一、用或不用GnRH试验时麻醉对人的LH与FSH水平的影响（论文文献综述）
许梦白[1]（2021）在《产后抑郁症中医证候特点分析及逍遥散的干预作用机制研究》文中提出目的:1.临床流行病学研究通过临床横断面流行病学调查,探索引起产后抑郁症（Postpartum depression,PPD）患者抑郁程度加重的影响因素,利用因子及聚类分析等方法探索PPD的中医证候特点,进一步归纳PPD的中医病机和治则,以期为PPD临床个体化精准辨证提供理论支持。2.中医文献方药研究检索中药内服方剂治疗PPD临床研究的相关文献,探讨治疗PPD内服方药的药物组成规律及遣方用药思路,为临床治疗PPD的选方用药提供参考,并为进一步探索中药治疗PPD的机制研究提供理论依据。3.动物实验机制研究结合PPD临床流行病学研究及中医文献方药研究,开展动物实验,建立PPD大鼠模型并进行评价,造模成功后给予逍遥散干预。通过观察大鼠下丘脑病理组织形态、检测下丘脑-垂体-性腺（Hypothalamic-pituitary-gonadal,HPG）轴激素水平、下丘脑雌激素受体（ERα、ERβ、GPER）介导的PKA/CREB/BDNF信号通路表达水平等,探讨逍遥散治疗PPD的疗效及分子作用机制,为逍遥散治疗PPD提供具有科学内涵的客观依据,同时“以方测证”,揭示PPD的中医证候特点及病机本质。方法:1.临床流行病学研究建立《产后抑郁症调查问卷》,收集PPD患者的一般情况、抑郁量表积分、中医症状及体征信息。采用Pearson卡方检验或Fisher确切概率法对患者一般情况进行单因素分析,采用有序多分类Logistic回归对单因素分析结果中具有统计学意义的相关因素进行多因素分析,探索导致PPD患者抑郁程度加重的影响因素。采用频数分析、因子分析及聚类分析方法,对患者的中医临床症状及体征进行研究,归纳PPD患者的中医证候特点,进一步探寻PPD的中医病机和治则。2.中医文献方药研究检索中国知网、万方数据库等国内中文数据库2000年-2019年发表的关于中药治疗PPD临床研究的相关文献,按照筛选标准收集研究所需中药方剂。建立数据库,采用SPSS 24.0、Weka 3.8等软件对中药进行频数分析、聚类分析及关联规则分析,探索中药治疗PPD的遣方用药规律,探析临床治疗PPD的用药思路。3.动物实验机制研究以妊娠后期慢性极轻度应激（Chronic ultramild stress,CUMS）方法建立PPD大鼠模型,综合大鼠的一般情况、体重、产仔及活仔量、行为学变化对模型进行评价,造模成功后采用HE染色观察大鼠下丘脑病理组织形态,ELISA法检测血清E2、P、PRL含量;采用RT-qPCR及Western blot分别检测下丘脑组织匀浆中ERα、ERβ、GPER及PKA、CREB、BDNF的基因与蛋白表达水平,并采用免疫组化法对其分子蛋白表达进行定位分析,在基于HPG轴探索PPD的发病及逍遥散干预作用机制的同时,“以方测证”,以逍遥散为反证,揭示PPD肝郁脾虚证的证候生物学基础。结果:1.临床流行病学研究（1）206例PPD患者平均年龄为30.28±5.07岁;轻度抑郁患者94例,占比45.63%;中度抑郁患者72例,占比34.95%;重度抑郁患者40例,占比19.42%。在影响PPD患者抑郁程度加重的心理社会因素中,产前教育是影响PPD患者抑郁程度的保护因素,新生儿疾病、经前烦躁情况、孕期焦虑抑郁、孕产期负面事件、睡眠时间不足、患者受关心和支持度低是导致PPD患者抑郁程度加重的危险因素。（2）206例PPD患者的高频症状及体征有情绪抑郁、失眠多梦、神疲乏力、食少纳呆、烦躁易怒、善太息、乳房胀痛、悲伤欲哭、精神萎靡、健忘、腹胀,舌淡红、舌边有齿痕、舌黯及舌有瘀斑瘀点,苔白、苔薄、苔腻,脉细、脉弦、脉沉。将中医症状因子分析得出的9个公因子进行聚类分析,共出现5个聚类结果:①肝郁脾虚证,其症状包括善太息、腹胀、胁肋胀满甚则疼痛、乳房胀痛、食少纳呆;②阴血亏虚证,其症状包括面色淡白、爪甲色淡、肢体麻木、潮热盗汗、五心烦热、头晕、耳鸣;③肝火炽盛证,其症状包括口苦、目赤、口干咽燥、便秘、烦躁易怒、头痛;④脾肾阳虚兼痰湿证,其症状包括脘痞、恶心、胸闷、惊恐易醒、畏寒肢冷、腰膝酸软、浮肿、小便清长或（和）夜尿增多;⑤心脾两虚兼血瘀证,其症状包括心悸、神疲乏力、气短懒言、精神萎靡、面色萎黄、健忘、失眠多梦、悲伤欲哭、面色晦暗、自汗、下腹刺痛、恶露色紫暗有块。2.中医文献方药研究（1）本研究共筛选处方112例,涉及中药116味,使用频次为1216次。治疗PPD的高频药物有柴胡、甘草、当归、白芍、茯苓、白术等17味。所有药物中,归经以脾经、肝经为主,温性和甘味药出现频率最高,药物功效以补益、理气、安神、活血化瘀等为主。（2）17味高频药物共聚为4类:①聚类1包括柴胡、白芍、当归、甘草;②聚类2包括白术、茯苓;③聚类3包括香附、陈皮、川芎、郁金;④聚类4包括茯神、黄芪、大枣、地黄、合欢皮、酸枣仁、远志。（3）17味高频药物关联分析共得出50条关联药物组合,符合二阶关联规则的有6组,符合三阶关联规则的有18组,符合四阶关联规则的有17组。3.动物实验机制研究（1）实验一:4组大鼠产仔及活仔量无明显差异,大鼠造模后出现倦怠嗜卧、活动量减少、粪便质软、体重降低等宏观表现,行为学结果中糖水消耗率及强迫游泳不动时间明显减少,旷场实验中穿格、站立及修饰次数出现降低趋势性变化;氟西汀组及逍遥散组大鼠宏观表现及行为学结果均有明显改善,表明模型组大鼠产后出现抑郁样改变,PPD大鼠模型成功建立,“以方测证”,以逍遥散反证本研究建立的PPD大鼠模型是PPD肝郁脾虚证的病证结合模型。（2）实验二:在HPG轴中,HE染色发现模型组大鼠下丘脑神经元数目减少、排列疏松紊乱,大量神经元出现核固缩、深染及胞体萎缩、空泡样变性、周围脱髓鞘改变等严重病理学变化,而逍遥散组大鼠下丘脑组织病理学变化出现不同程度改善;ELISA检测显示模型组大鼠血清E2、P、PRL水平均明显降低;逍遥散组大鼠血清E2、P、PRL水平与模型组比较均明显升高。（3）实验三:RT-qPCR结果显示,与正常组比较,模型组大鼠下丘脑ERα、GPER、PKA基因表达水平明显降低,ERβ、CREB、BDNF基因表达水平有降低趋势;与模型组比较,逍遥散组大鼠下丘脑中ERα、CREB、BDNF基因表达水平明显升高,ERβ、GPER、PKA基因表达水平有升高趋势。Western blot结果显示,与正常组比较,模型组大鼠下丘脑中ERα、CREB、BDNF蛋白表达水平明显降低,ERβ、GPER、PKA蛋白表达水平有降低趋势;与模型组比较,逍遥散组大鼠下丘脑中PKA、BDNF蛋白表达水平明显升高,ERα、ERβ、GPER、CREB蛋白表达水平有升高趋势。免疫组化对上述指标进行定位分析,结果显示其免疫阳性神经元在下丘脑ARC及VMH中广泛分布,其中,模型组大鼠下丘脑ARC中ERα、PKA、CREB、BDNF的MOD值明显降低,VMH中的ERα、ERβ、GPER、CREB、BDNF的MOD值明显降低,逍遥散则可逆转这一改变,明显升高PPD模型大鼠下丘脑ARC及VMH中已降低的相关指标。结论:1.心理社会等多种因素相互影响,可作为应激源导致PPD的发生、发展。肝郁脾虚证、阴血亏虚证、肝火炽盛证、脾肾阳虚兼痰湿证、心脾两虚兼血瘀证及其症状表现是PPD患者具有临床意义的中医证候特点。2.女子产后多虚多瘀,气血失调,神魂失养,存在于PPD发病的始终。基于肝脾与情志、气血的密切相关性,临床治疗PPD患者可从肝脾论治,调理气血,临床可灵活运用疏肝解郁、理气健脾、益气养血、养心安神等治法。逍遥散用药组合气血兼顾,肝脾同调,是治疗PPD的常用方剂。3.以妊娠后期CUMS方法可建立病证结合的PPD肝郁脾虚证大鼠模型。采用逍遥散对PPD模型大鼠进行干预,可通过HPG轴上调性改变下丘脑内雌激素受体ERα、ERβ、GPER介导的PKA/CREB/BDNF信号通路,调节抑郁样行为。4.基于“以方测证”及“微观辨证”等中医理论基础,肝郁脾虚证是PPD的重要证候特点,以逍遥散为反证的PPD肝郁脾虚证的证候生物学基础涉及到神经内分泌系统,可能与下丘脑组织病理学改变、HPG轴功能异常、性激素分泌减少、下丘脑雌激素受体介导的PKA/CREB/BDNF信号通路的下调性改变抑制神经发生有关。
郭军培[2]（2021）在《猪GRP多克隆抗体的制备与应用及其对Leydig cells睾酮分泌的影响》文中研究表明胃泌素释放肽（Gastrin-releasingpeptide,GRP）是1979年从猪的胃组织中分离得到的一种神经肽,是哺乳动物蛙皮素样肽家族中的一员,在体内GRP通过与其受体（Gastrin-releasing peptide receptor,GRPR）结合发挥多种生理功能。GRP及其受体在多种动物的神经系统和外周组织中广泛表达,参与调控体内多种生物学作用,包括:促进正常/肿瘤细胞的增殖分化、促进胰液分泌、调节应激和恐惧等情绪性行为、参与调控摄食和节律等。自GRP发现以来,目前大多数关于GRP及其受体功能的研究都集中于人和大小鼠上,关于猪体内GRP的表达及其生物学作用的研究较缺乏。为研究GRP在猪体内的分布情况,我们首先制备了猪GRP多克隆抗体,并研究了GRP蛋白在猪体内的分布。本课题组前期研究结果表明,GRP可能对公猪的生殖功能具有调控作用,因此本试验以猪Leydig cells为模型,研究GRP对猪Leydig cells睾酮分泌/合成、增殖及凋亡的影响。通过以上研究旨在发现GPR在猪体内可能存在的生理功能及对猪Leydig cells的影响,为进一步研究GRP对公猪生殖相关激素的调控机制奠定基础。1.猪GRP多克隆抗体的制备本试验通过大肠杆菌原核表达技术,构建了重组表达载体pET32a（+）-pGRP,并转化到表达菌株BL21（DE3）获得pGRP融合蛋白表达菌株,IPTG诱导表达菌株获得Histag-pGRP融合蛋白,以纯化后的融合蛋白为免疫原,制定免疫程序免疫试验动物后获得抗血清,即为制备的多克隆抗体。具体如下:（1）根据猪GRP基因序列,设计并合成添加酶切位点的引物序列;通过PCR扩增获得pGRP目的片段,包括全长开放阅读框（441 bp）,编码146个氨基酸;随后与pMD19T连接构建pMD19T-pGRP重组质粒;将pMD19T-pGRP和pET32a（+）质粒经双酶切线性化后连接构建pET32a（+）-pGRP重组表达载体;并转化至表达菌株BL21（DE3）中获得BL21（DE3）-pET32a（+）-pGRP融合蛋白表达菌株。（2）利用IPTG诱导BL21（DE3）-pET32a（+）-pGRP融合蛋白表达菌株获得His-tag-pGRP融合蛋白,并对获得的蛋白进行检测和纯化。