一、绵羊慢性进行性肺炎调查（论文文献综述）
古努尔·吐尔逊,王登峰,杨学云,魏玉荣,李建军,孟肖潇,洪都孜·波拉提,吴建勇[1]（2020）在《梅迪-维斯纳病毒gag蛋白的原核表达及其交叉反应原性》文中研究说明为鉴定适用于中国小反刍动物慢病毒（Small ruminants lentivirus viruses,SRLVs）血清学诊断的通用蛋白标记物,本研究以梅迪-维斯纳病毒（Maedi-Visna virus,MVV）四川株为模板扩增获得gag基因序列,使用生物信息学方法分析其与中国山羊关节炎-脑炎病毒（Caprine arthritis encephalitis virus,CAEV）分离株gag蛋白氨基酸序列和抗原表位相似性,构建gag基因重组表达载体并转入BL21（DE3）宿主菌进行诱导表达,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western blotting确定其大小、分布和反应原性。结果显示,MVV gag蛋白氨基酸序列与中国CAEV分离株的相似性为74.7%～74.9%,它的11个抗原表位与CAEV gag蛋白的12个抗原表位存在较高的序列相似性,推测其可作为中国SRLVs血清学诊断的通用蛋白质标记物;SDS-PAGE检测结果显示,重组gag蛋白大小约为55 000,主要以包涵体形式存在,Western blotting显示该蛋白可与MVV和CAEV感染动物血清发生免疫反应,证实了蛋白序列分析结果。该研究结果可为研制中国SRLVs通用血清学检测技术方法奠定基础。
杜奕州[2]（2020）在《新疆南疆部分地区绵羊肺炎支原体分离培养及鉴定》文中进行了进一步梳理为初步了解新疆南疆部分地区规模化羊场支原体感染的流行情况,及该地区流行的优势菌株,20182019年间,于新疆南疆库车县、英吉沙县、巴楚县的5个规模化羊场随机采集健康以及具有呼吸道症状的绵羊鼻拭子132份,病死羔羊的肺组织样品6份。采用PCR技术对样品进行初步鉴定,选取部分代表株对其16S rRNA基因进行序列测定,并使用DNAStar、MAGE、DNAMAN软件分析其分子特征,使用邻接法构建基于16S rRNA基因的系统发育进化树;利用支原体液体培养基MTB及固体培养基MTA对样本进行病原分离培养,使用光学显微镜观察其菌落形态,进一步采用PCR方法从分子水平确定其种属。从巴楚县、库车县和英吉沙县采集的132份绵羊鼻拭子和6份肺脏组织标本中检测出绵羊肺炎支原体阳性样本20份、精氨酸支原体阳性样本16份、结膜支原体阳性样本4份,3个地区的阳性率分别为10.0%、50.0%、15.4%,总阳性率为29.0%。系统发育树分析表明,实验菌株分别与相关株同属一个大分枝,绵羊肺炎支原体与2017-318-25株亲缘关系较近、精氨酸支原体与E3.5、G230株亲缘关系较近、结膜支原体与Goat655株亲缘关系较近,绵羊肺炎支原体与精氨酸支原体均与国内分离株不属于同一分支。从40份PCR阳性样本中分离得到绵羊肺炎支原体12株,精氨酸支原体9株,未分离到结膜支原体,并扩增出与预期相符的绵羊肺炎支原体16S rRNA基因片段和支原体属特异性片段,序列分析表明绵羊肺炎支原体与GenBank中公布的绵羊肺炎支原体基因序列同源性达100%;精氨酸支原体与GenBank中公布的精氨酸支原体基因序列同源性达100%。
丁旭[3]（2020）在《绵羊慢性非进行性肺炎致病原因的研究进展》文中认为绵羊慢性非进行性肺炎属于隐性传染病的一种,会导致绵羊出现淋巴组织增生、间质性肺炎等症状。该疾病在其他国家也比较流行。研究调查发现,绵羊慢性非进行性肺炎具有较高的死亡率,会给绵羊养殖户带来严重的损失。因此,我们需要针对该疾病的致病原因进行深入的分析,制定出针对性的防治、控制措施。
张洁,曹军军,祝明松,杨亚军,王小凤,王璐,石峰[4]（2019）在《基于绵羊肺炎支原体EF-Tu蛋白间接ELISA方法的建立》文中研究说明为解决绵羊肺炎支原体感染的预防问题,建立一种简单、快速、成本低的诊断方法,构建绵羊肺炎支原体EF-Tu基因原核表达载体,诱导纯化重组蛋白并用Western blot分析其反应原性,以重组蛋白为诊断抗原,建立绵羊肺炎支原体间接ELISA检测方法,评估其特异性和灵敏性。结果表明,构建的重组蛋白纯化后,经Western blot证实具有良好的反应原性;间接ELISA反应条件优化显示,抗原稀释度为0.25μg/mL,一抗最佳稀释浓度为1∶50,最佳孵育时间为90 min,封闭液为50 g/L脱脂奶粉,二抗最佳稀释倍数为1∶8 000,最佳孵育时间为60 min,特异性与灵敏性良好;该方法与间接血凝法对100份血清进行检测,两者符合率为88.7%。说明试验建立的绵羊肺炎支原体间接ELISA检测方法可以推广使用。
