一、猪水泡病病毒的结构蛋白（论文文献综述）
郑海学[1]（2007）在《动物RNA病毒反向遗传系统的研究和建立》文中认为针对非逆转录RNA病毒发展起来的病毒反向遗传学可以实现对RNA病毒基因组结构与功能、复制与表达、病毒致病机制等研究。本研究用T7RNA聚合酶系统和聚合酶Ⅰ系统为基础建立了体内外拯救方法并初步进行应用。一、SVDV HK／70株生物特性测定、生物信息学分析及以T7 RNAP为基础的体外病毒拯救方法的建立和应用为了建立以T7 RNA聚合酶系统为基础的体外拯救病毒方法，选择猪水泡病病毒（SVDV）HK／70株作为细胞质复制的RNA病毒的研究模型。首先，分离和鉴定了该病毒，并测定了该病的一些生物学特性。然后，构建了SVDV全长cDNA并进行序列测定，以此为基础，分析了其相关生物信息学特征。为了鉴定SVDV HK／70株的全长cDNA分子的感染性，以线化的SVDV HK／70株的全长cDNA质粒(pSVOK12)为模板，应用T7 RNA聚合酶系统在体外进行转录，将获得的RNA用脂质体转染法导入IBRS-2细胞，传代培养，可以观察到典型的SVDV致细胞病变效应。使用反向血凝鉴定试验、间接免疫荧光实验、RT-PCR和序列测定进行检测，结果表明，从猪水泡病病毒全长cDNA拯救出了猪水泡病病毒（G-SVDV）；利用常规负染的方法，电镜观察了G-SVDV的形态；测定了G-SVDV的TCID50和LD50，并与亲本毒进行了比较，结果显示G-SVDV与亲本毒的毒力差别不显着。本研究结果证明，我们已经成功构建了猪SVDV HK／70的感染性cDNA克隆，为进一步探索SVDV病毒致病的分子机制及研制新型SVD疫苗奠定了良好的基础。二、以T7 RNAP为基础的体内病毒拯救方法的建立和应用为了建立高效的体内病毒拯救系统，我们利用逆转录病毒转导技术建立了稳定表达T7 RNA聚合酶的细胞系。先克隆出T7 RNAP基因，定向克隆进逆转录病毒载体pBABEpuro，得到阳性重组质粒pT7BABEpuro。共转染包装细胞，获得含有VSV-G膜的假型病毒，含有T7 RNA聚合酶基因。然后把该假型病毒感染靶细胞，把T7 RNAP基因分别整合进BHK-21、IBRS-2和SK6细胞的基因组内。通过抗性筛选，获得了稳定表达具有转录活性T7 RNA聚合酶的细胞系，通过PCR、间接免疫荧光和流式细胞仪（FCM）等技术进行鉴定，结果表明，该T7 RNAP能够被稳定地整合进靶细胞基因组内，细胞系内的T7 RNAP具有较好的转录活性，其活性传代不减弱。最后，利用该细胞系成功拯救出具有感染性的SVDV，并与亲本毒的生物学特性作了比较。该策略使RNA拯救方法简化为一步快速的拯救方法。利用该方法对CSFV C株进行了拯救，进行了拯救病毒的鉴定，并做了兔子致病性试验。三、以真核细胞RNA聚合酶Ⅰ系统为基础的体内拯救系统的建立和应用为了克服那些难以适应甚至没有可适应细胞系的病毒拯救难题，设计构建了完全利用真核细胞聚合酶的RNA病毒体内拯救系统。先克隆出所需的真核RNA聚合酶Ⅰ启动子和终止子序列，建立RNA聚合酶Ⅰ启动转录的重组质粒。然后把SVDV全长cDNA装配进该载体，在IBRS-2细胞内和乳鼠体内成功拯救出了SVDV，第一次证明了聚合酶Ⅰ系统能够高效拯救细胞质复制的正链RNA病毒。并利用该拯救系统对FMDV进行了拯救，首次证明该聚合酶I系统能够转录出至少长8.2 kb的转录本。在此基础上，构建含有外源性生物标记5B 19的SVDV HK／70全长cDNA克隆，利用聚合酶Ⅰ反向遗传拯救系统拯救出含有该标记的病毒。为制备含有基因标记疫苗和建立鉴别诊断方法奠定一定的基础。该设计思路的实现，拓宽了高效病毒拯救的途径，为病毒反向遗传学研究提供了更为高效和广泛应用的病毒拯救技术方法。
钟金栋[2]（2007）在《猪水泡病毒VP1基因克隆、表达及其检测技术的研究》文中研究表明猪水泡病（SVD）又名猪传染性水泡病，是由猪水泡病毒（SVDV）引起的一种烈性传染病，以口和蹄部产生水泡性损伤为特征，其临床症状与猪口蹄疫（FMD）极为相似，不容易区别，严重阻碍我国畜牧业和动物及其产品国际贸易的发展，引起严重的公共卫生问题，国际兽医局（OIE）将这疫病列为A类传染病。在国际贸易中，多数国家对SVD采取严格的检疫和控制措施已成为一种技术性贸易保护壁垒。猪水泡病和水泡性口炎（VSV）及口蹄疫临床症状相似，需要进行鉴别诊断，因此建立敏感性高、特异性强，快速、安全和可靠的诊断方法对于猪水泡病、水泡性口炎、口蹄疫的控制和出入境检验检疫至关重要。