（3）制定免疫程序后,以纯化后的融合蛋白为免疫原免疫试验动物家兔,并获得抗血清;采用ELISA检测抗血清的效价为1:50,000,并通过Western Blot检测抗血清的反应原性;纯化后的抗血清即为制备的多克隆抗体。2.GRP在猪体内的分布定位和表达本部分主要通过IHC和Western Blot检测GRP蛋白在猪组织中的分布表达情况。结果表明:GRP蛋白在猪的中枢神经系统和外周组织器官中都有表达,其中在中枢神经系统GRP蛋白主要表达在下丘脑、小脑等组织;在外周组织中主要表达在胃肠道和泌尿生殖道。综上所述,GRP蛋白在猪体内的广泛存在表明GRP可能对猪的多种生理功能具有调节作用。3.GRP对猪Leydigcells的影响为研究GRP对猪Leydig cells的影响,我们使用一定浓度的GRP处理猪Leydig cells,收集上清和蛋白样品分别进行如下检测:检测GRPR蛋白在Leydig cells中表达,结果表明一定浓度（1和10 nM）的GRP可以显着促进GRPR蛋白的表达;检测上清中睾酮分泌和睾酮合成相关蛋白（StAR、CYP11A1和HSD3B2）表达的影响,结果表明GRP能够促进睾酮的分泌,其中1和10nM的GRP能够显着增加睾酮的浓度（P<0.01和P<0.05）;Western Blot结果也表明不同浓度GRP处理细胞对睾酮合成相关蛋白（StAR、CYP11A1和HSD3B2）的表达有一定的促进作用;进一步检测了GRP对Leydig cells细胞增殖和凋亡的影响,CCK-8结果表明GRP对细胞活性有一定的作用,GRP浓度为1和10nM时能够显着增加细胞数量（P<0.01和P<0.05）;Western Blot检测结果表明一定浓度的GRP对Cyclin B1蛋白表达有促进作用,但是对PCNA影响不显着;同时流式细胞术检测结果表明一定剂量的GRP能够促进细胞凋亡并促进凋亡相关蛋白的表达;检测了GRP处理对G-蛋白偶联受体信号通路中pPKC/PKC和pPKA/PKA蛋白表达的影响,结果显示一定浓度的GRP能够增加pPKC/PKC的比值,但是对pPKA/PKA的比值影响不显着。该论文构建重组表达载体pET32a（+）-pGRP并制备猪GRP多克隆抗体,通过IHC和Western Blot检测GRP蛋白猪体内的分布和表达情况,结果表明GRP蛋白在猪组织中具有广泛的分布表达,表明GRP在猪体内可能具有多种生理功能。该论文进一步研究GRP对猪睾丸间质细胞睾酮的分泌和合成的影响,结果表明一定浓度的GRP能够促进睾酮分泌并调节睾酮合成相关蛋白的表达;另外,研究结果还表明一定浓度的GRP对睾丸间质细胞的细胞增殖和凋亡也有影响;并发现GRP/GRPR系统对睾丸间质细胞的调节作用可能是通过pPKC/PKC途径。
严坤宁[3]（2021）在《运用CRISPR/Cas9技术构建PCSK9及CBS点突变家兔心血管疾病模型的实验研究》文中提出目的心血管疾病是一类严重威胁我国居民健康的常见病,本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建S386A-PCSK9和G307S-CBS两种点突变家兔模型,以进一步阐明突变的PCSK9和CBS基因对脂质代谢以及心血管疾病的影响。方法1.阅读文献,选择PCSK9和CBS基因的突变位点,根据Pub Med基因蛋白数据对人和兔的PCSK9及CBS的蛋白功能区进行Blast分析。2.根据家兔点突变对应的碱基替换位置及序列分析结果设计sgRNA和ssODN。3.将体外转录好的sgRNA、Cas9-mRNA和ssODN共同注射入家兔受精卵胞质内并将受精卵移植到待孕母兔体内。4.对获得的F0代兔进行PCR、TA克隆、脱靶检测以鉴定是否突变成功。5.根据基因测序后得到的氨基酸序列进行蛋白结构模拟,预测突变对蛋白结构产生的影响。6.通过血脂检测、脂蛋白琼脂糖凝胶电泳分析突变兔的脂质代谢情况。7.待PCSK9突变兔12周龄时给予10周高脂饮食,然后剖取主动脉进行油红O染色、H&E染色、马松染色以及平滑肌细胞、巨噬细胞和TNF-α的免疫组织化学染色,取肝脏组织进行TNF-α的免疫组织化学染色。8.给CBS突变兔喂食维生素B和甜菜碱复合物,观察药物对突变兔的血脂、血浆同型半胱氨酸和肝脏组织脂质含量的影响。结果1.通过CRISPR/Cas9基因编辑技术共获得15只S386A-PCSK9 F0代兔和6只G307S-CBS F0 代兔。2.测序结果表明有1只S386A-PCSK9点突变纯合子和2只S386A-PCSK9点突变杂合子。设计的3条sgRNA在预测范围内未发生脱靶。蛋白结构模拟结果表示突变兔的PCSK9蛋白均发生了不同程度的结构变化。血脂检测结果发现在正常饮食条件下,与WT兔相比,S386A-PCSK9-/-兔和一只S386A-PCSK9+/-突变兔的血浆低密度脂蛋白胆固醇水平、总胆固醇、甘油三酯水平降低,高密度脂蛋白胆固醇水平升高,脂蛋白检测结果与此一致。特殊染色和免疫组织化学染色结果显示,与WT兔相比,S386A-PCSK9+/-兔的内膜增厚不明显,平滑肌细胞迁移水平下降,内膜浸润的巨噬细胞数量减少,肝脏的炎症水平下降。另一只S386A-PCSK9+/-突变兔的血脂、脂蛋白水平和动脉粥样硬化斑块面积与WT兔相比没有明显差异,这可能与它的突变方式有关。S386A-PCSK9型突变可以稳定遗传。3.CBS基因突变兔在出生后6周内出现明显的生长发育迟缓和死亡率高的现象。与同周龄的WT兔相比,6周龄G307S-CBS兔的血浆同型半胱氨酸、甘油三酯、总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平更高。对突变兔肝脏组织的H&E染色结果显示,突变兔肝细胞内有微泡状的胞浆脂滴积聚。给突变兔喂食维生素B和甜菜碱复合物可以显着降低CBS突变兔的血浆甘油三酯、总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平,并减轻肝脏脂肪变性的情况。结论1.利用CRISPR/Cas9技术成功构建了 S386A-PCSK9及G307S-CBS点突变家兔模型。2.S386A-PCSK9突变对动脉粥样硬化有抵御作用。模型的构建可能为探究S386A点突变对PCSK9蛋白功能减弱的分子机制,开发可靠、有效的诊断和治疗措施提供了合适的动物模型。3.本研究构建的G307S-CBS家兔在正常饮食条件下血脂发生明显异常,表明CBS基因的G307S突变是导致血脂异常的一个因素。
孙艳萍[4]（2021）在《不同剂量瑞芬太尼复合丙泊酚用于无痛取卵术的临床研究》文中进行了进一步梳理研究背景辅助生殖技术（Assisted reproductive technologies,ART）指以建立妊娠为目的,在体外进行的有关人类配子或者胚胎的治疗方法或过程的总称,包括人工授精（Artificial insemination,AI）、体外受精-胚胎移植（In vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET）及其衍生技术等。超声引导下经阴道取卵术是其关键步骤之一。大多数患者进行取卵术时会感受到中度以上的疼痛。取卵术持续时间通常较短,一般在门诊完成,这要求麻醉诱导起效快,恢复完全。迄今尚缺一种理想的麻醉方式。目前关于麻醉药如丙泊酚、瑞芬太尼等对ART结局的影响也不清楚。研究目的（1）评价不同剂量瑞芬太尼复合丙泊酚用于超声引导下经阴道取卵术（以下简称取卵术）的麻醉效果。（2）评价瑞芬太尼复合丙泊酚对ART结局的影响。研究方法实验一评价不同剂量瑞芬太尼复合丙泊酚用于无痛取卵术的麻醉效果选取因输卵管性不孕行取卵术的患者,共160例,采用区组随机化法分为4组（每组n=40）。丙泊酚组（P组）:术中仅给予丙泊酚维持麻醉;瑞芬太尼低剂量复合丙泊酚组（R1组）;麻醉诱导静注瑞芬太尼0.2μg/kg同时复合丙泊酚维持麻醉;瑞芬太尼中剂量复合丙泊酚组（R2组）:麻醉诱导静注瑞芬太尼0.25μg/kg同时复合丙泊酚维持麻醉;瑞芬太尼高剂量复合丙泊酚组（R3组）:麻醉诱导静注瑞芬太尼0.3μg/kg同时复合丙泊酚维持麻醉。麻醉质量评价主要指标分别为体动次数、体动程度、辅助呼吸例数、手控呼吸例数、术毕睁眼例数、术毕清醒镇静评分（Observer’s assessment of alertness/sedation scale,OAA/S）、睁眼时OAA/S、入恢复室至完全清醒持续时间、术后下腹部疼痛评分及恶心、呕吐等不良反应的发生情况。实验二评价瑞芬太尼复合丙泊酚静脉麻醉对ART结局的影响为了评价瑞芬太尼复合丙泊酚对ART结局的影响,在实验一的基础上将纳入病例随机分为3组（每组n=95）。空白对照组（Con组）,丙泊酚组（P组）与瑞芬太尼复合丙泊酚组（R+P组）,Con组患者清醒状态下取卵,P组给予单纯丙泊酚麻醉,R+P组根据实验一的结果,选择最佳剂量的瑞芬太尼复合丙泊酚维持麻醉。ART结局评价指标主要包括获卵数、MII卵数、获卵率、MII卵率、正常受精率、卵裂率、优胚率、种植率、临床妊娠率、早期流产率等。研究结果实验一评价不同剂量瑞芬太尼复合丙泊酚用于无痛取卵术的麻醉效果1.患者术中丙泊酚用量,R2及R3组显着低于P组与R1组（P<0.05）,R2、R3组间无统计学差异（P>0.05）。2.患者术中不良反应评价,术中呛咳4组间比较差异无统计学意义（P>0.05）,体动次数、小于2次体动例数、3级体动例数R2及R3组低于P和R1组,差异有统计学意义（P<0.05）,R2、R3组间无统计学差异（P>0.05）。辅助呼吸例数（包含手控呼吸例数）,R2与P、R1组间差异均无统计学意义（P>0.05）,而R3组显着多于P组、R1和R2组,差异有统计学意义（P<0.05）。3.患者术后苏醒质量评价指标,术毕睁眼占比、术毕及睁眼时OAA/S值R2、R3组明显高于P组及R1组（P<0.05）,R2、R3组间无统计学差异（P>0.05）。入恢复室至完全清醒持续时间R2及R3组明显短于P组及R1组（P<0.05）,R2、R3组间无统计学差异（P>0.05）。4.患者术后不良反应评价,术后下腹部疼痛及恶心、呕吐发生率4组间差异无统计学意义（P>0.05）。实验二评价瑞芬太尼复合丙泊酚静脉麻醉对ART结局的影响1.获卵数、MII卵数、获卵率、MII卵率、正常受精率、多PN受精率、卵裂率、优胚率、D3无可利用胚胎周期率、因卵子质量差或精卵结合障碍改ICSI率等指标各组间比较无统计学差异（P>0.05）。2.种植率、临床妊娠率和早期流产率等指标各组间比较无统计学差异（P>0.05）。研究结论1.瑞芬太尼复合丙泊酚静脉麻醉可以改善无痛取卵术的麻醉效果,其中以瑞芬太尼0.25μg/kg复合丙泊酚麻醉组麻醉效果最佳。2.瑞芬太尼复合丙泊酚麻醉对辅助生殖结局（获卵率、MII卵率、正常受精率、卵裂率、优胚率、种植率、临床妊娠率、早期流产率等）不产生不良影响。