倪文浩[5]（2019）在《新疆地区不同绵羊品种绵羊支原体肺炎感染率的比较研究》文中提出目的:绵羊支原体肺炎（Mycoplasma ovipneumoniae,MO）是由支原体感染引起的一种极强接触性传染病,对新疆养羊业发展危害极其严重。本研究针对该病通过血清学调查,可以了解新疆地区规模化羊场不同绵羊品种绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae of sheep）的感染情况。对候选基因NLRP3 SNP位点筛查,探究该基因位点的多态性与绵羊支原体肺炎感染率的相关性。方法:本研究对新疆南疆巴音郭楞蒙古自治州（巴州）和北疆伊犁哈萨克自治州（伊犁）的4个绵羊品种共1628只未免疫羊只的血清样本采用绵羊肺炎支原体酶联免疫吸附实验（ELISA）检测试剂盒,进行了绵羊肺炎支原体抗原和抗体血清学检测。在此试验基础上以NLRP3基因为候选基因,采用直接测序法检测该基因编码区（CDS）单核苷酸变异位点,对哈萨克羊、巴音布鲁克羊、杜泊羊和萨福克羊的遗传多态性进行分析,鉴定基因型分布规律;对错义突变位点进行绵羊支原体肺炎感染率的相关性分析。结果:通过血清学调查后发现,新疆两个地区不同绵羊品种均存在MP感染。伊犁地区绵羊MP-抗原（Ab）阳性率为20.29%、MP-抗体（Ab）阳性率为16.62%,其中哈萨克羊MP-Ag阳性率为20.04%、MP-Ab阳性率为23.22%;萨福克羊MP-Ag阳性率为20.61%、MP-Ab阳性率为8.30%。巴州地区绵羊MP-Ag阳性率为14.42%,MP-Ab阳性率为14.65%,其中巴音布鲁克羊MP-Ag阳性率为17.91%、MP-Ab阳性率为18.65%,杜泊羊MP-Ag阳性率为11.08%、MP-Ab阳性率为11.08%;萨福克羊MP-Ag阳性率为14.70%、MP-Ab阳性率为13.23%。通过对NLRP3基因编码区（CDS）SNP位点分析,筛选出14个编码区SNP位点,其中在第3外显子rs161871942位点发生错义突变,氨基酸由蛋氨酸改变为精氨酸（M645R）。NLRP3基因第3外显子rs161871942（M645R）位点在四个绵羊品种中存在三种基因型:GG、GA和AA,部分绵羊品种在该位点基因型分布存在显着差异（P<0.05）。NLRP3基因第5外显子rs403816614位点在哈萨克羊、萨福克羊和杜泊羊有三种基因型:TT、TG和GG,巴音布鲁克羊存在GG和TG基因型;哈萨克羊和萨福克羊的在该位点基因型分布与杜泊羊基因型分布均存在显着差异（P<0.05）;巴音布鲁克羊在该位点的基因型分布与杜泊羊基因型分布差异极显着（P<0.01）。NLRP3基因第8外显子rs109222749位点在哈萨克羊和巴音布鲁克羊有三种基因型:CC、CT和TT,在萨福克羊和杜泊羊群体中有CC和CT基因型;四个绵羊品种之间基因型分布差异显着（P<0.05）。在NLRP3基因第3外显子rs161871942（M645R）位点上哈萨克羊和杜泊羊MP-Ab阳性和MP-Ab阴性的基因型频率存在显着性差异（P<0.05）;萨福克羊和巴音布鲁克羊MP-Ab阳性与MP-Ab阴性的基因型频率与等位基因均无差异（P>0.05）。结论:血清学结果表明,绵羊支原体感染在新疆南疆巴州地区和北疆伊犁地区的规模化羊场的不同绵羊品种中均普遍发生;不同地区不同绵羊品种中绵羊支原体肺炎抗体ELISA检测中,新疆本地绵羊品种绵羊支原体肺炎抗体检出阳性率高于同一地区的外来引进品种;不同年龄阶段的绵羊对绵羊支原体肺炎抗体水平感染率不同。NLRP3基因的rs161871942（M645R）位点与可能与哈萨克羊和杜泊羊MP感染率有相关性;该位点可能与萨福克羊和巴音布鲁克羊MP感染率无相关性。本研究为评估新疆绵羊肺炎支原体的流行情况和绵羊抗病育种提供了参考。
王多智[6]（2019）在《内蒙古地区绵羊梅迪维斯纳病鉴定及PCR检测方法的建立》文中进行了进一步梳理绵羊梅迪维斯纳病（Maedi visna disease,MVD）是由梅迪维斯纳病毒（Maedi visna virus,MVV）引起的一种多器官损伤可传播的疾病。该病可引起脑、肺脏、乳腺、关节等发生病变,一旦感染,最终引起死亡。MVD严重影响养羊业发展,给养羊业严重的经济损失。为鉴定内蒙古地区是否存在MVD,本试验从呼和浩特市周边某屠宰场采集12份病肺组织进行病理组织学和PCR鉴定。病理组织学结果显示:3份肺脏组织均发生纤维化,并且肺泡腔内Ⅱ型肺泡上皮细胞增生以及间质增宽,支气管和细支气管周围可见较多的淋巴滤泡增生;PCR检测结果显示:有3份肺组织为PCR阳性,测序序列与GenBank已登录的MVV KJ641278美国株同源率为87.4%;为了进一步确定3份肺组织确实有MVV感染,依据MVV全序列（登录号KJ641278）的LTR区设计1对引物,结果3份肺组织均为MVV阳性。通过病理组织学和PCR鉴定,确定内蒙古地区存在MVD。本试验为建立MVV特异性的巢式PCR检测方法,根据GenBank上发表的MVV（登录号KJ641278）基因序列设计合成巢式PCR引物,对采集的肺脏组织进行巢式PCR检测。结果显示:能够检测出3份阳性MVD病肺组织,灵敏度试验最低可检测到0.894 fg的病毒DNA,特异性检测结果显示与小反刍兽疫、绵羊支原体、肺炎双球菌、巴氏杆菌均无交叉反应。为探究病肺组织中MVV的病毒载量,本试验采用MVV的阳性质粒为模板进行定量PCR扩增,得出扩增曲线和标准曲线,建立荧光定量PCR检测方法,荧光定量PCR检测结果显示:能够特异性检测3份MVD阳性肺组织,且最低可检测 2.74×102copies/μL 的病毒 DNA。为鉴定临床采集的15份外周血白细胞是否感染MVV,本试验利用巢式PCR检测方法对其进行检测。结果显示:15份外周血白细胞检出8份为MVV阳性。