本研究应用基因克隆、基因表达等技术，对猪水泡病病毒外壳蛋白抗原（VP1）编码基因进行了克隆，构建于原核表达载体，高效表达目的蛋白，应用表达产物建立了酶联免疫吸附试验（ELISA），同时建立了猪水泡病RT-PCR、多重RT-PCR、实时荧光定量RT-PCR核酸检测方法，并进行了相关病毒核酸的鉴别检测，其主要内容和结果为：1．以猪水泡病病毒核酸为模板，反转录聚合酶链式反应，扩增获得849bp的VP1基因，通过T-A克隆，将VP1基因片段克隆至pMD18-T克隆载体质粒中，构建SVDV VP1基因重组质粒，并进行核苷酸序列测定确定其基因的正确性。再将片断插入pBAD／Thio TOPO表达载体，经测序鉴定，筛选获得VP1基因正向插入、有正确读码框的阳性克隆，成功构建了猪水泡病病毒VP1基因重组表达载体。经L-Arabinose诱导表达，可稳定、高效地表达VP1蛋白抗原。SDS-PAGE结果表明，以终浓度为0.002％的L—阿拉伯醛糖进行诱导，5h后表达可达到高峰，表达蛋白为融合蛋白，分子量为47.13kDa，表达产量约占菌体总蛋白的16％。Western blotting检测表明，诱导的蛋白能与猪水泡病阳性血清发生特异性反应。应用该重组抗原建立了检测猪水泡病的间接ELISA方法，以重组的猪水泡病病毒VP1蛋白为包被抗原，建立了以重组VP1蛋白为抗原检测SVDV抗体的酶联免疫吸附试验。2．根据基因库中的猪水泡病病毒高度保守的序列，设计了与SVDV互补的特异性引物，成功地建立了RT-PCR检测方法，扩增出251bp和366bp特异性条带，本试验能稳定、高效、快速地检测出猪水泡病病毒。通过检测FMDV、VSV、BHK21细胞等，对照的扩增结果均为阴性，证明该方法可特异性扩增目的基因。对SVDV RNA进行10倍系列稀释后检测，结果SVDV RNA在10-4稀释度时仍能检测到阳性，说明该方法具有较好的敏感性。3．应用RT-PCR技术，建立了多重PCR同时检测鉴别口蹄疫、猪水泡病和水泡性口炎病毒的方法。根据基因库中的口蹄疫病毒、猪水泡病病毒和水泡性口炎病毒各基因的序列，设计了与FMDV、SVDV、VSV互补的3对特异性引物，对样品中的cDNA模板进行了多重RT-PCR扩增及反应条件的优化，结果同时得到与设计相符合的3条特异性条带，分别为189bp、125bp和300bp。用这3对引物对病毒样品cDNA模板进行多次扩增，均能稳定得到与设计相符合的3条特异性条带。本试验能同时特异、敏感、快速地鉴定FMDV、SVDV和VSV。4．建立了实时荧光定量TaqMan RT-PCR检测猪水泡病病毒的方法。根据基因库中的SVDV高度保守的序列，设计合成引物和TaqMan探针，经各反应条件的优化，建立了实时荧光定量PCR技术。对SVDV进行了特异性、敏感性和重复性试验，结果表明，实时荧光TaqMan RT-PCR可检测到每个反应相当于1×102copies病毒RNA；与FMDV、VSV等其它水泡性病毒不发生交叉反应；制作的标准曲线中各浓度范围内有极好的线性关系且线性范围宽，相关系数为0.993；与常规的RT-PCR相比较，该方法具有快速、特异、敏感、重复性好、可同时检测大量样品等优点。可对样品中微量SVDV进行准确检测，是一种SVDV检测的良好方法。综上所述，本研究成功表达了猪水泡病病毒VP1基因，应用表达产物建立了酶联免疫吸附试验；并建立了猪水泡病RT-PCR、多重PCR、实时荧光定量RT-PCR核酸检测方法。该检测体系对于猪水泡病的预防和控制、出入境检验检疫以及社会公共安全显得至关重要，为我国猪水泡病的诊断和动物检疫提供了技术支撑。
冯霞[3]（2005）在《猪瘟和猪水泡病基因标记疫苗的研究》文中研究指明猪瘟和猪水泡病被世界动物卫生组织（OIE）列入A类传染病名录,世界各国对这两种疫病均采取了严加防制及消灭措施,二者也是国际贸易中必查必检的对象。疫苗接种是预防和控制动物疫病的主要手段。由于传统疫苗在生产中的生物安全隐患和感染与免疫动物难以鉴别等缺陷,利用现代分子生物学技术和免疫学理论,研制新型安全、多联、可鉴别疫苗已成必然之势。基因疫苗以其自身的诸多优点和巨大的应用潜能已成为当今的研究热点之一。本研究通过RT-PCR、套式PCR和亚克隆技术构建了猪水泡病基因疫苗、猪水泡病和猪瘟二联基因疫苗和几种猪瘟基因疫苗,研究其免疫效果,为最终研制成功猪瘟和猪水泡病基因疫苗作技术探索。 1)构建了几种猪瘟基因疫苗:包括E2基因单表达重组质粒pcDNA Es1-11、E2基因双抗原表达质粒pBudCE Es1-11/Es2-22、E2基因与报告基因lacZ共表达质粒pBudCE lacZ/Es2-22、E2基因与猪IFN-γ基因共表达质粒pBudCE Es1-11/IFN-γ、以及E2基因与猪IL-18基因共表达质粒pBudCE Es1-11/IL-18,将以上真核表达质粒分别转染BHK-21细胞,用原位染色、酶联免疫吸附试验（ELISA）或RT-PCR技术证实它们均可表达外源基因。 