不明显。结果还表明活血开窍汤Ⅱ组和Ⅲ组差别不具有统计学意义,这表明尚不能证明在非急性期越早给予活血开窍汤治疗对预后作用越明显。
二、兔局灶脑缺血后内源性阿片肽含量变化（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、兔局灶脑缺血后内源性阿片肽含量变化（论文提纲范文）
（1）δ阿片肽DADLE对全脑缺血的神经保护及其自噬调控机制研究（论文提纲范文）
| 论文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1. 缺血性脑卒中及其相关损伤机制 |
| 1.1. 缺血性脑卒中 |
| 1.2. 缺血性脑卒中相关损伤机制 |
| 2. 自噬在脑缺血中的作用 |
| 2.1. 自噬 |
| 2.2. 自噬对脑缺血的影响 |
| 2.3. AMPK在脑缺血中的作用 |
| 2.4. AMPK介导自噬在脑缺血中的作用 |
| 3. Delta阿片受体及其神经保护作用 |
| 3.1. delta阿片受体 |
| 3.2. DOR的神经保护作用及其相关机制 |
| 第二章 DOR活化对大鼠全脑缺血损伤后细胞自噬的影响及其分子机制研究 |
| 1. 摘要 |
| 2. 前言 |
| 3. 材料与方法 |
| 3.1. 试剂耗材与仪器 |
| 3.2. 实验动物 |
| 3.3. 4-VO法构建全脑缺血损伤模型 |
| 3.4. 脑组织切片制备 |
| 3.5. 冰冻切片 |
| 3.6. 尼氏染色 |
| 3.7. 免疫荧光 |
| 3.8. 海马组织蛋白提取 |
| 3.9. Western blotting |
| 3.10. 统计分析 |
| 4. 实验结果 |
| 4.1. 构建大鼠全脑缺血损伤模型 |
| 4.2. DADLE缺血后处理提高DOR水平 |
| 4.3. DOR活化促进缺血后细胞自噬 |
| 4.4. DOR介导自噬改善缺血神经元存活 |
| 4.5. DOR介导自噬影响星形胶质细胞活化 |
| 4.6. DOR活化后激活AMPK/mTOR/ULK1通路 |
| 4.7. AMPK参与DOR介导神经保护作用 |
| 5. 讨论 |
| 第三章 DOR活化对SH-SY5Y细胞OGD/R损伤后自噬的影响及其分子机制研究 |
| 1. 摘要 |
| 2. 前言 |
| 3. 材料方法 |
| 3.1. 试剂耗材与仪器 |
| 3.2. SH-SY5Y细胞培养与冻存复苏 |
| 3.3. 糖氧剥夺再灌注(OGD/R)细胞模型构建 |
| 3.4. 细胞活性实验 |
| 3.5. 细胞蛋白提取 |
| 3.6. Western blotting |
| 3.7. 细胞自噬流观察 |
| 3.8. MDC染色 |
| 3.9. 统计分析 |
| 4. 实验结果 |
| 4.1. 构建SH-SY5Y细胞OGD/R模型 |
| 4.2. 激活DOR减轻细胞OGD/R损伤 |
| 4.3. DADLE处理提高OGD/R损伤后DOR水平 |
| 4.4. DOR促进OGD/R损伤后细胞自噬 |
| 4.5. DOR活化对OGD/R损伤后AMPK/mTOR/ULK1通路的影响 |
| 4.6. AMPK对OGD/R损伤后DOR介导自噬的影响 |
| 5. 讨论 |
| 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 作者简历及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（2）JAK2/STAT3和胸腺素β4分别在电针内脏镇痛与耐受中的作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表(ABBREVIATION) |
| 第一章 电针镇痛的研究进展 |
| 1 前言 |
| 2 电针躯体镇痛的中枢分子机制 |
| 3 电针内脏镇痛的研究进展 |
| 3.1 内脏超敏的研究进展 |
| 3.2 JAK/STAT信号路通与内脏超敏 |
| 3.3 内脏超敏的治疗 |
| 3.4 电针缓解内脏超敏 |
| 4 电针耐受的研究进展 |
| 4.1 电针耐受 |
| 4.2 电针耐受的中枢机制 |
| 4.3 参与电针耐受的中枢神经递质/调质 |
| 4.4 胸腺素β4 与神经保护 |
| 5 本研究的内容、目的与意义 |
| 5.1 研究内容 |
| 5.2 研究目的及意义 |
| 6 研究创新点 |
| 第二章 TNBS诱导内脏痛觉超敏模型的建立 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要仪器 |
| 2.2 主要药品试剂 |
| 2.3 主要溶液及试剂的配制 |
| 2.4 试验动物及分组 |
| 2.5 回肠炎手术 |
| 2.6 结直肠扩张引起的内脏运动反应 |
| 2.7 症状和疾病活动指数 |
| 2.8 样品采集 |
| 2.9 盲肠炎的评估 |
| 2.10 组织匀浆的制备 |
| 2.11 ELISA检测盲肠组织中MPO和细胞因子水平 |
| 2.12 背根神经节中CGRP免疫组织化学染色 |