因MVD和绵羊肺腺瘤病（Ovine pulmonary adenomatosis,OPA）时常会发生混合感染,所以为鉴定采集的病肺组织和外周血白细胞是否也感染OPA,本试验利用PCR、巢式PCR和联合诊断PCR进行检测分析。普通PCR检测结果显示:3份MVD 阳性肺组织均为OPA阳性,测序序列与GenBank已登录的JSRV基因序列（登录号JQ837489）内蒙株同源率为100%;巢式PCR检测结果显示:15份外周血白细胞中有10份为JSRV阳性;联合诊断PCR检测结果显示:能够在3份病肺组织中同时检测出MVV和JSRV阳性。以上结果表明内蒙古地区存在MVD感染,有时伴有OPA混合感染。本试验建立的巢式PCR检测方法能够用于MVD的特异性检测,荧光定量PCR可用于MVV的病毒载量检测,两种检测方法均具有特异性好、灵敏度高的优势,本研究对MVD的早期诊断提供了方便、经济实用的检测技术,为内蒙古地区MVD的研究奠定了基础。
王多智,史晓娜,张洁,杨惠,刘淑英[7]（2019）在《内蒙古绵羊梅迪-维斯纳病的病理组织学和巢式PCR诊断》文中指出为检测内蒙古地区是否存在梅迪-维斯纳病（Maedi-Visna dieas,eMVD）,本试验以内蒙古呼浩特市周边某屠宰场采集的12份绵羊病肺组织为研究对象,采用组织病理学、巢式PCR和测序分析等方法进行检测。组织病理学结果显示:肺脏发生纤维化,并且肺泡腔内Ⅱ型肺泡上皮增生以及间质增宽,支气管和细支气管周围可见较多的淋巴滤泡增生;巢式PCR结果显示:病肺组织中有梅迪-维斯纳病毒（Maedi-Visna viru,sMVV）G ag基因序列的特异性扩增,且与小反刍兽疫、绵羊肺腺瘤病毒以及支原体均无交叉反应。以上结果表明,内蒙古存在MVD。
杨义琴[8]（2018）在《小反刍动物慢病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立和初步应用》文中研究指明小反刍动物慢病毒（SRLV）是山羊关节炎-脑炎病毒（CAEV）和梅迪-维斯纳病毒（MVV）的统称,主要引起山羊和绵羊的慢性持续性感染,表现为山羊的关节炎、脑脊髓炎和绵羊的间质性肺炎等。这两种病毒感染具有一定的宿主特异性,即CAEV多感染山羊,而MVV倾向于感染绵羊。但近年来的分子流行病学调查发现,其可跨种感染,并且基于病毒pol-gag基因序列可分为A、B、C、D和E五个亚群,当前建立的病原分子生物学检测方法仅适用于部分基因亚群毒株的检测,因而建立通用的CAEV和MVV核酸检测方法极为必要。本研究对GenBank公布的31株SRLV前病毒基因组序列进行比对,筛选出vif基因上约150bp的序列作为诊断标记物并设计简并引物,通过全基因合成方法获得该序列作为PCR反应的阳性对照模板,以此建立了SRLV通用PCR检测方法;在此基础上,使用SYBR Green I染料建立实时荧光定量RT-PCR方法。为验证建立的病原分子生物学检测方法,进行CAEV人工感染动物试验,并于感染前70天、10天;感染后第4天、8天、15天、23天、28天、42天、58天、71天、84天、99天、113天采集5mL的抗凝血。每次采血后,在72小时内,取1mL全血提取总DNA进行CAEV前病毒DNA的检测;随后,将抗凝血离心后取200μL的血浆用于提取病毒的RNA并反转录为cDNA,使用PCR和实时荧光定量RT-PCR方法来检测病原及其载量,并使用IDEXX SRLV抗体筛查试剂盒检测血清抗体。此外,采集了2017-2018年间新疆乌鲁木齐县、阿克苏、乌苏、巴楚县、富蕴县等地区的165只山羊样本进行抗体检测和病原学检测。研究结果表明筛选的位于SRLV vif基因上的150bp序列可作为其通用诊断标识物,建立的通用PCR检测方法,其敏感性为103个分子拷贝数,并初步证实其可用于CAEV和MVV野毒株RNA和前病毒DNA的检测;使用SYBR Green I染料建立的实时荧光定量RT-PCR方法其敏感性不低于100个分子拷贝数,线性范围为102-107分子拷贝数,且可用于CAEV动物感染的检测,较感染抗体被检出的时间提前。此外,在乌苏县和巴楚县分别检出25%和20%的CAEV血清学阳性样本,新疆地区CAEV血清学阳性率为2.4%,再次证实新疆有该病的流行。该研究建立的方法有望用于我国SRLV的病原学检测,并提示新疆地区有必要开展大范围的CAEV流行病学调查以掌握其流行情况、制订防控方案。
孙雨,杨林,王传彬,董浩,杨天意,张晨,宋晓晖[9]（2018）在《我国11个省份山羊关节炎-脑炎与绵羊进行性肺炎的血清抗体检测》文中进行了进一步梳理为摸清我国山羊关节炎-脑炎与绵羊进行性肺炎的流行情况,用竞争ELISA（C-ELISA）方法对采自河北等11个省份的山羊与绵羊血清进行了抗体检测。结果显示,共检测山羊血清2 083头份,检出山羊关节炎-脑炎抗体阳性血清8份,阳性率为0.38%;检测绵羊血清1 339份,检出绵羊进行性肺炎抗体阳性血清6份,阳性率为0.45%。按不同山羊血清来源统计,山羊关节炎-脑炎的规模场阳性率为0.51%,散养户阳性率为0.50%;按不同绵羊血清来源统计,绵羊进行性肺炎的规模场阳性率为0.53%,屠宰场阳性率为0.12%。按不同山羊饲养方式统计,山羊关节炎-脑炎的全舍饲阳性率为0.41%,半舍饲阳性率为0.35%,放牧阳性率为0.35%。按不同绵羊饲养方式统计,绵羊进行性肺炎的全舍饲阳性率为0.48%,半舍饲阳性率为0.26%,放牧阳性率为0.85%。结果表明,我国山羊与绵羊中分别存在山羊关节炎-脑炎与绵羊进行性肺炎的感染,但感染流行率较低。