2)用这几种猪瘟基因疫苗免疫兔,以阻断ELISA和MTT法监测试验兔抗体水平和淋巴细胞增殖情况,并进行攻毒保护试验。结果,单表达质粒pcDNA Es1-11免疫组中有3/4兔产生E2抗体,攻毒后,4/4完全保护。双抗原表达质粒pBudCE Es1-11/Es2-22免疫组有1/4兔产生抗体,攻毒后,1/4完全保护,1/4部分保护,2/4不保护。pBudCE Es1-11/IL-18利pBudCE Es1-11/IFN-γ免疫组,都未检测到猪瘟抗体（4/4）,攻毒后,1/4部分保护,3/4不保护。pBudCE lacZ/Es2-22免疫组（3只）也没出现猪瘟抗体,攻毒后,3/3部分保护。而空载体pcDNA3.1和pBudCE4.1对照组,4/4血清阴性,攻毒后,全部发病。与对照组相比,各免疫组的淋巴细胞均有一定程度的增殖。 3)构建了猪水泡病和猪瘟二联基因疫苗pBudCE E2/P1-11,用它转染BHK-21细胞,以间接免疫荧光染色和ELISA分别检测到猪水泡病和猪瘟抗原的表达。将其免疫兔,可检测到免疫组兔T淋巴细胞增殖明显;但用阻断ELISA未检测到血消CSFV特异性抗体,用猪瘟活疫苗（Ⅱ）攻击,实验兔有1/4完全保护。用乳鼠中和试验检测,发现所有兔血清SVDV中和抗体均低于1∶4。 4)构建了猪水泡病基因疫苗pcDNA P1,将其转染的BHK-21细胞经荧光染色,可见许多特异性荧光细胞。用其单独（B组）免疫或与pcDNA IFN-γ共同（C组）免疫猪三次,检测免疫前、后猪血清中SVDV特异性抗体的变化,发现免疫后B组和C组各有两只猪产生低水平的抗体,并在攻毒后迅速升高;并对免疫前和攻毒前的猪血清用乳鼠中和试验检测SVDV特异性抗体,结果只有pcDNA P1与pcDNA IFN-γ共同免疫组中有两只猪产生低水平的中和抗体（1∶4）,其余猪的中和抗体均小于1∶4。第三次免疫3月后,用猪水泡病香港乳鼠组织毒5mL（2mL蹄叉和3mL颈部肌肉）分两个滴度（104 LD50/0.1mL和105 LD50/0.1mL）攻击,结果pcDNA P1单独免疫组（B组）有1/4获得完全保护（为104/0.1mL攻击）,pcDNA P1与pcDNA IFN-γ共同免疫组（C组）中有1/4获得部分保护（为105/0.1mL攻击）,A和D两个对照组全部发病。
田相军[4]（2005）在《猪水泡病病毒RNA的检测及VP1基因在原核中的表达》文中提出猪水泡病是由猪水泡病病毒（SVDV）引起的猪的一种烈性传染病,与口蹄疫和水泡性口炎等被国际动物卫生组织列为A类传染病。该病自爆发以来,受到世界各国的高度重视,国内外对本病的诊断和检测方法及其分子生物学特性进行了大量的研究。为满足出入境检疫的需要,在查阅大量文献的基础上,对病毒RNA的检测和VP1基因的原核表达做了进一步的研究。 试验一 RT-PCR检测猪水泡病病毒的建立及应用 根据GenBank已发表的序列,设计了两对引物,用RT-PCR及RT-nPCR方法检测SVDV的RNA,并进行了特异性和敏感性测定。结果表明,该方法具有良好的特异性及灵敏性,能区分口蹄疫、水泡性口炎和猪水泡性疹等水泡性病毒;一次扩增可检出100TCID50的病毒量,二次扩增可检出0.1TCID50的病毒量。用本方法对模拟组织样品和对照样品进行了检测,检出率高于90%。研究表明,RT-PCR及RT-nPCR检测技术均可用于猪水泡病的诊断及流行病学调查。 试验二 猪水泡病病毒结构蛋白VP1基因的核苷酸序列分析 提取SVDV毒株的RNA,RT-PCR扩增了包括VP1基因在内的约872bp的DNA片段。经纯化后,与pMD18-T载体连接,转化Escherichia coli,筛选获得阳性克隆菌株,采用双脱氧DNA末端终止法测得了VP1基因的核苷酸序列,并与国内外已发表的VP1基因序列及其推导的氨基酸序列进行了比较分析。分析表明,该病毒株VP1基因的核苷酸序列与发表SVDV VP1基因的同源性在89%～98%之间,对应氨基酸的同源性在89%～98%之间,氨基酸序列中发生重要变异的氨基酸残基为7、131、136残基,分别是Met、Val和Thr。 试验三 猪水泡病病毒结构蛋白VP1基因的克隆及原核表达 根据测序序列设计了一对针对表达VP1蛋白的引物,并分别引入Xho Ⅰ及