任非非[5]（2021）在《基于AMPK/SIRT1/PGC-1α通路研究醒脾解郁方对抑郁大鼠海马神经元突触重塑的影响》文中提出目的:观察AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路介导的线粒体生物合成对抑郁大鼠海马神经元突触可塑性的影响及醒脾解郁方干预效应。方法:实验研究分为四部分。第一部分:140只雄性SD大鼠随机分为空白组（CON）、模型组（MOD）、醒脾解郁方组（XPJYF）、草酸艾司西酞普兰组（EOT）、醒脾解郁方联合草酸艾司西酞普兰组（XPJYF+EOT）。每组根据应激时间各分为3w、6w组。除CON外,其余各组采用慢性束缚应激（CRS）造模,共21d。各组造模的同时给予相应药物干预。造模前及造模第3 w、6 w时进行行为学观察。造模3 w时评价脾虚程度,结合行为学实验,评价模型成功与否。取材后以HE染色和尼氏染色观察海马CA1区神经元病理变化及XPJYF干预效应。第二部分:大鼠分组及干预同研究一。取材后观察海马CA1区神经元突触及线粒体超微结构;分析线粒体及神经元突触体视学指标;高尔基染色观察神经元轴树突分支变化;提取海马突触体,免疫荧光染色观察突触重塑蛋白表达;Western blot检测线粒体合成蛋白含量;检测海马线粒体呼吸链酶复合物Ⅰ～Ⅳ及线粒体酶活性。第三部分:制备XPJYF低、中、高剂量组含药血清;体外分离、培养原代海马神经元细胞并鉴定;采用CCK8法进行XPJYF细胞毒性实验;建立皮质酮（CORT）诱导海马神经元损伤模型,分为 CON、CORT、CORT+X（H）、（M）、（L）、CORT+E、CORT+E+X（H）、（M）、（L）共9组。以细胞免疫荧光观察SYN、PSD-95表达及海马神经元线粒体成像;Western blot检测线粒体生物合成及突触重塑蛋白表达;ELISA及RT-PCR检测5-HT、DA及其受体情况。第四部分:大鼠分组及干预同研究一。取材后以免疫荧光三标染色观察海马CA1区NeuN/CD31/GFAP表达;RT-PCR检测海马AMPK/SIRT1/PGC-1α通路基因表达;免疫组化及 Western blot 检测 NeuN、GFAP、VEGF、Collagen Ⅳ蛋白表达。结果:1.第一部分1.1宏观表征:造模前大鼠状态良好,反应灵敏,活动自如。造模3 w后,反应降低,神态倦怠,活动减少,毛发干枯或发黄,粪便逐渐变稀,至6 w时表现更明显,各用药组较模型组有改善。1.2体质量变化:模型各组大鼠体重较空白组降低（P<0.01）。与模型组比较,各用药组体重增加（P<0.01,P<0.05）。与中药组比较,西药3 w、联合各组体重增加（P<0.01,P<0.05）,西药6 w组降低（P<0.05）。联合各组体重较西药组增加（P<0.01,P<0.05）。1.3行为学:模型各组糖水偏好率（SPT）较空白组降低（P<0.01）,强迫游泳不动时间（FST）延长（P<0.01）。与模型组比较,西药、联合各3 w及各用药6w组SPT升高,FST缩短（P<0.01,P<0.05）。联合各组SPT较中药、西药组升高（P<0.01,P<0.05）,FST缩短（P<0.01,P<0.05）。与同组别基线比较,各组各时间点SPT降低（P<0.01）,模型各组及中药、西药各6 w组FST延长（P<0.01,P<0.05）。1.4血清淀粉酶、尿D-木糖排泄率比较:造模3 w后血清淀粉酶和尿D-木糖排泄率均降低（P<0.01）,至造模6周时更低（P<0.01）。1.5海马CA1区病理改变:HE染色:空白组海马CA1区神经元数量、分布、形态均无异常,圆形胞核清晰居中。模型3w组神经元数量减少,排列及形态不规则,细胞大小不一,部分呈三角形,细胞核深染、固缩,核仁显示不清;至6w时损伤进一步加重。各用药组有不同程度改善,以中药6 w组和联合组较为明显。尼氏染色:空白组海马CA1区神经元正常分布,胞质内可见丰富的尼氏小体,近胞核处呈“虎斑样”,远端呈细颗粒样,核仁清晰。模型3 w组细胞排列散乱,胞质内尼氏小体减少。至6w时,损伤加重,细胞皱缩明显,部分细胞尼氏体减少,并可见中央性染色质溶解现象。各用药组损伤逐渐恢复,以西药3 w组及中药6 w组明显。2.第二部分2.1神经元超微结构:正常组神经元突起较多,线粒体正常,突触结构完整,突触小泡较多。造模3 w后,线粒体肿胀,嵴断裂,突触小泡数量减少。至造模6 w,损伤加重,突触间隙显示不清,突触小泡减少,聚集分布,线粒体膜破坏,嵴断裂,基质空泡样变。各用药组上述损伤减轻。2.2线粒体体视学:模型各组Vvm较空白组升高（P<0.01）,NM、δ、δm降低（P<0.01）。与模型组比较,各给药组Vvm降低（P<0.01,P<0.05）,各6 w组NM升高（P<0.01）,中药、联合各组及西药6 w组δ、δm升高（P<0.01,P<0.05）。较中药组,西药6 w组δ、联合6 w组Vvm降低（P<0.01）,联合各组δm升高（P<0.01,P<0.05）。2.3突触体视学:模型各组数密度（Nv）、面密度（Sv）、突触小泡面数密度（NS）均较空白组降低（P<0.01）。中药、联合各6 w组Nv、Sv、Ns较模型组升高（P<0.01,P<0.05）。2.4高尔基染色:模型各组Sholl交点数及树突棘较空白组减少（P<0.01）。中药、联合各组Sholl交点数较模型组增多（P<0.01,P<0.05）,中药、西药各6 w组及联合各组树突棘密度升高（P<0.01,P<0.05）,且联合6 w组较中药、西药各6w组升高（P<0.05）。2.5突触体突触重塑蛋白:与空白组比较,模型3 w组GAP-43、PSD-95增加（P<0.01）,6w组降低（P<0.05）,各组SYN、syntaxin 1均降低（P<0.01）。与模型组比较,中药、联合各组及西药3 w组GAP-43、PSD-95增加（P<0.01,P<0.05）,中药、联合各组SYN升高（P<0.01）,中药、西药及联合各6 w组syntaxin 1升高（P<0.01,P<0.05）。与中药组比较,西药6 w组SYN降低（P<0.05）,联合6 w组GAP-43增加（P<0.01）。2.6线粒体生物合成蛋白:模型各组SIRT1、PGC-1α、AMPK-α1、Tfam、NRF1较空白组均降低（P<0.01）。与模型组比较,西药3 w组SIRT1和AMPK-α1、联合各组SIRT1、PGC-1α、Tfam升高（P<0.01,P<0.05）。与中药组比较,联合3 w组AMPK-α1、6w组PGC-1α表达升高（P<0.01）。3.第三部分3.1细胞毒性实验:经免疫荧光鉴定,培养的海马神经元符合神经元细胞特征。经CCK8实验,确定醒脾解郁方含药血清浓度为高剂量组10%、中剂量组10%和低剂量组20%,作用时间确定为24h。3.2线粒体生物合成蛋白表达:与CON组比较,CORT组、CORT+E组SIRT1、PGC-1α、NRF1、Tfam 降低（P<0.01）。与 CORT 组比较,CORT+X 的 H、M 组 SIRT1、NRF1、Tfam 升高（P<0.01）,CORT+E 组 SIRT1 降低（P<0.05）,CORT+X（H）组PGC-1α 升高（P<0.01）。与 CORT+E 组比较,CORT+E+X（H）组 PGC-1α、Tfam 升高（P<0.05）,CORT+E+X（M）组 NRF1、Tfam 升高（P<0.01）。3.3突触重塑蛋白表达:与CON组比较,CORT组、CORT+E组GAP-43、SYN、PSD-95 降低（P<0.01）。与 CORT 组比较,CORT+X 的 H、M 各组 GAP-43、SYN 升高（P<0.01）,CORT+X（H）组 PSD-95 升高（P<0.01）。与 CORT+E 组比较,CORT+E+XPJYF 的 H、M、L 组 GAP-43、SYN、PSD-95 升高（P<0.01,P<0.05）。3.4 5-HT、DA及其受体mRNA含量:与CON组比较,CORT组、CORT+E组5-HT、DA、5-HT1AR mRNA、DRD1 mRNA 降低（P<0.01）。与 CORT 组比较,CORT+X（H）组 5-HT、DA 升高（P<0.05）,CORT+E 组 5-HT 降低（P<0.05）,CORT+X 的 H、M组 5-HT1AR mRNA、DRD1 mRNA 升高（P<0.01）。与 CORT1+E 组比较,CORT+E+X（H）组 5-HT 升高（P<0.05）,CORT+E+XPJYF 的 H、M、L 组 5-HT1AR mRNA、DRD1 mRNA 升高（P<0.01,P<0.05）。4.第四部分4.1线粒体合成基因表达:模型各组SIRT1 mRNA、PGC-1α mRNA较空白组降低（P<0.01）。与模型组比较,各给药组 SIRT1 mRNA、PGC-1αmRNA、AMPK-α1 mRNA 均升高（P<0.01）,中药6w组、西药及联合各组NRF1 mRNA升高（P<0.01）,西药3 w组、中药及联合各组Tfam mRNA表达均升高（P<0.01,P<0.05）。与中药组比较,联合各组SIRT1 mRNA、PGC-1α mRNA、NRF1 mRNA 均升高（P<0.01）,西药 3 w 组 SIRT1 mRNA升高（P<0.01）。4.2突触微环境蛋白表达:模型各组NeuN、GFAP、VEGF较空白组降低（P<0.01）。与模型组比较,中药及联合各组NeuN、GFAP、VEGF均升高（P<0.01,P<0.05）,西药各组GFAP升高（P<0.01）,西药3 w组VEGF升高（P<0.01）。与中药组比较,西药各组GFAP 降低（P<0.05）,联合各组 GFAP 升高（P<0.01）,联合 3 w 组 VEGF 升高（P<0.05）。结论:1.慢性束缚应激3周时,动物模型符合肝郁脾虚型抑郁症标准,脑内海马CA1区神经元损伤,且随应激时间延长,损伤程度加重。中药醒脾解郁方和西药草酸艾司西酞普兰均可不同程度减轻神经元损伤,改善抑郁样行为,中药的远期保护优势较西药明显,且以两者联合应用作用更为显着;2.抑郁模型大鼠脑内海马CA1区神经元突触超微结构破坏,线粒体损伤,突触重塑功能降低,与AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路介导的线粒体生物合成减少直接相关。中药醒脾解郁方和西药草酸艾司西酞普兰均可动态调控该信号通路,促进海马神经元突触重塑,但二者作用的优势环节不同,西药在调节神经递质方面更具优势,而中药在改善线粒体功能方面更为明显,且中药的远期作用效果优于西药。3.抑郁症海马神经元突触微环境中星形胶质细胞、微血管内皮细胞及微血管基底膜损伤,与神经元突触重塑相关。中药醒脾解郁方可通过调控AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路增加线粒体生物合成,保护突触微环境,促进抑郁症神经重塑,作用较西药草酸艾司西酞普兰更具优势,且中西药联合应用效果显着。