司俊强[10]（2017）在《新疆部分地区羊场绵羊肺腺瘤病和梅迪—维斯纳病调查及病理学鉴别诊断》文中研究表明绵羊肺腺瘤病是一种感染以绵羊为主,引起绵羊肺脏发生病变为主的一种疾病,该病在世界范围内广泛存在,在我国新疆等地呈现不同程度的流行。绵羊梅迪-维斯纳病主要引起绵羊慢性、进行性、传染性多器官损伤性综合征,潜伏期长,持续性感染,主要侵害羊。由于两种病均引起绵羊慢性和进行性肺炎症状,且临床症状极为相似,通过简单的临症观察无法有效鉴别。2013年-2015年期间,对新疆5个地区5个品种（萨福克羊、陶塞特羊、哈萨克羊、湖羊、阿勒泰羊）485只绵羊进行绵羊梅迪-维斯纳病ELISA和PCR检测,血清学ELISA检测阳性率为5.36%（26/485）,PCR检测阳性率为3.71%（18/485）,新疆不同地区不同品种绵羊均存在MVV感染,但感染率较低,其中,萨福克绵羊阳性率11.48%（7/61）高于其它品种绵羊。2013年-2014年期间,对新疆6个地区6个品种（萨福克羊、陶塞特羊、哈萨克羊、湖羊、美利奴羊、也木勒羊）2534只羊进行肺腺瘤病PCR检测,6个地区病料总阳性率为78.18%（1981/2534）,经序列测定表明均为内源性绵羊肺腺瘤病毒感染,其中美利奴羊和湖羊感染率高于其它品种绵羊。选取临床调查11份疑似肺腺瘤病和梅迪-维斯纳病的患病羊进行分子检测和病理组织学分析,确诊绵羊肺腺瘤病羊4只,梅迪-维斯纳病羊3只。患绵羊肺腺瘤病羊鼻腔有大量液体流出,稀薄有时伴有大量泡沫,剖检肺组织肿大,体积扩张2-3倍,隔叶出现散在或密集灰白色结节状病灶,切面泡沫渗出,镜下可见肺泡上皮与终末细支气管上皮高度增生并形成多发性乳头状囊腺瘤结构,腺瘤灶附近肺泡中常充满大量巨噬细胞。而患绵羊梅迪-维斯纳病羊鼻液较少,多呈现干咳,剖检发现肺脏体积增大,肺膨大不回缩,散在半透明小结节,镜检可见淋巴滤泡大量形成与肺泡隔淋巴网状细胞增生。通过病理组织学观察可以有效鉴别诊断梅迪-维斯纳病和肺腺瘤病。本研究通过对新疆绵羊肺腺瘤病和梅迪-维斯纳病分子流行病学和临床病理学调查,结果发现,新疆部分地区绵羊肺腺瘤主要是非输入性感染,国外引入品种在本地繁殖后代的绵羊梅迪-维斯纳病感染率较高。采用PCR检测结合病理组织学观察能够对绵羊梅迪-维斯纳病和肺腺瘤病进行有效确诊,为这两种病的鉴别诊断提供了技术支持。
二、绵羊慢性进行性肺炎调查（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、绵羊慢性进行性肺炎调查（论文提纲范文）
（1）梅迪-维斯纳病毒gag蛋白的原核表达及其交叉反应原性（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 菌(毒)株与载体 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 引物设计与合成 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 病毒基因组DNA的提取 |
| 1.2.2 MVV gag基因的PCR扩增 |
| 1.2.3 重组表达载体的构建 |
| 1.2.4 MVV和CAEV gag蛋白的生物信息学分析 |
| 1.2.5 重组gag蛋白的诱导表达及Western blotting分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 MVV gag基因重组质粒的构建 |
| 2.2 gag蛋白氨基酸序列与抗原表位分析 |
| 2.3 MVV gag重组质粒的诱导表达与反应原性分析 |
| 3 讨 论 |
（2）新疆南疆部分地区绵羊肺炎支原体分离培养及鉴定（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 支原体疾病研究进展 |
| 1.1.1 绵羊传染性胸膜肺炎 |
| 1.1.2 其它支原体疾病 |
| 1.2 支原体生物学特性 |
| 1.3 支原体培养特性 |
| 1.4 支原体疾病流行特征 |
| 1.4.1 传染源与传播途径 |
| 1.4.2 临床症状 |
| 1.4.3 病理变化 |
| 1.4.4 支原体感染的流行情况 |
| 1.5 防治措施 |
| 1.6 疫苗研究进展 |
| 1.7 研究背景及意义 |
| 第2章 新疆南疆部分地区规模化羊场支原体感染的分子流行病学调查 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 样品来源 |
| 2.1.2 主要试剂与仪器 |
| 2.1.3 试剂配制 |
| 2.1.4 样品DNA的提取 |
| 2.1.5 PCR检测 |
| 2.1.6 序列分析及系统进化树的构建 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 PCR检测结果 |
| 2.2.2 序列及系统进化树分析结果 |
| 2.3 讨论 |
| 第3章 新疆南疆部分地区规模化羊场支原体的分离鉴定 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 样品来源 |