卢昌[5]（2014）在《三种水疱性疾病GeXP检测方法的建立》文中研究表明口蹄疫、猪水泡病和水疱性口炎分别是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus,FMDV）、猪水泡病病毒（Swine vesicular disease virus,SVDV）和水疱性口炎病毒（Vesicular stomatitis virus,VSV）引起的哺乳动物的急性、高度接触性传染病,这三种病毒都可以感染猪,发病率极高,并能够形成大范围的流行,均被世界动物卫生组织（OIE）列为法定报告的动物疫病。临床上这三种疾病均以猪舌、唇、口腔黏膜、乳头和蹄冠等处上皮发生水疱为主要症状,因此从临床症状上难以对这三种疾病进行区分,必须通过病原学进行鉴别诊断。GeXP多重基因分析系统（Gene eXpression Profiler Genetic Analysis System）是美国Beckman Coulter公司研发的用于多基因表达定量分析的平台。该系统以mRNA为模版,在同一PCR反应体系中由荧光标记的通用引物和特异性嵌合引物引发的多种PCR反应,随后经毛细管电泳分离技术进行分析。该系统将毛细管电泳分离技术和高灵敏的激光诱导荧光技术相结合,使基因表达定量分析实现了更高的灵敏度和更快的速度。本研究以口蹄疫病毒O型、A型、Asia1型、猪水泡病病毒和水疱性口炎病毒为研究对象,建立了5种病毒的GeXP多重PCR检测体系。研究内容如下：1.5种病毒的引物常规PCR验证参考GenBank中已公布的FMDV-O型、FMDV-A型、FMDV-Asia1型、SVDV及VSV的基因组序列,根据GeXP引物设计要求选择其保守区域设计引物,并在RNA基因组水平上对所设计的5对引物的特异性和灵敏性进行验证。同时,构建口蹄疫病毒的O、A、Asia1、SVDV和VSV的pMD18-T Simple克隆载体,对所构建的质粒进行测序。结果显示,5对引物均具有良好的特异性和敏感性,克隆的靶基因与NCBI公布的序列一致性均在95%以上。2. GeXP多重PCR的建立通过对上述5对引物进行修饰,设计含有通用引物的特异性嵌合引物,以及5’端含有Cy5的通用引物。建立了GeXP的单重PCR和多重PCR检测系统,并对它们的特异性和敏感性进行了验证。结果显示所建立的GeXP单重PCR和多重PCR检测方法具有良好的特异性,除却FMDV-A型GeXP单重PCR检测灵敏度达到10copies/μL,其他4种病毒的GeXP单重PCR检测灵敏度均达到102copies/μL, GeXP多重PCR检测灵敏性为102copies/μL,比文献报道的荧光定量PCR的灵敏性高10～100倍。3. GeXP的样品检测及试剂盒组装利用建立的GeXP多重PCR检测体系对实验室保存的5株FMDV-O型毒株、3株FMDV-A型毒株、3株FMDV-Asia1型毒株、SVDV、VSV-IN毒株的野外样品和人工感染样品以及不同公司生产的口蹄疫病毒灭活疫苗进行了检测。同时组装了GeXP多重PCR检测试剂盒,并对其进行了批间、批内和保存期的验证检测。结果显示,该方法对5种病毒的检出率可达到100%,具有很好的敏感性和特异性,且该试剂盒具有良好的实用性和稳定性,在-20℃下可以保存6个月。
张永国,刘湘涛,韩雪清,张彦明,谢庆阁[6]（2003）在《猪水泡病病毒VP1基因抗原区的原核表达》文中指出利用RT PCR和nestedPCR（nPCR）技术扩增出猪水泡病病毒VP1基因的抗原区 ,将其克隆到表达载体pProEX HTb中 ,获得重组质粒 ,经PCR、酶切和序列分析鉴定表明 ,目的基因插入的位置、大小和读码框均正确。将重组质粒导入BL2 1 （DE3） ,经IPTG诱导表达后SDS PAGE检测表明 ,重组菌能表达猪水泡病病毒VP1抗原区蛋白 ;Westernblot检测表明 ,诱导表达的抗原区蛋白能与猪水泡病阳性血清发生特异性反应。
钟金栋,花群义,夏雪山,杨云庆,周晓黎,董俊[7]（2005）在《猪水泡病毒分子生物学研究进展》文中进行了进一步梳理猪水泡病（swine vesicular disease,SVD）又名猪传染性水泡病,是由猪水泡病毒（swine vesicular disease virus,SVDV）引起的一种急性、热性、接触性传染病,以口和蹄部产生水泡性损伤为特征,其临床症状与猪口蹄疫极为相似,引起严重的公共卫生问题,被世界动物卫生组织（OIE）列为A类传染病,我国农业部列为动物一类传染病。1966年10月首先发现于意大利Lombardy的猪群中,以后在欧洲、亚洲的许多国家
周鹏程,谢庆阁[8]（1998）在《猪水泡病病毒的分子生物学研究现状》文中研究说明猪水泡病病毒的分子生物学研究现状周鹏程（北京大学生命科学学院１００８７１）谢庆阁（中国农业科学院兰州兽医研究所）猪水泡病（Ｓｗｉｎｅｖｅｓｉｃｕｌａｒｄｉｓｅａｓｅ，ＳＶＤ）是猪的一种急性传染病，其临床表现以口鼻腔粘膜、蹄部等出现水泡或溃烂为特征，与...