| 2.13 统计学方法 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 症状观察及疾病活动度指标 |
| 3.2 回肠组织大体病变评分 |
| 3.3 回肠组织微观病变评分 |
| 3.4 背根神经节中CGRP的表达水平 |
| 3.5 回肠组织MPO及细胞因子含量 |
| 3.6 结直肠扩张引起的内脏运动反应 |
| 3.7 内脏运动反应与CGRP水平的相关性 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三章 疼痛下行调制系统中JAK2/STAT3 信号通路在电针缓解山羊回肠炎性痛觉超敏中的作用 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要仪器 |
| 2.2 主要药品试剂 |
| 2.3 主要溶液及试剂的配制 |
| 2.4 试验动物与分组 |
| 2.5 回肠炎手术 |
| 2.6 回肠炎的评估 |
| 2.7 组织匀浆的制备 |
| 2.8 ELISA检测盲肠组织中MPO水平 |
| 2.9 电针 |
| 2.10 结直肠扩张测试 |
| 2.11 样品采集 |
| 2.12 免疫组织化学染色 |
| 2.13 免疫印迹 |
| 2.14 实时荧光定量PCR |
| 2.15 数据统计及分析 |
| 3 结果及分析 |
| 3.1 山羊回肠炎症 |
| 3.2 电针对山羊内脏运动反应的影响 |
| 3.3 电针治疗对山羊疼痛行为反应的影响 |
| 3.4 电针对山羊脑和脊髓中JAK2/STAT3 信号通路免疫反应的影响 |
| 3.5 电针对山羊脊髓中JAK2/STAT3 表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第四章 胸腺素β4参与大鼠慢性电针耐受中 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 主要仪器 |
| 2.2 主要药品试剂 |
| 2.3 试验动物及分组 |
| 2.4 siRNA剂量与作用时间摸索 |
| 2.5 侧脑室注射 |
| 2.6 电针 |
| 2.7 甩尾潜伏期测量 |
| 2.8 样本采集 |
| 2.9 免疫印迹 |
| 2.10 实时荧光定量PCR |
| 2.11 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 反复电针对Tβ4 表达和TFL变化率的影响 |
| 3.2 Tβ4 抗体对电针引起的大鼠TFL变化率的影响 |
| 3.3 siRNA剂量与作用时间摸索 |
| 3.4 Tβ4 siRNA对电针引起的大鼠TFL变化率的影响 |
| 3.5 Tβ4 siRNA对大鼠脑区阿片肽和抗阿片肽及其相关受体蛋白水平的影响 |
| 3.6 Tβ4 siRNA对大鼠脑区阿片肽类和抗阿片肽类以及相关受体mRNAs的影响 |
| 4 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 附录 作者简介 |
| 致谢 |
（3）针刺诱导神经环路激活及中脑导水管周围灰质基因差异表达研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表(ABBREVIATION) |
| 第一章 电针镇痛的中枢机制 |
| 1 前言 |
| 2 影响针刺镇痛的因素 |
| 2.1 电针穴位 |
| 2.2 电针参数 |
| 2.3 种属和个体差异 |
| 2.4 其他影响针刺镇痛的因素 |
| 3 针刺镇痛的研究方法 |
| 3.1 模型建立 |
| 3.2 物理学方法 |
| 3.3 生物化学和药理学方法 |
| 3.4 生物信息学方法 |
| 4 针刺镇痛的中枢机制 |
| 4.1 针刺镇痛的体液机制 |
| 4.1.1 内源性阿片肽及其受体 |
| 4.1.2 谷氨酸和γ氨基丁酸受体 |
| 4.2 针刺疼痛是中枢信号整合的结果 |
| 5 胸腺素β4研究进展 |
| 6 本研究的内容、目的与意义 |
| 6.1 研究内容 |
| 6.2 研究目的及意义 |
| 7 研究创新点 |
| 第二章 针刺不同穴位激活的神经环路研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要仪器 |
| 2.2 主要药品试剂 |
| 2.3 主要溶液及试剂的配制 |
| 2.4 试验动物及分组 |
| 2.5 电针 |
| 2.6 痛阈测定 |
| 2.7 镇痛相关核团定位方法及取样 |
| 2.8 C-Fos免疫组织化学染色 |
| 2.8.1 石蜡组织切片的制作 |
| 2.8.2 免疫组织化学操作流程 |
| 2.8.3 免疫组织阳性细胞观测及计数 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 山羊痛阈变化率 |
| 3.2 山羊中枢c-Fos的表达水平 |
| 4 讨论 |
| 4.1 影响电针镇痛的因素 |
| 4.2 C-Fos作为针刺激活神经核团的标记物 |
| 4.3 影响电针激活神经核团的因素 |