| 3.1.2 主要试剂与仪器 |
| 3.1.3 试剂配制 |
| 3.1.4 样品处理及接种纯化 |
| 3.1.5 样品DNA提取 |
| 3.1.6 PCR鉴定 |
| 3.1.7 序列分析及同源性比对 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 菌落形态学鉴定结果 |
| 3.2.2 PCR鉴定及同源性比较 |
| 3.3 讨论 |
| 第4章 总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（3）绵羊慢性非进行性肺炎致病原因的研究进展（论文提纲范文）
| 1 慢性非进行性肺炎的病理研究 |
| 2 羊呼吸道肺炎霉形体研究 |
| 3 羊肺炎霉形体病原特征研究 |
| 4 试验传播研究 |
| 5 结语 |
（4）基于绵羊肺炎支原体EF-Tu蛋白间接ELISA方法的建立（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 病料和血清 |
| 1.1.2 仪器 |
| 1.1.3 试剂 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 EF-Tu基因的PCR |
| 1.2.2 突变后pMD18-T-EF-Tu的构建与鉴定 |
| 1.2.3 pET-28a-EF-Tu的构建与鉴定 |
| 1.2.4 IPTG最佳诱导时间的确定 |
| 1.2.5 重组蛋白的纯化 |
| 1.2.6 表达产物Western blot分析 |
| 1.2.7 间接ELISA方法反应条件的优化 |
| 1.2.8 封闭液的确定以及封闭条件的确定 |
| 1.2.9 一抗最佳孵育时间的确定 |
| 1.2.10 二抗最佳稀释倍数及孵育时间的确定 |
| 1.2.11 阴阳判定临界值标准的确定 |
| 1.2.12 特异性试验 |
| 1.2.13 敏感性试验 |
| 1.2.14 临床样本检测 |
| 2 结果 |
| 2.1 EF-Tu基因的PCR |
| 2.2 突变后pMD18-T-EF-Tu的构建与鉴定 |
| 2.3 pET-28a-EF-Tu的构建与鉴定 |
| 2.4 IPTG最佳诱导时间的确定 |
| 2.5 重组蛋白的纯化 |
| 2.6 表达产物Western blot |
| 2.7 间接ELISA方法反应条件的优化 |
| 2.8 封闭液的确定以及封闭条件的确定 |
| 2.9 一抗最佳孵育时间的确定 |
| 2.10 二抗最佳稀释倍数及孵育时间的确定 |
| 2.11 阴阳判定临界值标准的确定 |
| 2.12 特异性试验结果 |
| 2.13 敏感性试验结果 |
| 2.14 临床样本检测 |
| 3 讨论 |
（5）新疆地区不同绵羊品种绵羊支原体肺炎感染率的比较研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英汉缩略语名词对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1 研究目的及意义 |
| 2 文献综述 |
| 2.1 绵羊肺炎支原体研究进展 |
| 2.1.1 绵羊肺炎支原体分类地位及形态学 |
| 2.1.2 绵羊肺炎支原体致病性 |
| 2.1.3 绵羊肺炎支原体致病机制 |
| 2.1.4 绵羊肺炎支原体流行病学 |
| 2.1.5 绵羊肺炎支原体临床症状及病理变化 |
| 2.1.6 绵羊肺炎支原体的诊断及检测技术 |
| 2.1.7 绵羊支原体肺炎的防治途径 |
| 2.1.7.1 抗生素药物治疗 |
| 2.1.7.2 疫苗免疫接种 |
| 2.1.7.3 环境卫生控制 |
| 2.1.7.4 培育抗病品系 |
| 2.2 抗病的机理及遗传学 |
| 2.2.1 抗病的概念 |
| 2.2.2 抗病的机理 |
| 2.2.3 抗病的遗传基础 |
| 2.2.4 抗病育种的途径 |
| 2.2.5 与绵羊支原体肺炎相关的基因 |
| 2.2.5.1 MBL基因 |
| 2.2.5.2 MHC基因 |
| 2.2.5.3 NLRP3 基因 |
| 3 研究内容及技术路线 |
| 3.1 主要研究内容 |
| 3.2 技术路线 |
| 第二章 试验研究 |
| 试验一 新疆地区不同绵羊品种支原体肺炎血清学调查 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料与试剂 |
| 1.2 血样收集与处理 |
| 1.3 Sheep MP抗原抗体ELISA检测 |
| 1.3.1 Sheep MP抗体检测 |
| 1.3.2 Sheep MP抗原检测 |
| 1.4 数据分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 伊犁丶巴州地区不同品种绵羊血清中MP-Ab ELISA检测结果 |
| 2.2 伊犁丶巴州地区不同品种绵羊血清中MP-Ag ELISA检测结果 |
| 2.3 伊犁地区哈萨克羊(成年羊与羔羊)血清中MP-Ab和 MP-Ag ELISA检测结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 不同年龄阶段的绵羊对MP抗体水平阳性率比较 |