周广亚[9]（2020）在《国内市售猪肉和食用植物油危害因素的风险评估研究》文中进行了进一步梳理我国是全球最大的猪肉和食用植物油消费国。近年来,猪肉和食用植物油安全事件频发,给人们的生命健康和社会稳定带来诸多不良影响。风险评估是国际公认的一种有效评估食品安全风险的方法,在食品安全风险管理中发挥着巨大作用。因此,本文采用概率暴露评估、综合评价、数据挖掘等风险评估方法,构建了猪肉和食用植物油中相关危害因素的风险评估模型,并在此基础上设计实现了猪肉和食用植物油安全风险评估系统,旨在为猪肉和食用植物油的安全监管提供支持,以降低猪肉和食用植物油安全风险发生的可能性。本文的主要研究内容和结论如下:1市售猪肉中化学性危害因素和致病微生物的风险评估（1）市售猪肉中化学性危害因素的风险评估:基于不同国家猪肉中兽药残留标准的差异,建立了进口猪肉中兽药残留的风险评估模型。结果表明,美国、巴西、泰国、澳大利亚和俄罗斯猪肉中兽药残留的潜在风险较低。采用地理信息系统（GIS）方法对2015-2019年中国发生的猪肉兽药残留安全事件的分布、聚类情况进行研究,结果显示我国猪肉中兽药残留安全事件在时空上呈聚集分布,且热点聚集区域多分布在我国西南地区。通过构建暴露评估模型对国产猪肉中铅、砷、镉、汞的健康风险进行评估,结果表明猪肉中的砷对2到4岁年龄段人群的致癌风险超出可接受水平。采用故障树分析法探究了猪肉供应链中导致化学性危害事件发生的薄弱环节,结果表明预防我国猪肉化学性危害事件发生的关键是加强政府部门的监管和进一步完善我国食品安全标准体系。（2）市售猪肉中致病微生物的风险评估:通过构建定量风险评估模型对进口猪肉传入非洲猪瘟病毒和猪水泡病病毒的风险进行评估,结果表明来自加拿大、美国、巴西、德国、西班牙的进口猪肉传入非洲猪瘟病毒和猪水泡病病毒的风险均较低。采用模块化过程风险模型法构建了国产猪肉中大肠杆菌的风险评估模型,结果表明影响国产猪肉中大肠杆菌风险的主要因素是售卖时猪肉中大肠杆菌的污染水平、购买后常温下的储存时间和储存温度。通过分析猪肉供应链中沙门氏菌浓度的变化,建立了猪肉中沙门氏菌的定量风险评估模型。结果表明,每1万人中约有51人因食用猪肉而罹患沙门氏菌病。2食用植物油中化学性危害因素的风险评估（1）食用植物油中苯并芘、黄曲霉毒素B1和重金属的风险评估:通过分析花生油、大豆油和菜籽油中苯并芘的污染情况,评估了3种食用植物油中苯并芘的致癌风险。结果表明,三种食用植物油中苯并芘的致癌风险均处于可接受水平。使用暴露限值法和数学模型法对花生油中黄曲霉毒素B1的健康风险进行评估,结果表明花生油中黄曲霉毒素B1具有较高的健康风险。基于食用植物油中铅、砷、镉、铬的污染水平,构建了食用植物油中重金属的膳食暴露风险评估模型。结果表明,食用植物油中重金属铬的致癌风险超出最大可接受水平。（2）食用植物油中化学性危害因素的综合风险评估:建立了基于风险矩阵的食用植物油中化学性危害因素的风险等级评估模型。结果表明,2018年山东、黑龙江两省食用植物油的安全状况整体较好,但两省都需加强对食用植物油中苯并芘、黄曲霉毒素B1和特丁基对苯二酚的风险管理。进一步采用灰度关联法结合解释结构模型法（GRA-ISM）构建了食用植物油中化学性危害因素的风险等级评估模型。研究结果表明,影响食用植物油安全的主要化学性风险因素是苯并芘、砷、酸价和二丁基羟基甲苯。另外,使用熵权层次分析法集成BP神经网络算法构建了食用植物油化学性危害等级预测模型,模型的十折交叉验证及独立测试的决定系数R2分别达到0.994和0.992,预测模型拟合效果较好。3、猪肉和食用植物油安全风险评估系统的构建基于本文建立的猪肉和食用植物油安全风险评估模型,本研究采用MVC分层开发模式,设计并开发了一套猪肉和食用植物油安全风险评估系统（http://www.biotechshu.com:8080/porkandoil）,该系统可以为食品安全从业人员和普通消费者进行猪肉和食用植物油的安全风险管理提供辅助。
冶贵生,刘湘涛,张彦明,马玉花,张淼涛,洪海霞,韩雪清[10]（2004）在《猪水泡病病毒VP2基因抗原区在大肠杆菌中的表达》文中研究指明利用RTPCR技术 ,以SVDVHK’70为材料 ,扩增出VP2基因抗原区。将目的基因的PCR扩增产物直接进行双酶切 ,然后将酶切产物与酶切后的表达载体pGEX 4T1进行连接 ,转化BL2 1菌体并提质粒 ,经酶切、PCR鉴定为阳性的重组质粒命名为pGEXVP2 ,并测序。测序结果表明 ,目的基因插入的位置、大小和读码框均正确 ,表达载体构建成功。将含有阳性质粒的BL2 1菌液经IPTG诱导后进行SDSPAGE分析 ,出现预期的目的蛋白条带 ,此目的蛋白经Westernblot检测确定其有免疫活性。
二、猪水泡病病毒的结构蛋白（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、猪水泡病病毒的结构蛋白（论文提纲范文）