李学思[6]（2021）在《肥胖影响雌性小鼠青春期启动及与Leptin/GnRH关系的实验研究》文中研究表明目的:肥胖已经成为波及全球的流行病,肥胖可以引起女童青春期启动提前,但相关机制不清。本研究选取新生C57BL/6J雌性小鼠为实验对象,于出生后给与高脂暴露诱导青春期肥胖动物模型,通过检查阴道开口时间,卵巢的卵泡数量,卵巢的病理改变,血清中瘦素（Leptin）和性激素的水平及下丘脑和卵巢中促性腺激素释放激素（Gonadotropin-releasing Hormone,GnRH）和瘦素受体（Ob gene receptor,Ob-R）的基因和蛋白表达,探讨肥胖对雌性小鼠青春期发育的影响及与Leptin/GnRH的关系。方法:选取C57BL/6J雄性和雌性小鼠分别为12只和24只,适应性喂养一周后1:2配对,选取雌性仔鼠24只,随机分为高脂组（High-fat diet group,HFD）和对照组（Control group,CON）,各12只,高脂组母鼠哺乳期以高脂喂养,仔鼠断乳后继续给予高脂饲料;对照组母鼠哺乳期以普通饲料喂养,断乳后仔鼠继续以普通饲料喂养,共饲养45天。小鼠28日龄开始每日检测阴道开口的情况;实验结束时分离小鼠肝脏、肾脏、肾脏周围脂肪、卵巢、子宫、子宫周围脂肪组织并称重;光镜和电镜观察卵巢病理改变;ELISA法检测血清Leptin、黄体生成素（Luteinizing Hormone,LH）、卵泡刺激素（Follicle-Stimulating Hormone,FSH）、雌二醇（Estradiol,E2）、睾酮（Testosterone,T）水平;免疫组化病理检测下丘脑和卵巢中GnRH蛋白表达;Western blot方法测定下丘脑和卵巢中Ob-R的蛋白表达;以实时定量PCR方法检测下丘脑和卵巢中GnRH和Ob-R的基因表达。结果:小鼠21日龄时,2组小鼠的体重已出现差异（P<0.05）。在小鼠45日龄时,HFD组小鼠体重明显高于CON组,差异具有统计学意义（P<0.05）。HFD组小鼠的体脂肪、体脂肪百分比、瘦体重显着高于CON组,差异具有统计学意义（P<0.05）。但是HFD组小鼠的瘦体重百分比显着低于CON组,差异具有统计学意义（P<0.05）。HFD组小鼠的肾周围脂肪、子宫周围脂肪、肾周围脂肪系数、子宫周围脂肪系数显着高于CON组,差异具有统计学意义（P<0.05）。HFD组小鼠的肝重、肝脏系数、肾重、肾脏系数、子宫重、子宫系数与CON组比明显增加,差异具有统计学意义（P<0.05）,但两组小鼠的卵巢重和卵巢系数无明显差异。HFD组小鼠阴道口初开日龄比CON组明显提早,差异具有统计学意义（P<0.05）。光镜下观察两组小鼠的卵巢病理改变,HFD组小鼠卵巢中卵泡较CON组数量增多,卵巢发育良好,卵巢表面上皮细胞排列紧密,细胞形状规则,大小均匀,卵巢上皮细胞发育良好。CON组小鼠卵巢上皮细胞排列松散,形状不规则,卵巢上皮细胞大小不等。HFD组小鼠的卵巢间质细胞较CON组多,细胞周围有较多的脂肪滴,脂肪滴体积较大。电镜下观察,HFD组小鼠卵巢颗粒细胞的细胞核染色质均匀,核膜清晰,线粒体丰富,线粒体染色均匀,线粒体嵴明显,线粒体、内质网、溶酶体等细胞器清晰。CON组小鼠卵巢颗粒细胞的细胞核染色质不均匀,核膜不清晰,线粒体数量较少,线粒体、溶酶体、内质网等细胞器模糊。HFD组小鼠黄体中有较多的脂肪滴,而CON组小鼠黄体中的脂肪滴较少。检测两组小鼠血清中激素,HFD组小鼠血清Leptin、E2、FSH水平高于CON组小鼠,差异具有统计学意义（P<0.05）,但是两组小鼠的血清LH、T水平无明显差异。与CON组相比,HFD组小鼠下丘脑和卵巢中GnRH、Ob-R的蛋白和mRNA的表达水平明显降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:肥胖雌性小鼠青春期发育提前;青春期肥胖小鼠血清FSH分泌增加,进而导致雌激素水平升高,可能是肥胖引起雌性小鼠青春期发育提前的重要原因;肥胖小鼠下丘脑Ob-R和GnRH表达下降,可能与FSH和雌激素水平升高引起的负反馈有关。
安琪[7]（2020）在《睾酮治疗少弱精子症的疗效与作用机制的实验动物研究》文中进行了进一步梳理背景:睾酮在精子发生的过程中发挥着至关重要的作用。一些无精子症和少弱精子症患者的外周血睾酮会有所降低,但也有少数患者的外周血睾酮水平未低于正常范围。男性不育症中的特发性少弱精子症发病机制不明,临床上主要还是依赖经验性的药物治疗,其中补充雄激素或其衍生物则是其中的一种常用疗法。此外,药物治疗在特发性男性不育的临床治疗上应用广泛且相对简单,同时与自然生育的期望更为符合,因此更易于被医患双方接受。目的:通过建立少弱精子症模型大鼠来探究雄激素治疗的效果,并对可能的机制进行探讨。方法:第一,系统回顾了有关TU单独或联合用药治疗男性少弱精子症的文献,通过荟萃分析为下一步探索雄激素治疗少弱精子症模型大鼠提供了循证医学支持。第二,在结合既往研究的基础上,选取了6月龄的雄性SD正常大鼠来观察四种不同剂量的雄激素对其生殖器官和内分泌代谢的影响,以进一步明确生理剂量范围并探索下一步治疗实验中适合的药物剂量。第三,根据筛选出可能适用于治疗的药物剂量,对雷公藤多苷诱导的少弱精子症模型大鼠进行治疗,并从生殖脏器质量、精子质量、血清激素水平、睾丸组织抗氧化指标以及病理组织形态学等多角度、多方面评估治疗效果。第四,通过电镜来观察大鼠睾丸组织中精曲小管的超微结构变化,并在借助HPLC-MS的基础上深入挖掘有关雄激素治疗少弱精子症大鼠的代谢组学变化,即通过生物体内代谢物的变化情况来探究代谢物与病理变化之间的相对关系从而进行定量分析。同时,结合相关的凋亡通路和细胞特异标志物,探索了雄激素治疗少弱精子症大鼠模型的准确靶点与作用机制,为其临床应用提供了理论基础。结果:首先,就改善患者精液质量的结果而言,荟萃分析显示TU联合治疗的效果整体上要优于单用十一酸睾酮或其他用药治疗,并且单用十一酸睾酮的疗效并不亚于使用其他药物。因此,十一酸睾酮可在一定程度上直接或间接地促进和改善特发性少弱精子症患者的精液质量,也为下一步探讨雄激素治疗少弱精子症大鼠模型提供了文献依据和理论基础。其次,通过探索不同剂量的雄激素对正常大鼠的生殖激素水平及生精功能的影响,并结合大鼠脏器质量、精子质量、血清激素水平以及病理组织形态学等,进一步筛选出了 7.56mg/kg和15.12mg/kg两个对于正常大鼠生理功能影响相对最小的“生理剂量”。第三,通过建立少弱精子症大鼠模型,结果提示雄激素治疗能够在一定程度上改善精子浓度和活动率（P<0.05）,但对于精子的运动参数并无改善作用（P>0.05）;H&E染色结果提示:与空白对照组相比,十一酸睾酮治疗组的生精细胞有所增多,间质细胞变性,支持细胞胞浆空泡化相对减少,生精上皮进一步恢复,继而Johnsen评分明显恢复并且凋亡率显着降低（P<0.05）;在血清生殖激素方面:FSH和LH水平明显恢复（P<0.05）,同时T和E2水平显着增加（P<0.05）;而睾丸组织中的氧化应激物MDA与GSH-PX的水平明显降低（P<0.05）,特别是睾丸内睾酮的水平明显升高（P<0.05）。第四,通过电镜观察十一睾酮治疗组中睾丸组织中精曲小管的超微结构,发现生精细胞间隙明显缩小,生精细胞排列相对紧密,线粒体略有肿胀但结构基本完整,线粒体嵴排列紊乱减少,空泡亦显着减少;借助HPLC-MS挖掘少弱精子症模型大鼠在治疗前后代谢物质的差异,结果发现花生四烯酸、精氨酸和脯氨酸、苯丙氨酸以及甘油磷脂这四条代谢物质通路在治疗前后存在显着差异（P<0.05）;第五,以甘油磷脂代谢途径为基础,验证了可能涉及的通路如Bcl-2/Bax-Caspase3/9以及RIPK1-MLKL/pMLKL的蛋白表达情况;与溶剂对照组相比,治疗后的线粒体凋亡通路Bax、Caspase3/9表达明显降低（P<0.05）,而Bcl-2表达显着增加（P<0.05）;在细胞坏死性凋亡通路中,TNF-α、RIPK1以及pMLKL表达量显着增加（P<0.05）,pMLKL表达则是明显降低（P<0.05）;细胞特异性标志物如睾丸紧密连接标志物Occludin,支持细胞标志物SOX9,间质细胞标志物StAR以及肽能神经纤维标志物PGP9.5等经治疗后都有明显恢复（P<0.05）。结论:雄激素治疗对于睾酮低下性少弱精子症大鼠模型精子生成与生殖功能恢复具有明显改善作用。1.通过探索不同剂量的雄激素对正常大鼠的生殖激素水平及生精功能的影响,筛选与确定7.56mg/kg和15.12mg/kg两个“生理剂量”用于少弱精子症模型大鼠的治疗实验;2.在建立的睾酮低下型少弱精子症大鼠模型的基础上,我们发现15.12mg/kg剂量的十一酸睾酮无论是在改善生殖内分泌激素水平和精子质量,还是在减轻氧化应激产物对细胞组织损伤都有相对更好的效果;3.电镜结果提示:十一酸睾酮15.12mg/kg剂量对于生精细胞超微结构,包括细胞间隙和线粒体地恢复更加明显,在借助HPLC-MS代谢组学的基础上发现磷脂甘油代谢通路具有显着差异性;4.雄激素可通过线粒体凋亡途径以及细胞坏死性凋亡途径来实现其治疗作用,并且可改善相关细胞标志物来调控生精过程。