| 3.2 不同绵羊品种对MP抗体水平阳性率比较 |
| 3.3 不同绵羊品种对MP抗原水平阳性率比较 |
| 4 小结 |
| 试验二 NLRP3 基因与绵羊支原体肺炎的相关性研究 |
| 1 试验材料与试剂 |
| 1.1 试验材料采集 |
| 1.2 主要生物试剂 |
| 1.3 试验设备 |
| 1.4 试验方法 |
| 1.4.1 血液DNA提取 |
| 1.4.2 引物设计 |
| 1.4.3 PCR扩增 |
| 1.4.4 PCR产物的凝胶电泳检测 |
| 1.4.5 数据分析 |
| 2 结果和分析 |
| 2.1 NLRP3 基因外显子SNP位点的筛选 |
| 2.2 NLPR3基因遗传学分析 |
| 2.2.1 不同绵羊品种NLRP3 基因第3 外显子rs161871942位点(M645R)分析 |
| 2.2.2 不同绵羊品种NLRP3 基因第5 外显子rs403816614 位点分析 |
| 2.2.3 不同绵羊品种NLRP3 基因第8 外显子rs109222749 位点分析 |
| 2.3 NLRP3 基因rs161871942(M645R)位点与MP感染率的相关性分析 |
| 2.3.1 NLRP3 基因rs161871942(M645R)位点与哈萨克羊的MP感染率相关性分析 |
| 2.3.2 NLRP3 基因rs161871942(M645R)位点与萨福克羊的MP感染率相关性分析 |
| 2.3.3 NLRP3 基因rs161871942(M645R)位点与巴音布鲁克羊的MP感染率相关性分析 |
| 2.3.4 NLRP3 基因rs161871942(M645R)位点与杜泊羊的MP感染率相关性分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 绵羊NLRP3 基因SNP位点多态性筛查 |
| 3.2 NLRP3 基因rs161871942(M645R)位点、rs403816614 位点和rs109222749 位点的遗传变异分析 |
| 3.3 NLRP3 基因第三外显子rs161871942位点(M645R)与MP感染率相关性分析 |
| 4 小结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 作者简介 |
| 导师评阅表 |
（6）内蒙古地区绵羊梅迪维斯纳病鉴定及PCR检测方法的建立（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语表 |
| 1 引言 |
| 1.1 梅迪维斯纳病概述 |
| 1.2 梅迪维斯纳病的流行病学调查 |
| 1.2.1 梅迪维斯纳病的流行 |
| 1.2.2 易感动物 |
| 1.2.3 传染源及传播途径 |
| 1.3 梅迪维斯纳病临床症状及病理变化 |
| 1.3.1 临床症状 |
| 1.3.2 病理变化 |
| 1.4 梅迪维斯纳病的检测和防治 |
| 1.4.1 梅迪维斯纳病的诊断 |
| 1.4.2 防治 |
| 1.5 梅迪维斯纳病毒 |
| 1.5.1 梅迪维斯纳病毒概述 |
| 1.5.2 国内对梅迪维斯纳病毒的研究 |
| 1.6 研究目的与意义 |
| 2 试验一 梅迪维斯纳病肺脏病理组织学观察及PCR鉴定 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 主要材料 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 设备仪器 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 肺组织病理切片制作 |
| 2.2.2 引物设计合成 |
| 2.2.3 肺组织DNA的提取 |
| 2.2.4 PCR反应体系及反应条件 |
| 2.2.5 PCR产物的回收 |
| 2.2.6 PCR扩增产物的克隆 |
| 2.3 试验结果 |
| 2.3.1 肺组织病理切片观察 |
| 2.3.2 肺组织PCR鉴定 |
| 2.3.3 同源性分析 |
| 2.3.4 LTR PCR鉴定 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 3 试验二 梅迪维斯纳病毒巢式PCR检测方法的建立 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 主要材料 |
| 3.1.2 设备仪器 |
| 3.1.3 试验试剂 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 引物设计与合成 |
| 3.2.2 肺组织基因组DNA提取 |
| 3.2.3 巢式PCR反应条件的优化 |
| 3.2.4 特异性试验 |
| 3.2.5 敏感性试验 |
| 3.2.6 重复性试验 |
| 3.3 试验结果 |
| 3.3.1 巢式PCR扩增 |
| 3.3.2 巢式PCR反应条件优化 |
| 3.3.3 特异性试验 |
| 3.3.4 敏感性试验 |