（1）动物RNA病毒反向遗传系统的研究和建立（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 研究背景、目的和意义 |
| 1.2 研究内容和方法 |
| 1.2.1 以T7 RNAP为基础的体外病毒拯救方法的建立和应用 |
| 1.2.2 以T7 RNAP为基础的体内病毒拯救方法的建立和应用 |
| 1.2.3 完全依赖真核细胞RNA聚合酶Ⅰ为基础的体内拯救系统的建立和应用 |
| 1.3 研究现状 |
| 第二章 文献综述:RNA病毒反向遗传学系统 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 RNA病毒反向遗传系统的理论基础 |
| 2.2.1 正链RNA病毒反向遗传系统建立的理论基础 |
| 2.2.2 负链RNA病毒反向遗传系统建立的理论基础 |
| 2.2.3 应用于RNA病毒反向遗传学中的转录系统 |
| 2.3 RNA病毒拯救系统建立的策略 |
| 2.3.1 基因组全长cDNA克隆的构建以及要解决的问题 |
| 2.3.2 体外转录和感染性转录本 |
| 2.3.3 体内转录和感染性cDNA克隆 |
| 2.3.4 利用不同转录系统的病毒拯救策略 |
| 2.3.5 用于拯救病毒的转录系统 |
| 2.4 影响感染性的参数(因素) |
| 2.4.1 体外转录的影响因素 |
| 2.4.2 非病毒核苷酸在子代病毒的归宿 |
| 2.5 病毒拯救体系的研究进展 |
| 2.5.1 以T7 RNA聚合酶为基础的病毒拯救系统的研究进展 |
| 2.5.2 真核RNA聚合酶Ⅰ拯救系统研究进展 |
| 2.5.3 真核RNA聚合酶Ⅱ拯救系统研究进展 |
| 第一部分 SVDV HK/70株生物学特性测定、生物信息学分析及以T7 RNA聚合酶为基础的体外拯救方法的建立 |
| 第三章 SVDV HK/70株病毒生物学特性初步鉴定 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 毒株、细胞与实验动物 |
| 3.1.2 试剂与酶 |
| 3.1.3 毒种鉴定 |
| 3.1.4 病毒的致病性 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 毒种鉴定 |
| 3.2.2 病毒的致病性 |
| 3.3 讨论 |
| 第四章 SVDV HK/70株基因组全长cDNA的构建和序列测定 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 毒株 |
| 4.1.2 试剂与酶 |
| 4.1.3 引物设计与合成 |
| 4.1.4 RT-PCR |
| 4.1.5 目的基因的克隆与鉴定 |
| 4.1.6 HK/70株基因组全长cDNA序列的装配及测定 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 RT-PCR的结果 |
| 4.2.2 全长cDNA的连接及初步鉴定 |
| 4.2.3 全长cDNA的序列测定及其核苷酸序列 |
| 4.3 讨论 |
| 第五章 SVDV HK/70株全基因组生物信息学分析 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 毒株序列 |
| 5.1.2 HK'1/70株序列同源性比较和序列进化分析 |
| 5.1.3 蛋白水解位点的预测分析 |
| 5.1.4 5'NTR和3'NTR序列特征分析 |
| 5.1.5 SVDV结构蛋白二级结构的预测 |
| 5.1.6 SVDV结构蛋白抗原特异性淋巴细胞抗原表位的预测 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 HK/70株系统发生树分析结果 |
| 5.2.2 SVDV 5'NCR序列分析结果 |
| 5.2.3 3'NTR的一级结构分析 |
| 5.2.4 HK/70株3'NTR的二级结构分析 |
| 5.2.5 蛋白二级结构和B细胞表位的预测结果 |
| 5.3 讨论 |
| 第六章 含有病毒全长cDNA重组质粒的稳定性分析 |
| 6.1 材料与方法 |
| 6.1.1 毒株 |
| 6.1.2 试剂与酶 |
| 6.1.3 RT-PCR |
| 6.1.4 目的基因的克隆与鉴定 |
| 6.1.5 含有HK/70株基因组全长cDNA序列的psVDGEM重组质粒的构建 |
| 6.1.6 含有HK/70株基因全长cDNA的psVDVOK_(12)重组质粒构建 |
| 6.1.7 质粒稳定性分析 |
| 6.2 结果 |
| 6.2.1 RT-PCR的结果 |