刘阳[8]（2020）在《基于mTOR通路探讨大补元煎对VCD所致大鼠POI模型的影响及机制研究》文中指出目的:随着我国社会结构变化及婚育观念的转变,越来越多女性初次孕产年龄推迟,由此带来的高龄生育问题日渐严峻。早发性卵巢功能不全的发病率有逐年上升的趋势且伴有年轻化,而卵巢功能减退可引起女性生育能力降低。结合现有理论研究、基础实验及临床研究,运用大补元煎固本培元可以延缓衰老,本课旨在建立早发性卵巢功能不全大鼠模型,利用大补元煎对动物模型进行干预,观察大补元煎对早发性卵巢功能不全大鼠模型的影响,并与阳性药物戊酸雌二醇进行对照,以期从模型大鼠一般情况（体型、生活习性、纳食及排泄情况）、体重变化、动情周期、自主活动能力、卵巢及子宫重量与脏器指数、卵巢及子宫组织病理学、血清性激素水平、血清细胞因子水平及相关生物分子水平探讨大补元煎影响动物模型的机制。方法:1.模型构建方法:选取有连续两个正常动情周期的二月龄雌性SD大鼠,每天腹腔注射造模剂4-去氧乙烯基环己烯160mg/kg,连续注射15天。空白组大鼠每日腹腔注射等体积生理盐水。2.给药方法:停止腹腔注射造模剂第31日起,对照组予戊酸雌二醇溶液灌胃;中药各组予大补元煎汤剂灌胃,各组大鼠给药剂量见表2.13,按10ml/kg分两次给药,连续4周;空白组及模型组大鼠给予等体积蒸馏水。3.标本采集方法:标本采集前禁食12小时,不禁水,麻醉前给大鼠称重,用4%水合氯醛溶液按0.5ml/100g进行腹腔注射麻醉,取腹主动脉血（至少10ml）,静置40分钟后4℃3000r/min离心取血清,制备好的血清置入-80℃冰箱冻存备用。分离大鼠双侧卵巢、子宫,剪下后剥离周围的筋膜、脂肪组织,称重后将每只大鼠一侧卵巢组织置入液氮冻存以用于相关指标检测,另一侧卵巢、子宫置于4%的甲醛溶液中固定后制作成蜡块切片用于病理组织切片光镜观察及进行免疫组化制片。4.酶联免疫吸附试验检测各组大鼠血清性激素（雌二醇、促卵泡生成素、促黄体生成素）、细胞因子水平（抗苗勒管激素、血清抑制素B）;荧光逆转聚合酶链反应测定各组大鼠卵巢组织中PI3KmRNA、AKTmRNA、mTORmRNA、PTENmRNA的相对表达量;蛋白质印迹法测定各组大鼠卵巢组织中p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、PTEN蛋白表达情况;免疫组化法检测颗粒细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白质的阳性表达情况。结果:1.一般情况:空白组大鼠外观体征,行为活动,饮食及排泄物均正常。模型组大鼠从外形上表现为皮毛疏散、无光泽,腹部及臀部脂肪组织较肥厚,从生活习性上表现为活动减弱,喜扎堆蜷缩,或相互推搡,部分大鼠烦躁、好斗,易被激惹,大部分大鼠进食减少,日间活动增多,昼夜活动减少,尿液增多,大便稀软,对照组及中药各剂量组大鼠以上情况有不同程度改善。2.体重变化:与空白组比较,模型组大鼠体重增速较快（P<0.01）。与模型组比较,对照组、中药高剂量、中药中剂量组、中药低剂量组大鼠体重增速均较缓（P<0.01）。3.动情周期:与空白组比较,模型组大鼠动情周期时长延长（P<0.01）。与模型组比较,对照组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组大鼠动情周期时长缩短（P<0.01）。4.自主活动情况:与空白组比较,模型组大鼠的活动总路程缩短（P<0.05）,平均速度变缓（P<0.05）,休息时间延长（P<0.01）,中央活动时间缩短（P<0.01）。与模型组比较,对照组大鼠的休息时间缩短（P<0.01）,中央活动时间延长（P<0.01）,活动总路程、平均速度无统计学差异（P≥0.05）;中药高剂量组、中药中剂量组大鼠的活动总路程延长（P<0.05）,平均速度增快（P<0.05）,休息时间缩短（P<0.05）,中央活动时间延长（P<0.05）;中药低剂量组大鼠的活动总路程延长（P<0.05）,休息时间缩短（P<0.01）,中央活动时间延长（P<0.05）,活动平均速度则无统计学差异（P≥0.05）。5.卵巢重量、卵巢指数:与空白组比较,模型组大鼠的卵巢重量、卵巢指数均偏低（P<0.01）。与模型组比较,对照组、中药高剂量组、中药中剂量组大鼠的卵巢重量较重（P<0.01）、卵巢指数较高（P<0.05）;而中药低剂量组大鼠的卵巢重量、卵巢指数均无统计学差异（P≥0.05）。6.子宫重量、子宫指数:与空白组比较,模型组大鼠的子宫重量、子宫指数均偏低（P<0.05）。与模型组比较,对照组、中药高剂量组、中药中剂量组大鼠的子宫重量较重（P<0.05）、子宫指数较高（P<0.01）;而中药低剂量组大鼠的子宫重量、子宫指数均无统计学差异（P≥0.05）。7.卵巢组织形态:空白组大鼠卵巢组织中皮质和髓质结构完整,可见各级发育的卵泡、成熟卵泡及黄体组织,血管丰富,间质内未见淋巴细胞浸润及纤维化。模型组卵巢组织结构紊乱,各级发育卵泡数减少,以始基卵泡、初级卵泡的数目减少较为明显,并可见较多闭锁卵泡,卵泡中颗粒细胞排列疏松,颗粒细胞层数减少;组织内未见黄体组织。与模型组比较,对照组及中药各给药组大鼠可见各级卵泡,成熟卵泡、卵泡内颗粒细胞较模型组有所增多且呈放射状整齐排列,以中药高剂量组、中药中剂量组较为明显;各组卵巢组织中均可见黄体组织。8.子宫组织形态:空白组大鼠子宫子宫壁及子宫内膜较厚,腺体数量较多,部分腺体扩张成小囊,上皮细胞复层化,细胞呈柱状、无异型性,可见分泌泡,结缔组织疏松。模型组子宫壁及子宫内膜变薄,腺体数量较空白组减少,结构紊乱不规则,上皮细胞排列紊乱,核染色较深。与模型组比较,对照组及各给药组子宫内膜增厚,腺体及血管增多,上皮细胞排列规则,形态趋于正常,结缔组织较疏松。9.血清性激素水平:与空白组比较,模型组大鼠E2降低（P<0.01）,FSH升高（P<0.01）,LH升高（P<0.01）。与模型组比较,对照组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组大鼠E2升高（P<0.01）,FSH降低（P<0.01）,LH降低（P<0.01）。10.细胞因子水平:与空白组比较,模型组大鼠AMH降低（P<0.01）,INHB降低（P<0.01）。与模型组比较,对照组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组大鼠AMH、INHB均升高（P<0.01）,差异具有显着性。11.大鼠卵巢PI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA、PTEN mRNA相对表达量情况:与空白组比较,模型组大鼠PI3K、AKT、mTORmRNA表达下调（P<0.05）,PTEN mRNA表达上调（P<0.05）。与模型组比较,对照组、中药给药各组大鼠PI3K、AKT、mTORmRNA表达上调（P<0.05）,PTEN mRNA表达下调（P<0.05）。12.大鼠卵巢p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、PTEN蛋白表达情况:与空白组比较,模型组大鼠PI3K、AKT、mTOR磷酸化程度下降（P<0.01）,PTEN表达上调（P<0.01）。与模型组比较,对照组、中药高剂量组、中药中剂量组大鼠PI3K、AKT、mTOR磷酸化程度上升（P<0.05）,PTEN表达下调（P<0.05）;中药低剂量组大鼠PI3K、mTOR磷酸化程度、PTEN表达情况无统计学差异（P≥0.05）,AKT磷酸化程度上升（P<0.01）。13.颗粒细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的阳性表达情况:（1）与空白组比较,模型组大鼠Bcl-2 IOD较低（P<0.01）,Bax IOD较高（P<0.01）。与模型组比较,对照组、中药高剂量组、中药中剂量组大鼠Bcl-2IOD较高（P<0.01）,Bax IOD较低（P<0.01）;中药低剂量组大鼠Bcl-2IOD无统计学差异（P≥0.05）,Bax IOD较低（P<0.01）。（2）与空白组比较,模型组大鼠Caspase-3 IOD较高（P<0.01）。与模型组比较,对照组、中药给药各组大鼠Caspase-3 IOD较低（P<0.05）。结论:1.利用4-去氧乙烯基环己烯可以建立早发性卵巢功能不全大鼠模型,其构建的大鼠疾病模型与早发性卵巢功能不全有类似的病理特点,可以作为研究早发性卵巢功能不全的理想动物模型。2.经过大补元煎治疗后的模型大鼠在行为学、组织学、性激素、细胞因子方面与阳性对照药物戊酸雌二醇取得了相似的治疗作用,推测大补元煎中具有类雌激素样作用的成分。3.大补元煎对mTOR信号通路有正向调节作用,同时能够增强抑凋亡因子Bcl-2的表达及抑制促凋亡因子Bax、Caspase-3的表达,从而抑制大鼠卵巢颗粒细胞过度凋亡,并保护卵泡的发育以达到改善卵巢功能的目的,这可能是大补元煎治疗POI的分子机制之一。
李琰峰[9]（2020）在《基于SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2通路探讨广嗣育麟汤治疗男性不育的疗效及其作用机制的研究》文中研究说明目的男性不育症已成为目前社会关注的热点问题。西医治疗存在一定的局限性,相当一部分男性不育问题不能得到有效解决;中医治疗具有独特的治疗优势疗效确切,能很好地弥补西医治疗男性不育症的不足;广嗣育麟汤以补肾生精为治疗原则,临床疗效确切,值得进一步深入探讨;本研究通过随机对照试验进一步明确广嗣育麟汤的临床疗效,同时通过动物实验探讨其改善生精功能的机制与SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2信号通路相关性。方法临床研究:采用随机对照试验的方法,阳性对照组采用左卡尼汀治疗,观察组用左卡尼汀联合广嗣育麟汤治疗;疗程为90天;观察在治疗前后患者精液量、液化程度、精子浓度、精子总数、精子总活率、前向运动百分率等精液质量指标以及患者中医症状评分的变化;通过统计分析观察广嗣育麟汤治疗肾虚证男性不育的疗效。实验研究:采用雷公藤多苷诱导建立生精障碍大鼠模型,造模成功后,随机分为空白组、模型组、对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组12只;空白组和模型组给予去离子水灌胃,对照组给予左卡尼汀口服液灌胃,低、中、高剂量组给予广嗣育麟汤悬混液低、中、高剂量灌胃,共计4周;观察大鼠一般情况、体重、睾丸和附睾脏器系数、精液质量、血清性激素、抑制素B、附睾肉毒碱等指标,以及睾丸组织形态病理改变和超微结构的变,探讨广嗣育麟汤最佳药物治疗浓度。采用免疫组化检测方法检测大鼠睾丸组织Bax、Bcl-2蛋白的含量;采用WB和Real time PCR方法检查SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2信号通路相关蛋白含量及mRNA的表达量;探讨广嗣育麟汤改善生精功能的机制,以及其与SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2信号通路相关性。结果临床研究:治疗后精液质量相关指标观察组明显优于对照组,差异显着（P<0.05或P<0.01）;中医症状总评分以及肾精亏虚证、肾阳虚证、肾阴虚证不同证候评分,观察组也优于对照组,差异显着（P<0.05或P<0.01）;根据临床疗效标准,广嗣育麟汤联合左卡尼汀整体疗效明显优于单纯左卡尼汀治疗疗效,差异有统计学意义（P<0.05）。整个观察期间未出现不良反应报告。