| 4.4 电针刺激不同穴位激活的共同神经环路 |
| 5 小结 |
| 第三章 电针山羊中脑导水管周围灰质基因差异表达研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要仪器 |
| 2.2 主要药品试剂 |
| 2.3 转录组测序 |
| 2.3.1 试验动物和分组 |
| 2.3.2 电针 |
| 2.3.3 痛阈测定 |
| 2.3.4 样品采集 |
| 2.3.5 总RNA提取与质量检测 |
| 2.3.6 Solexa高通量测序 |
| 2.3.7 参考序列比对 |
| 2.3.8 测序数据质量评估 |
| 2.3.9 测序结果分析 |
| 2.3.10 荧光定量PCR |
| 2.3.11 数据统计分析 |
| 2.4 胸腺素β4功能验证 |
| 2.4.1 试验动物 |
| 2.4.2 电针 |
| 2.4.3 痛阈测定 |
| 2.4.4 侧脑室模型 |
| 2.4.5 药物准备 |
| 2.4.6 侧脑室注射方法 |
| 2.4.7 试验设计 |
| 2.4.8 数据统计分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 转录组测序 |
| 3.1.1 山羊痛阈变化率 |
| 3.1.2 组织总RNA鉴定 |
| 3.1.3 测序整体结果分析 |
| 3.1.4 基因表达量分析 |
| 3.1.5 样品相关性分析 |
| 3.1.6 表达差异基因分析 |
| 3.1.7 差异表达的神经肽基因 |
| 3.1.8 差异基因功能富集分析 |
| 3.1.9 KEGG富集分析 |
| 3.1.10 荧光定量PCR |
| 3.2 胸腺素β4功能验证 |
| 3.2.1 药物准备 |
| 3.2.2 生理大鼠侧脑室注射 |
| 3.2.3 炎性痛大鼠侧脑室注射 |
| 4 讨论 |
| 4.1 试验设计 |
| 4.2 差异基因功能分析 |
| 4.3 侧脑室注射 |
| 5 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 附录 论文补充材料 |
| 个人简介 |
| 致谢 |
（4）急性乙醇中毒对大鼠创伤性脑损伤后GFAP、AQP4表达的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 4. 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 致谢 |
（5）头穴透刺预处理对脑缺血再灌注大鼠内源性神经干细胞的影响（论文提纲范文）
| 英文缩略语表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 文献综述 |
| 1.祖国医学与脑缺血 |
| 2.针灸预处理治疗中风的研究概况 |
| 3.神经干细胞与脑梗死的研究进展 |
| 实验研究 |
| 1.材料与方法 |
| 2.实验方法 |
| 3.指标检测 |
| 结果 |
| 1.头穴透刺预处理后脑缺血再灌注大鼠神经功能缺损变化情况 |
| 2.头穴透刺预处理后脑缺血再灌注大鼠病理学改变情况 |
| 3.头穴透刺预处理后脑缺血再灌注大鼠神经干细胞增殖分化情况 |
| 讨论 |
| 1.选题依据 |
| 2.选穴依据 |
| 3.头穴透刺预处理对Brd U阳性细胞在神经干细胞增殖过程中表达的影响 |
| 4.头穴透刺预处理对nestin阳性细胞在神经干细胞增殖分化过程中表达的影响 |
| 5.头穴透刺预处理对Brd U/GFAP、Brd U/NSE免疫荧光双标阳性细胞在神经干细胞增殖分化过程中表达的影响 |
| 6.头穴透刺预处理对神经营养因子BDNF、b FGF表达的影响 |
| 7.头穴透刺预处理对脑缺血再灌注损伤后神经功能缺损的改善作用 |
| 8.问题与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 攻读硕士期间发表的论文 |
| 致谢 |
（6）补阳还五汤联合NGF对短暂性脑缺血再灌注大鼠海马神经递质影响研究（论文提纲范文）
| 中文论着摘要 |
| 英文论着摘要 |
| 英文缩略语 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果（附论文图片） |
| 讨论 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 综述 脑缺血再灌注损伤发生机制的中西医认识进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（7）针灸调节循环系统功能的国内外研究进展（论文提纲范文）
| 1针灸调节循环系统功能的国内研究进展 |
| 1.1针灸对心脏活动的调节作用 |
| 1.1.1针灸对心率的调节作用 |
| 1.1.2针灸对心律的调节作用 |
| 1.1.3针灸对心肌缺血性损害的保护作用 |
| 1.2针灸对血管功能的调节作用 |
| 1.3针灸对血压的调整作用 |
| 1.4针灸对血液成分及流变性的调节 |