| 3.3.5 重复性试验 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 4 试验三 梅迪维斯纳病毒荧光定量PCR检测方法的建立 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 试验材料 |
| 4.1.2 试验试剂 |
| 4.1.3 设备仪器 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.2.1 引物设计合成 |
| 4.2.2 RNA及DNA的提取 |
| 4.2.3 标准品制备 |
| 4.2.4 标准曲线绘制 |
| 4.2.5 敏感性试验 |
| 4.2.6 特异性试验 |
| 4.3 试验结果 |
| 4.3.1 荧光定量PCR引物鉴定结果 |
| 4.3.2 标准曲线绘制 |
| 4.3.3 灵敏性试验 |
| 4.3.4 特异性试验 |
| 4.3.5 病肺组织检测 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 5 试验四 梅迪维斯纳病临床检测与绵羊肺腺瘤病联合诊断 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 试验材料 |
| 5.1.2 试验试剂 |
| 5.1.3 设备仪器 |
| 5.2 试验方法 |
| 5.2.1 引物设计与合成 |
| 5.2.2 白细胞分离 |
| 5.2.3 白细胞RNA提取 |
| 5.2.4 白细胞DNA提取 |
| 5.2.5 RT-PCR反应体系及反应条件 |
| 5.3 试验结果 |
| 5.3.1 MVD外周血白细胞巢式PCR检测结果 |
| 5.3.2 病肺组织绵羊肺腺瘤RT-PCR检测结果 |
| 5.3.3 同源性分析 |
| 5.3.4 肺组织联合诊断PCR鉴定 |
| 5.3.5 巢式PCR外周血白细胞检测 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 6 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
（8）小反刍动物慢病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立和初步应用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 论文中常用缩写词英汉对照表 |
| 前言 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 小反刍动物慢病毒的历史与分布 |
| 1.1 CAEV的历史与国内外分布 |
| 1.2 MVV的历史与国内外分布 |
| 2 病毒形态、理化、分子生物学特征 |
| 2.1 病毒形态、理化特征 |
| 2.2 分子生物学特征 |
| 3 致病机理 |
| 4 流行病学特征 |
| 5 临床症状 |
| 5.1 CAEV的临床症状 |
| 5.2 MVV的临床症状 |
| 6 检测技术 |
| 6.1 血清学检测 |
| 6.2 病原学检测 |
| 7 防治 |
| 8 研究目的与意义 |
| 第二章 试验研究 |
| 试验一 小反刍动物慢病毒实时荧光定量RT-PCR方法建立与初步应用 |
| 1 材料与仪器 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 细胞培养 |
| 2.2 提取前病毒DNA和病毒RNA |
| 2.3 引物设计与合成 |
| 2.4 靶序列的合成与制备 |
| 2.5 PCR扩增与电泳 |
| 2.6 实时荧光定量RT-PCR方法 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 简并引物的设计和靶序列的比对 |
| 3.2 PCR检测方法的建立 |
| 3.3 PCR扩增方法的验证 |
| 3.4 荧光定量RT-PCR检测方法的建立 |
| 3.5 实时荧光定量RT-PCR的应用 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 试验二 山羊关节炎-脑炎病毒的动物感染试验与检测方法的应用 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物试验前准备 |
| 2.2 攻毒试验 |
| 2.3 样品采集 |
| 2.4 感染检测 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 血清学检测结果 |
| 3.2 PCR检测结果 |
| 3.3 实时荧光定量RT-PCR检测结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 试验三 新疆部分地区山羊-关节炎脑炎的初步调查 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 样品采集 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 血液样品处理 |
| 2.2 PCR检测 |
| 2.3 血清学检测 |
| 2.4 实时荧光定量RT-PCR检测 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 PCR扩增结果 |