实验研究:干预结束后,广嗣育麟汤各剂量组大鼠一般情况、体重、脏器系数、精液质量、抑制素B、附睾肉毒碱等指标检测明显优于模型组,而且中剂量组优于对照组;性激素相关指标中,广嗣育麟汤各组优于模型组,差异有统计学差异（P<0.05）,中剂量组LH和高剂量组T优于对照组;观察睾丸组织病理改变和超微结构可见广嗣育麟汤各组生精细胞形态和数量、线粒体等细胞器数量明显优于模型组和对照组;采用免疫组化检测大鼠睾丸组织Bax、Bcl-2蛋白的含量,可见广嗣育麟汤组Bax含量明显低于对照组,Bcl-2含量以及Bcl-2/Bax 比值均明显高于同对照组;采用WB和Real time PCR方法检查SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2信号通路相关蛋白含量及mRNA的表达量,可见观察组SCF、c-kit、PI3K、AKT、Bcl-2蛋白含量均高于对照组,Bad、Bax蛋白含量均低于对照组;mRNA的表达量SCF、c-kit、AKT、Bcl-2高于对照组,Bad、Bax mRNA的表达量均低于模型组。结论1.广嗣育麟汤可以有效改善男性不育症患者的精液质量,降低肾虚证患者中医症状评分;2.广嗣育麟汤可以有效改善生精障碍模型大鼠一般状态,提高睾丸附睾脏器系数、精液质量、抑制素B和附睾肉毒碱含量,参与下丘脑-垂体-性腺轴性激素的调控,修复睾丸组织及超微结构的形态;3.广嗣育麟汤中剂量为最佳治疗药物浓度;4.广嗣育麟汤可以通过SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2信号通路促进生精细胞的增殖和抑制生精细胞的凋亡。综上所述,广嗣育麟汤可以有效治疗肾虚型男性不育症,其调控SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2信号通路蛋白和基因是作用机制之一。
陈美佳[10]（2020）在《补肾化痰法促进胞饮突发育及调控子宫内膜容受性相关分子改善肥胖PCOS雌性大鼠子宫内膜容受性的效应机制》文中研究说明目的:本研究观察补肾化痰法调节胞饮突发育及调控子宫内膜容受性相关分子改善肥胖PCOS模型雌鼠子宫内膜容受性机制。方法:采用7～8周龄SD雌性大鼠123只,通过阴道脱落细胞涂片筛选动情周期正常的120只雌性大鼠。随机选20只作为空白对照组的雌性大鼠,其余用来曲唑加高脂乳剂建立肥胖PCOS模型,造模成功后,将模型大鼠随机平均分为补肾化痰拟方高、中、低剂量组、模型对照组、阳性对照组;中药高、中、低剂量组灌服等体积相应浓度补肾化痰拟方中药,阳性对照组予二甲双胍,模型空白组正常对照组灌服等体积蒸馏水。药物治疗21天后称重、取血后杀死动物取材,取卵巢、子宫内膜进行HE染色,电镜下观察胞饮突,Elisa法检测血清E2、PROG、T的表达,免疫组织化学法检测PR、E2R、整合素αvβ3的表达水平,q PCR法检测雌鼠子宫Cyclin D1m RAN表达。SPSS25.0统计软件处理所得数据。结果:1. 补肾化痰法对肥胖型PCOS雌性大鼠动情及体质量的影响:与空白对照组相比,模型对照组雌性大鼠动情周期紊乱,体质量显着增加（P<0.01）;与模型对照组相比,中药高剂量组动情周期规律,中药中低剂量组动情周期比较规律,中药各组体质量显着下降（P<0.01）。2. 补肾化痰法对肥胖型PCOS雌性大鼠血清性激素的影响与空白对照组相比,模型对照组雌性大鼠PROG、E2下降（P<0.05或P<0.01）,T升高（P<0.01）;与模型对照组相比,中药高剂量组PROG、E2上升（P<0.05）,T下降（P<0.05）,中药中低剂量组PROG、T、E2无统计学意义。3. 补肾化痰法对肥胖型PCOS雌性大鼠卵巢及卵泡发育的影响:与空白对照组对比,模型对照组雌鼠卵巢中的间质纤维组织增生,卵泡颗粒层变薄,卵泡膜细胞层显着增厚,闭锁卵泡数量增多,黄体数量有所减少;与模型对照组比较,补肾化痰复方高剂量组雌鼠卵巢的卵泡颗粒细胞层增厚,闭锁卵泡数量减少,可见不同发育阶段的初级、次级甚至成熟卵泡,黄体有所增加。4. 补肾化痰法对肥胖型PCOS雌性大鼠子宫形态及胞饮突发育的影响:与空白对照组相比较,模型对照组胞饮突处于发育期,发育中的胞饮突,子宫处于发情前期大量子宫内膜上皮细胞变性、坏死,淋巴细胞、腺上皮细胞点状坏死、核固缩,腺体数量显着下降（P<0.01）。与模型对照组比较,中药高剂量组胞饮突处于成熟期,其形态与空白组相似,中药中剂量组胞饮突处于发育晚期,大量发育快成熟的胞饮突,中药低剂量组胞饮突处于发育初期,数量多;阳性组处于胞饮突处于发育晚期,有少量的成熟胞饮突和大量发育中的胞饮突中药高剂量组子宫内膜处于发情期子宫内膜增生、固有层水肿,中药低中剂量处于发情前期,淋巴细胞浸润、固有层水肿;阳性组处于发情前期淋巴细胞、中性粒细胞浸润子宫内膜上皮细胞变性、坏死。中药各组腺体个数显着上升（P<0.01）。5. 补肾化痰法对肥胖型PCOS雌性大鼠子宫容受性相关分子的影响:与空白对照组相比,模型对照组子宫容受性相关分子整合素αvβ3、Cyclin D1m RNA表达下降（P<0.05）,PR、E2R表达升高（P<0.05）;与模型对照组相比,中药高剂量组子宫容受性相关分子整合素αvβ3、Cyclin D1m RNA表达升高（P<0.05或P<0.01）,PR、E2R表达下降（P<0.01或P<0.05）,中药中低剂量组整合素αvβ3、Cyclin D1m RNA、PR、E2R无统计学意义。结论:1.补肾化痰法能够规律肥胖PCOS模型雌性的动情周期,控制大鼠体重持续增加,从而改善PCOS雌性大鼠的肥胖状态。2.补肾化痰法能够纠正肥胖PCOS模型雌性大鼠生殖内分泌紊乱,改善高雄状态,促进卵巢的发育,通过胞饮突、E2R、PR、整合素αvβ3等建立良好的子宫内膜内环境,发挥改善子宫内膜容受性的效应。3.补肾化痰法可能通过调节性激素,激活Cyclin D1相关信号通路,发挥改善子宫内膜容受性的机制。
二、用或不用GnRH试验时麻醉对人的LH与FSH水平的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、用或不用GnRH试验时麻醉对人的LH与FSH水平的影响（论文提纲范文）
（1）产后抑郁症中医证候特点分析及逍遥散的干预作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 产后抑郁症中西医研究进展 |
| 1 产后抑郁症的西医研究进展 |
| 2 产后抑郁症的中医研究进展 |
| 3 逍遥散治疗产后抑郁症的病机及治则分析探讨 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 雌激素受体与产后抑郁症相关性研究进展 |
| 1 雌激素受体 |
| 2 雌激素受体介导的PKA/CREB/BDNF信号通路 |
| 3 小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一章 产后抑郁症影响因素及中医证候特点的临床研究 |
| 1 研究对象 |
| 2 研究方法 |
| 3 研究结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 中医治疗产后抑郁症用药规律的现代文献研究 |
| 1 研究对象 |
| 2 研究方法 |
| 3 研究结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 逍遥散治疗产后抑郁症作用机制的动物实验研究 |
| 实验一 产后抑郁症大鼠模型的建立与评价 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 研究结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 实验二 基于HPG轴探讨产后抑郁症发病机制及逍遥散干预作用机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 研究结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 实验三 产后抑郁症大鼠下丘脑中雌激素受体介导的PKA/CREB/BDNF信号通路变化及逍遥散的干预作用机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 研究结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结语 |
| 1 研究总结 |
| 2 创新性 |
| 3 不足之处与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
（2）猪GRP多克隆抗体的制备与应用及其对Leydig cells睾酮分泌的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语 |
| 文献综述: 胃泌素释放肽及其受体与睾丸间质细胞研究进展 |
| 1 胃泌素释放肽及其受体研究进展 |
| 1.1 胃泌素释放肽及其受体的发现 |
| 1.2 胃泌素释放肽及其受体在体内的表达 |
| 1.3 胃泌素释放肽及其受体在体内的功能研究 |
| 1.4 GRP多克隆抗体的制备 |
| 2 睾丸间质细胞研究进展 |
| 2.1 睾丸间质细胞 |
| 2.2 生殖相关激素睾酮 |
| 2.3 睾丸间质细胞的增殖与凋亡 |
| 3 研究目的及意义 |
| 第1章 猪胃泌素释放肽的原核表达及其多克隆抗体的制备 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 仪器和试剂 |
| 1.2 重组载体的构建 |
| 1.3 融合蛋白pGRP的获得 |
| 1.4 多克隆抗体的制备 |
| 2 结果 |
| 2.1 pET32a(+)-pGRP重组载体的构建 |
| 2.2 His-tag-pGRP融合蛋白的获得 |
| 2.3. pGRP多克隆抗体的获得 |
| 3 讨论 |
| 第2章 GRP蛋白在猪体内的分布与表达 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1仪器和试剂 |
| 1.2 GRP在猪外周组织的分布情况 |
| 1.3 GRP蛋白在猪组织中的表达情况 |
| 2 结果 |
| 2.1 GRP在猪外周组织的分布情况 |
| 2.2 GRP蛋白在猪组织中的表达情况 |
| 3 讨论 |
| 第3章 GRP对猪睾丸间质细胞睾酮分泌和合成的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 仪器和试剂 |
| 1.2 细胞培养和处理 |
| 1.3 GRP对Leydig cells中GRPR表达的影响 |
| 1.4 GRP对猪Leydig cells睾酮分泌的影响 |