| 2针灸调节循环系统功能的国外研究进展 |
| 2.1对心血管功能的调节机制 |
| 2.2对心率的调节机制 |
| 2.3对血压的调节机制 |
| 3讨论 |
（8）头穴透刺对脑缺血大鼠神经干细胞移植后增殖、分化和迁移的影响（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 文献综述 |
| 1.祖国医学与脑缺血 |
| 2.神经干细胞移植治疗脑缺血的研究进展 |
| 实验研究 |
| 1.材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.指标检测 |
| 结果 |
| 1.头穴透刺对脑缺血大鼠神经功能缺损的影响 |
| 2.头针对脑缺血大鼠病理形态学的影响 |
| 3.免疫组化结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附表 |
| 附图 |
| 攻读硕士期间发表的论文 |
（9）健脾益智法对MCAO大鼠AchE、iNOS、L-ENK的影响（论文提纲范文）
| 目录 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 理论研究 |
| 1 脑为元神之府 |
| 1.1 脑的生理结构 |
| 1.2 脑藏元神,主神明,总众神 |
| 2 脑之元神布藏五脏 |
| 2.1 心藏神 |
| 2.2 肺藏魄 |
| 2.3 肝藏魂 |
| 2.4 脾藏意 |
| 2.5 肾藏志 |
| 2.6 五神关系 |
| 2.7 神志活动的整体性 |
| 3 脑之元神与脾胃的相关理论 |
| 3.1 脑之元精与脾胃 |
| 3.2 元神的运动与脾胃 |
| 3.3 脑之元神对脾胃的调控作用 |
| 4 从现代研究角度看元神与脾胃关系 |
| 5 健脾益智法治疗缺血性脑卒中 |
| 5.1 健脾益智治法疗缺血性脑卒中的理论及实验依据 |
| 5.2 健脾益智胶囊方药分析 |
| 第二章 实验研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 免疫组化数据统计 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 一般情况 |
| 2.2 神经行为学评分 |
| 2.3 水迷宫实验结果 |
| 2.4 跳台实验结果 |
| 2.5 生化指标测定 |
| 3 分析与讨论 |
| 3.1 乙酰胆碱酯酶(AchE) |
| 3.2 诱导型一氧化氮合酶(iNOS) |
| 3.3 亮氨酸脑啡肽(L-ENK) |
| 3.4 行为学指标 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 作者简历 |
（10）活血开窍汤对大鼠脑缺血再灌注损伤血—脑屏障及S100β和claudin-5的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 1、实验材料和方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2、标本采集与指标测定 |
| 2.1 标本采集 |
| 2.2 指标测定 |
| 2.3 统计学分析 |
| 3、 结果 |
| 3.1 大鼠行为学评分 |
| 3.2 BBB通透性变化 |
| 3.3 血清中S100 β水平变化 |
| 3.4 大脑皮层中claudin-5阳性表达 |
| 4、 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
四、兔局灶脑缺血后内源性阿片肽含量变化（论文参考文献）
- [1]δ阿片肽DADLE对全脑缺血的神经保护及其自噬调控机制研究[D]. 赖泽林. 华东师范大学, 2020(11)
- [2]JAK2/STAT3和胸腺素β4分别在电针内脏镇痛与耐受中的作用研究[D]. 万娟. 华中农业大学, 2019
- [3]针刺诱导神经环路激活及中脑导水管周围灰质基因差异表达研究[D]. 胡曼丽. 华中农业大学, 2018(01)
- [4]急性乙醇中毒对大鼠创伤性脑损伤后GFAP、AQP4表达的影响[D]. 黄培赞. 南京医科大学, 2017(06)
- [5]头穴透刺预处理对脑缺血再灌注大鼠内源性神经干细胞的影响[D]. 孙丽莉. 黑龙江省中医药科学院, 2016(02)
- [6]补阳还五汤联合NGF对短暂性脑缺血再灌注大鼠海马神经递质影响研究[D]. 史文心. 辽宁中医药大学, 2016(03)
- [7]针灸调节循环系统功能的国内外研究进展[J]. 徐玉东,刘艳艳,王宇,尹磊淼,杨永清. 上海针灸杂志, 2016(01)
- [8]头穴透刺对脑缺血大鼠神经干细胞移植后增殖、分化和迁移的影响[D]. 郑妍研. 黑龙江省中医药科学院, 2015(05)
- [9]健脾益智法对MCAO大鼠AchE、iNOS、L-ENK的影响[D]. 吴开春. 福建中医药大学, 2014(09)
- [10]活血开窍汤对大鼠脑缺血再灌注损伤血—脑屏障及S100β和claudin-5的影响[D]. 殷韵. 天津医科大学, 2014(01)