| 6.2.2 全长cDNA的连接及初步鉴定 |
| 6.2.3 测序结果分析 |
| 6.3 讨论 |
| 第七章 SVDV HK/70株全长cDNA分子克隆感染性的鉴定 |
| 7.1 材料和方法 |
| 7.1.1 实验材料 |
| 7.1.2 体外转录物RNA的制备 |
| 7.1.3 转染IBRS-2细胞 |
| 7.1.4 反向间接血凝鉴定试验 |
| 7.1.5 间接免疫荧光检测病毒抗原 |
| 7.1.6 RT-PCR法检测病毒基因组 |
| 7.1.7 电子显微镜观察病毒粒子 |
| 7.1.8 TCID_(50)实验 |
| 7.1.9 乳鼠LD_(50)实验 |
| 7.2 结果 |
| 7.2.1 体外转录结果 |
| 7.2.2 转染IBRS-2细胞结果 |
| 7.2.3 反向间接血凝鉴定试验 |
| 7.2.4 拯救病毒的RT-PCR鉴定 |
| 7.2.5 免疫荧光检测结果 |
| 7.2.6 电子显微镜观察结果 |
| 7.2.7 TCID_(50)实验结果 |
| 7.2.8 乳鼠毒力试验结果 |
| 7.3 讨论 |
| 第二部分 以T7 RNA聚合酶为基础的体内拯救方法的建立和应用 |
| 第八章 稳定表达T7 RNA聚合酶细胞系的建立以及用该细胞系对SVDV的体内拯救 |
| 8.1 材料与方法 |
| 8.1.1 菌株、质粒与细胞 |
| 8.1.2 酶与试剂 |
| 8.1.3 引物设计与合成 |
| 8.1.4 T7 RNAP基因的扩增与逆转录病毒载体的克隆 |
| 8.1.5 鉴定T7 RNAP转录活性载体的构建 |
| 8.1.6 GP2-293细胞培养与转染pT7BABEpuro |
| 8.1.7 假型重组逆转录病毒感染宿主细胞 |
| 8.1.8 不同代次的IBRST7细胞的T7 RNAP基因的PCR检测 |
| 8.1.9 SDS-PAGE对IBRST7细胞的T7 RNAP检测 |
| 8.1.10 T7 RNAP活性检测 |
| 8.1.11 流式细胞仪对细胞表达水平的分析 |
| 8.1.12 BHKT7和SK6T7细胞系的建立、筛选及活性检测 |
| 8.1.13 SVDV的拯救 |
| 8.2.结果 |
| 8.2.1 T7 RNA聚合酶基因的扩增及克隆结果 |
| 8.2.2 IRES基因扩增和克隆的结果 |
| 8.2.3 egfg基因的扩增和克隆结果 |
| 8.2.4 PCR扩增检测不同代次目的基因稳定性结果 |
| 8.2.5 SDS-PAGE检测不同代次T7 RNAP |
| 8.2.6 T7 RNAP活性检测结果 |
| 8.2.7 流式细胞仪对细胞表达水平的分析 |
| 8.2.8 BHKT7和SK6T7细胞系的建立、筛选及活性检测 |
| 8.2.9 SVDv的拯救及其生物学鉴定结果 |
| 8.3 讨论 |
| 第九章 用稳定表达T7 RNA聚合酶细胞系SK6T7对CSFVC株的拯救和初步鉴定 |
| 9.1 材料和方法 |
| 9.1.1 试验材料 |
| 9.1.2 所用试剂及限制性酶 |
| 9.1.3 引物的设计与合成 |
| 9.1.4 全长cDNA模板的线性化和纯化回收 |
| 9.1.5 细胞转染及传代 |
| 9.1.6 全长cDNA感染性的鉴定 |
| 9.2 结果 |
| 9.2.1 RT-PCR和nested-PCR鉴定结果 |
| 9.2.2 转染细胞的直接荧光抗体染色鉴定结果 |
| 9.2.3 兔子致病性实验结果 |
| 9.3 讨论 |
| 第三部分 以鼠源聚合酶Ⅰ系统为基础的体内拯救方法的建立和应用 |
| 第十章 用鼠源聚合酶Ⅰ系统对SVDV HK/70株拯救 |
| 10.1 材料与方法 |
| 10.1.1 菌株、质粒与细胞 |
| 10.1.2 酶与试剂 |
| 10.1.3 引物设计与合成 |
| 10.1.4 聚合酶Ⅰ启动子和终止子片段的扩增 |
| 10.1.5 聚合酶Ⅰ启动子和终止子片段序列分析和序列功能区的分析 |
| 10.1.6 SVDV HK/70株全长cDNA的装配 |
| 10.1.7 在IBRS-2细胞内的病毒拯救 |
| 10.1.8 在鼠体内的病毒拯救 |
| 10.2.结果 |
| 10.2.1 聚合酶Ⅰ启动子和终止子片段的扩增结果 |
| 10.2.2 聚合酶Ⅰ启动子和终止子片段序列分析和序列功能区的分析结果 |
| 10.2.3 SVDV HK/70株全长cDNA的装配的结果 |
| 10.2.4 转染IBRS-2细胞结果 |
| 10.2.5 SVDV的IBRS-2拯救毒的鉴定结果 |
| 10.2.6 在乳鼠体内拯救病毒的鉴定结果 |
| 10.3 讨论 |
| 第十一章 用鼠源聚合酶Ⅰ系统对FMDV的拯救及初步鉴定 |
| 11.1 材料与方法 |
| 11.1.1 菌株、质粒与细胞 |
| 11.1.2 酶与试剂 |