| 1.5 GRP对Leydig cells睾酮合成相关蛋白表达的影响 |
| 1.6 GRP对Leydig cells细胞增殖的影响 |
| 1.7 GRP对Leydig cells凋亡的影响 |
| 1.8 GRP对Leydig cells增殖和凋亡相关蛋白表达的影响 |
| 1.9 统计方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 GRPR在Leydig cells中的表达情况 |
| 2.2 GRP对猪Leydig cells睾酮分泌及睾酮合成相关蛋白的影响 |
| 2.3 GRP对猪Leydig cells细胞活性的影响 |
| 2.4 GRP对猪Leydig cells细胞凋亡的影响 |
| 2.5 GRP对猪Leydig cells中pPKA/PKA和pPKC/PKC蛋白表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（3）运用CRISPR/Cas9技术构建PCSK9及CBS点突变家兔心血管疾病模型的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 第1章 运用CRISPR/Cas9技术构建PCSK9点突变家兔模型 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验仪器 |
| 1.3 实验试剂 |
| 1.4 主要试剂配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 sgRNA及ssODN的设计 |
| 2.2 构建同时表达sgRNA和Cas9的二合一质粒 |
| 2.3 sgRNA和Cas9 mRNA的体外转录 |
| 2.4 家兔超数排卵、显微注射以及受精卵移植 |
| 2.5 F0代家兔的基因型鉴定和DNA测序 |
| 2.6 脱靶检测 |
| 2.7 蛋白结构模拟 |
| 2.8 表型检测 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 sgRNA和Cas9的二合一质粒的构建 |
| 3.2 F0代家兔的获得及基因型鉴定 |
| 3.3 脱靶位点预测与检验 |
| 3.4 蛋白结构示意图 |
| 3.5 表型检测 |
| 3.6 F1代兔的繁殖 |
| 讨论 |
| 第2章 运用CRISPR/Cas9技术构建CBS点突变家兔模型 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验仪器 |
| 1.3 实验试剂 |
| 1.4 主要试剂配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 CRISPR/Cas9系统的建立 |
| 2.2 家兔超数排卵、显微注射以及受精卵移植 |
| 2.3 基因型检测 |
| 2.4 药物实验 |
| 2.5 生化检测 |
| 2.5.1 血脂水平检测 |
| 2.5.2 Hcy水平检测 |
| 2.6 蛋白质免疫印迹法(Western Blot) |
| 2.7 血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳 |
| 2.8 组织病理学检测 |
| 2.9 数据分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 CBS突变兔的制备和基因型分析 |
| 3.2 脱靶检测 |
| 3.3 甜菜碱可以改善CBS突变兔的高脂血症和高同型半胱氨酸血症 |
| 3.4 形态学分析 |
| 3.5 组织学分析 |
| 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 抗动脉粥样硬化药物研发的最新进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（4）不同剂量瑞芬太尼复合丙泊酚用于无痛取卵术的临床研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 实验一 评价不同剂量瑞芬太尼复合丙泊酚用于无痛取卵术的麻醉效果 |
| 材料与方法 |
| 研究结果 |
| 1 病例的筛选及剔除 |
| 2 各组间人口基线特征比较 |
| 3 各组术中血流动力学变化比较 |
| 4 各组间取卵时间及术中丙泊酚用量比较 |
| 5 各组间术中不良反应比较 |
| 6 各组间术后苏醒质量比较 |
| 7 各组间术后不良反应比较 |
| 实验二 评价瑞芬太尼复合丙泊酚静脉麻醉对ART结局的影响 |
| 材料与方法 |
| 研究结果 |
| 1 病例的筛选及剔除 |
| 2 各组间基本特征比较 |
| 3 各组间胚胎实验室质控指标比较 |
| 4 各组间妊娠结果比较 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 麻醉药物用于取卵术对辅助生殖结局的影响 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表学术论文 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（5）基于AMPK/SIRT1/PGC-1α通路研究醒脾解郁方对抑郁大鼠海马神经元突触重塑的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 抑郁症现代医学研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 抑郁症中医药研究进展 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 1. 抑郁症病理机制中的线粒体损伤 |
| 2. 线粒体能量代谢障碍与突触可塑性损伤 |
| 3. 线粒体生物合成异常与抑郁症神经元突触重塑 |
| 4. 从“脾”论治抑郁症或成为中医治疗的新途径 |
| 参考文献 |
| 实验一 醒脾解郁方对肝郁脾虚抑郁大鼠行为学及海马神经元损伤的保护作用研究 |
| 概述 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验二 基于AMPK/SIRT1/PGC-1α介导的线粒体生物合成研究醒脾解郁方对抑郁大鼠海马神经元突触重塑的影响 |
| 概述 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验三 基于AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路探讨醒脾解郁方含药血清对皮质酮诱导海马神经元损伤突触重塑的影响 |
| 概述 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验四 基于AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路探讨突触微环境对抑郁大鼠海马神经元突触重塑的影响及醒脾解郁方干预效应 |
| 概述 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 结语 |
| 一、研究总结 |
| 二、初步结论 |
| 三、存在不足 |
| 四、创新点 |
| 五、展望 |
| 第四部分 附录 |
| 附录1: 致谢 |
| 附录2 攻读学位期间发表的学术论文及参与课题情况 |
| 附录3 个人简历 |
（6）肥胖影响雌性小鼠青春期启动及与Leptin/GnRH关系的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料与试剂 |
| 2.1.1 动物 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 动物分组与饲养 |
| 2.2.2 饲料表 |
| 2.2.3 肥胖的判定 |
| 2.2.4 标本的采集与处理 |
| 2.2.5 检测指标及方法 |
| 2.2.6 数据处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 CON和 HFD小鼠的体重比较 |
| 3.2 CON和 HFD小鼠体脂肪、瘦体重比较 |
| 3.3 CON和 HFD小鼠脂肪重量比较 |
| 3.4 CON和 HFD小鼠脏器重量、脏器系数比较 |
| 3.5 CON和 HFD小鼠阴道口初开日龄比较 |
| 3.6 CON和 HFD小鼠卵巢光镜下病理改变比较 |
| 3.7 CON和 HFD小鼠卵巢电镜下病理改变比较 |
| 3.8 CON和HFD小鼠血清中Leptin、E2、FSH、LH、T水平比较 |
| 3.9 CON和 HFD小鼠下丘脑GnRH蛋白和 mRNA表达水平比较 |
| 3.10 CON和 HFD小鼠卵巢中GnRH蛋白和 mRNA表达水平比较 |
| 3.11 CON和 HFD小鼠下丘脑、卵巢中Ob-R蛋白和 mRNA表达水平比较 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 肥胖对雌性生殖的影响及其内分泌机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 社会实践 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）睾酮治疗少弱精子症的疗效与作用机制的实验动物研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 参考文献 |
| 第一章 雄激素治疗少弱精子症的研究总结 |
| 前言 |
| 第一节 雄激素及相关制剂在男性特发性少弱精子症治疗中的应用现状 |
| 1. 男性不育症及特发性少弱精子症概念 |
| 2. 睾酮生成与精子发生的关系 |
| 3. 雄激素口服及注射常用制剂的药代动力学以及安全性 |
| 4. 雄激素制剂的用法和疗效 |
| 5. 中医药对少弱精子症的治疗 |
| 6. 雄激素在少弱精子症治疗中的展望 |
| 参考文献 |
| 第二节 国内雄激素治疗少弱精子症对患者精液参数改善情况的荟萃分析 |
| 1. 资料与方法 |
| 1.1 检索策略 |
| 1.2 干预措施以及结局变量 |
| 1.3 疗效判定标准 |
| 1.4 纳入标准 |
| 1.5 剔除标准 |
| 1.6 文献筛选与资料提取 |
| 1.7 文献质量评估 |