| 3.2 血清学检测结果 |
| 3.3 实时荧光定量RT-PCR检测结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 石河子大学硕士研究生学位论文导师评阅表 |
（10）新疆部分地区羊场绵羊肺腺瘤病和梅迪—维斯纳病调查及病理学鉴别诊断（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 综述一 绵羊肺腺瘤病研究进展 |
| 1.绵羊肺腺瘤病的流行病学 |
| 1.1 易感动物 |
| 1.2 传染源及传播途径 |
| 2.绵羊肺腺瘤临床症状及病理变化 |
| 2.1 临床观察 |
| 2.2 病理组织学观察 |
| 3.绵羊肺腺瘤病的诊断 |
| 3.1 临床综合诊断 |
| 3.2 病料采集 |
| 3.3 实验室诊断 |
| 4.类症鉴别诊断 |
| 5. 综合防治 |
| 综述二 绵羊梅迪-维斯纳病研究进展 |
| 1. 绵羊梅迪-维斯纳病的流行病学 |
| 1.1 易感动物 |
| 1.2 传染源及传播途径 |
| 2.梅迪-维斯纳病临床症状及病理变化 |
| 2.1 临床观察 |
| 2.2 病理组织学观察 |
| 3.绵羊梅迪-维斯纳病的诊断 |
| 4.类症鉴别诊断 |
| 5.综合防治 |
| 第二章 实验研究 |
| 实验一 新疆部分地区羊场绵羊肺腺瘤病和梅迪-维斯纳病流行病学调查 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 样品来源采集与处理 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 主要仪器设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 引物设计 |
| 1.2.2 DNA提取 |
| 1.2.3 绵羊梅迪-维斯纳病毒PCR扩增条件 |
| 1.2.4 绵羊梅迪-维斯纳病血清抗体ELISA检测 |
| 1.2.5 绵羊肺腺瘤病毒PCR检测 |
| 2.结果 |
| 2.1 绵羊梅迪-维斯纳病毒PCR扩增和血清ELISA检测结果 |
| 2.2 绵羊肺腺瘤病毒PCR扩增结果 |
| 3. 讨论 |
| 实验二 绵羊肺腺瘤病和梅迪-维斯纳病病理学比较及绵羊肺腺瘤病毒基因序列分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 样本来源 |
| 1.1.2 引物设计 |
| 1.1.3 主要试剂 |
| 1.1.4 仪器 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 调查病史 |
| 1.2.1 剖检观察 |
| 1.2.3 组织病理切片制备 |
| 1.2.4 组织悬液的制备及透射电镜观察 |
| 1.2.5 PCR检测 |
| 1.2.6 测序和比对 |
| 2. 结果 |
| 2.1 调查病史 |
| 2.2 临床状态观察 |
| 2.3 剖检观察 |
| 2.4 肺脏病理组织学观察 |
| 2.5 绵羊梅迪-维斯纳病毒PCR扩增结果 |
| 2.6 绵羊肺腺瘤病毒PCR扩增结果 |
| 2.7 病毒颗粒电镜观察 |
| 2.8 绵羊肺腺瘤病毒基因序列分析 |
| 3.讨论 |
| 第三章 全文总结 |
| 1.研究结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 附件 |
四、绵羊慢性进行性肺炎调查（论文参考文献）
- [1]梅迪-维斯纳病毒gag蛋白的原核表达及其交叉反应原性[J]. 古努尔·吐尔逊,王登峰,杨学云,魏玉荣,李建军,孟肖潇,洪都孜·波拉提,吴建勇. 江苏农业学报, 2020(04)
- [2]新疆南疆部分地区绵羊肺炎支原体分离培养及鉴定[D]. 杜奕州. 塔里木大学, 2020(10)
- [3]绵羊慢性非进行性肺炎致病原因的研究进展[J]. 丁旭. 吉林畜牧兽医, 2020(06)
- [4]基于绵羊肺炎支原体EF-Tu蛋白间接ELISA方法的建立[J]. 张洁,曹军军,祝明松,杨亚军,王小凤,王璐,石峰. 动物医学进展, 2019(11)
- [5]新疆地区不同绵羊品种绵羊支原体肺炎感染率的比较研究[D]. 倪文浩. 石河子大学, 2019(05)
- [6]内蒙古地区绵羊梅迪维斯纳病鉴定及PCR检测方法的建立[D]. 王多智. 内蒙古农业大学, 2019(01)
- [7]内蒙古绵羊梅迪-维斯纳病的病理组织学和巢式PCR诊断[J]. 王多智,史晓娜,张洁,杨惠,刘淑英. 中国兽医科学, 2019(05)
- [8]小反刍动物慢病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立和初步应用[D]. 杨义琴. 石河子大学, 2018(12)
- [9]我国11个省份山羊关节炎-脑炎与绵羊进行性肺炎的血清抗体检测[J]. 孙雨,杨林,王传彬,董浩,杨天意,张晨,宋晓晖. 中国兽医科学, 2018(01)
- [10]新疆部分地区羊场绵羊肺腺瘤病和梅迪—维斯纳病调查及病理学鉴别诊断[D]. 司俊强. 石河子大学, 2017(05)