| 1.8 统计学处理方法 |
| 2. 结果 |
| 2.1 文献检索情况 |
| 2.2 荟萃分析结果 |
| 2.2.1 精液量 |
| 2.2.2 精子浓度 |
| 2.2.3 精子活力 |
| 2.2.4 精子畸形率 |
| 2.2.5 精子活动率 |
| 2.2.6 总有效率(%) |
| 2.3 发表偏倚分析 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二章 雄激素对正常大鼠生殖激素水平及生精功能的影响 |
| 前言 |
| 第一节 正常大鼠雄激素的给药方式及标本取材 |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 第二节 TU注射对正常大鼠睾丸形态的影响 |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 第三节 TU注射对正常大鼠生殖激素的影响 |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 TST对少弱精子症模型大鼠生殖功能影响的研究 |
| 前言 |
| 第一节 少弱精子症大鼠模型的建立、雄激素治疗性给药以及标本取材 |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 第二节 TST对少弱精子症大鼠模型的睾丸组织形态的影响 |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 第三节 TST对睾丸组织生精细胞凋亡的检测(TUNEL法) |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 第四节 TST对少弱精子症模型大鼠生殖激素的影响 |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 第五节 TST对少弱精子症模型大鼠睾丸组织氧化应激指标以及睾酮水平的影响 |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四章 TST对少弱精子症模型大鼠睾丸组织蛋白及血清代谢组学的调控研究 |
| 前言 |
| 第一节 透射电镜观察“生理剂量”TST对大鼠睾丸组织超微结构的影响 |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 第二节 TST对少弱精子症模型大鼠作用的HPLC-MS分析——基于代谢组学的研究 |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 结论 |
| 第三节 Bcl-2/Bax-Caspase3/9和TNFα-RIPK1-MLKL凋亡途径相关基因蛋白表达调控 |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 总结 |
| 博士期间发表论文及参与科研项目情况 |
| 致谢 |
（8）基于mTOR通路探讨大补元煎对VCD所致大鼠POI模型的影响及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 理论探讨 |
| 第一节 早发性卵巢功能不全的中医研究进展 |
| 1 古代中医文献研究 |
| 2 现代中医关于早发性卵巢功能不全的研究 |
| 第二节 大补元煎治疗早发性卵巢功能不全中医理论依据及研究进展 |
| 第三节 早发性卵巢功能不全的现代医学研究进展 |
| 1 概述 |
| 2 POI发病机制及病因 |
| 3 POI诊断及治疗 |
| 第四节 基于m TOR信号通路与早发性卵巢功能不全的相关研究 |
| 1 mTOR通路的分子基础 |
| 2 mTOR通路对卵泡发育的影响 |
| 3 基于m TOR信号通路对POI的相关基础研究 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 实验用大鼠模型的构建与模型评价 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 统计方法 |
| 4 实验结果 |
| 5 实验小结 |
| 实验二 大补元煎对早发性卵巢功能不全大鼠的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 统计方法 |
| 4 实验结果 |
| 5 实验小结 |
| 实验三 基于m OTR信号通路探讨大补元煎治疗早发性卵巢功能不全大鼠的机制 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 统计方法 |
| 4 实验结果 |
| 5 实验小结 |
| 第三部分 讨论 |
| 1 VCD构建POI大鼠模型评价 |
| 2 大补元煎对POI大鼠的影响 |
| 3 大补元煎治疗POI分子机制探讨 |
| 4 大补元煎治疗POI中医机理探讨 |
| 5 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 实验流程图 |
| 在校期间发表论文及课题参与情况 |
| 致谢 |
（9）基于SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2通路探讨广嗣育麟汤治疗男性不育的疗效及其作用机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 男性不育症中医诊治研究进展 |
| 1 病因病机 |
| 2 辨证分型 |
| 3 辨证论治 |
| 4 总结 |
| 参考文献 |
| 综述二 男性不育症西医诊治研究进展 |
| 1 男性不育症的病因 |
| 2 男性不育症的治疗 |
| 3 生精细胞增殖、凋亡的研究进展 |
| 4 总结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 临床研究 广嗣育麟汤治疗肾虚型男性不育症的临床研究 |
| 前言 |
| 临床资料 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 实验研究 |
| 实验一 广嗣育麟汤对GTW诱导生精障碍模型大鼠生精功能的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 广嗣育麟汤对生精障碍大鼠的SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2信号通路相关蛋白及mRNA表达的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
（10）补肾化痰法促进胞饮突发育及调控子宫内膜容受性相关分子改善肥胖PCOS雌性大鼠子宫内膜容受性的效应机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词中英文对照 |
| 引言 |
| 1.实验材料 |
| 1.1. 实验动物 |
| 1.2. 饲养环境 |
| 1.3. 实验试剂及药物 |
| 1.4. 实验的仪器、设备及软件系统 |
| 1.5. 实验所需的耗材 |
| 1.6. 药物制备 |
| 2.实验方法 |
| 2.1. 研究技术路线图 |
| 2.2. 动物造模、分组及给药方法 |
| 2.3. 标本采集与处理方法 |
| 2.4. 指标检测及检测方法 |
| 2.5. 统计学处理 |
| 3.实验结果 |
| 3.1. 补肾化痰法对肥胖PCOS雌性大鼠动情周期的影响 |
| 3.2. 补肾化痰法对肥胖PCOS雌性大鼠体质量的影响 |
| 3.3. 补肾化痰法对肥胖PCOS雌性大鼠血清性激素的影响 |
| 3.4. 补肾化痰法对肥胖PCOS雌性大鼠卵巢的影响 |
| 3.5. 补肾化痰法对肥胖PCOS雌性大鼠子宫内膜形态的影响 |
| 3.6. 补肾化痰法对肥胖型PCOS雌鼠子宫内膜容受性相关分子的影响 |
| 4.讨论 |
| 4.1. 来曲唑联合高脂建立肥胖PCOS模型 |
| 4.2. 阳性药物的选择与依据 |
| 4.3. 子宫内膜容受性下降与肥胖PCOS的相关性 |
| 4.4. 从补肾化痰调治肥胖型PCOS独具优势 |
| 4.5. 补肾化痰法改善子宫内膜容受性的效应机制 |
| 5.结论 |
| 本课题研究的基础及课题创新点 |
| 一、课题研究的基础 |
| 二、课题创新点 |
| 问题与展望 |
| 一、存在的问题 |
| 二、研究展望 |
| 参考文献 |
| 附件1:综述 中医药治疗PCOS子宫内膜容受性的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附件2:在读期间公开发表的学术论文、专着及科研成果 |
| 致谢 |
四、用或不用GnRH试验时麻醉对人的LH与FSH水平的影响（论文参考文献）
- [1]产后抑郁症中医证候特点分析及逍遥散的干预作用机制研究[D]. 许梦白. 北京中医药大学, 2021(01)
- [2]猪GRP多克隆抗体的制备与应用及其对Leydig cells睾酮分泌的影响[D]. 郭军培. 扬州大学, 2021
- [3]运用CRISPR/Cas9技术构建PCSK9及CBS点突变家兔心血管疾病模型的实验研究[D]. 严坤宁. 扬州大学, 2021
- [4]不同剂量瑞芬太尼复合丙泊酚用于无痛取卵术的临床研究[D]. 孙艳萍. 山东大学, 2021(12)
- [5]基于AMPK/SIRT1/PGC-1α通路研究醒脾解郁方对抑郁大鼠海马神经元突触重塑的影响[D]. 任非非. 北京中医药大学, 2021(01)
- [6]肥胖影响雌性小鼠青春期启动及与Leptin/GnRH关系的实验研究[D]. 李学思. 中国医科大学, 2021
- [7]睾酮治疗少弱精子症的疗效与作用机制的实验动物研究[D]. 安琪. 北京协和医学院, 2020(05)
- [8]基于mTOR通路探讨大补元煎对VCD所致大鼠POI模型的影响及机制研究[D]. 刘阳. 湖北中医药大学, 2020(08)
- [9]基于SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2通路探讨广嗣育麟汤治疗男性不育的疗效及其作用机制的研究[D]. 李琰峰. 北京中医药大学, 2020(04)
- [10]补肾化痰法促进胞饮突发育及调控子宫内膜容受性相关分子改善肥胖PCOS雌性大鼠子宫内膜容受性的效应机制[D]. 陈美佳. 成都中医药大学, 2020(02)