| 11.1.3 引物设计与合成 |
| 11.1.4 FMDV基因片段的扩增 |
| 11.1.5 FMDV全长cDNA的装配 |
| 11.1.6 在BHK-21细胞内的病毒拯救 |
| 11.2 结果 |
| 11.2.1 FMDV全长cDNA的装配的结果 |
| 11.2.2 转染BHK-21细胞结果 |
| 11.2.3 FMDV的BHK-21拯救毒的鉴定结果 |
| 11.3 讨论 |
| 第十二章 猪水泡病标记病毒的制备和初步鉴定 |
| 12.1 材料和方法 |
| 12.1.1 菌株、质粒与细胞 |
| 12.1.2 酶与试剂 |
| 12.1.3 引物设计与合成 |
| 12.1.4 含有5B19基因片段的扩增 |
| 12.1.5 含有5819标记的SVDV HK/70株全长cDNA的装配 |
| 12.1.6 转染IBRS-2细胞 |
| 12.1.7 拯救病毒的鉴定 |
| 12.2 结果 |
| 12.2.1 含有5B19基因片段的扩增以及含有该片段全长cDNA装配的结果 |
| 12.2.2 转染IBRS-2细胞结果 |
| 12.2.3 拯救病毒的RT-PCR鉴定结果 |
| 12.2.4 间接免疫荧光检测结果 |
| 12.2.5 反向间接血凝鉴定试验结果 |
| 12.2.6 TCID_(50)实验结果 |
| 12.3 讨论 |
| 第十三章 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 一:OIE A类疾病(OIE List A Diseases) |
| 三:SVDV HK/70株全基因组核苷酸序列及其序列比对结果 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（2）猪水泡病毒VP1基因克隆、表达及其检测技术的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 猪水泡病研究进展 |
| 1.1 SVDV病原学 |
| 1.1.1 病毒分类与特性 |
| 1.1.2 基因组结构 |
| 1.1.3 病毒蛋白质的结构和功能 |
| 1.1.4 SVDV的抗原结构 |
| 1.2 SVDV流行病学 |
| 1.2.1 流行与危害 |
| 1.2.2 病毒的繁殖与复制 |
| 1.2.3 SVDV的传播 |
| 1.3 SVDV诊断技术及其研究进展 |
| 1.3.1 动物试验 |
| 1.3.2 血清抗体检测方法 |
| 1.3.3 核酸诊断 |
| 1.4 SVD的控制和预防 |
| 1.5 本论文的研究目的和研究策略 |
| 第二章 猪水泡病病毒VP1基因的克隆和表达 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 主要材料及试剂 |
| 2.2.2 主要试剂配制 |
| 2.2.3 引物设计 |
| 2.2.4 技术路线 |
| 2.2.5 病毒基因组RNA的提取 |
| 2.2.6 cDNA的反转录 |
| 2.2.7 SVDV-VP1基因的PCR扩增 |
| 2.2.8 PCR产物的小量胶回收 |
| 2.2.9 感受态细胞的制备 |
| 2.2.10 克隆及表达载体的构建 |
| 2.2.11 重组表达质粒在TOPO10E.coli细胞中的诱导表达 |
| 2.2.12 SDS-PAGE分析表达蛋白 |
| 2.2.13 表达产物的Western blotting检测 |
| 2.2.14 重组蛋白的小批量生产和纯化 |
| 2.3 试验结果 |
| 2.3.1 目的片段的克隆与鉴定 |
| 2.3.2 SVDV VP1基因的亚克隆及重组表达质粒的构建 |
| 2.3.3 SVDV核蛋白表达重组质粒的序列分析 |
| 2.3.4 表达产物的SDS-PAGE分析 |
| 2.3.5 表达产物的Western blotting检测 |
| 2.3.6 重组基因表达产物的纯化 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 VP1基因的选择 |
| 2.4.2 基因表达系统的选择 |
| 2.4.3 VP1基因表达 |
| 2.4.4 表达产物的纯化 |
| 第三章 猪水泡病检测技术的建立 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.2.1 病毒株、细胞和主要试剂 |
| 3.2.2 仪器设备 |
| 3.2.3 试剂配制 |
| 3.2.4 猪水泡病病毒RT-PCR检测方法的建立 |
| 3.2.5 多重PCR检测口蹄疫、猪水泡病和水泡性口炎的研究 |
| 3.2.6 实时荧光定量TaqMan RT-PCR检测猪水泡病病毒的研究 |
| 3.2.7 应用重组抗原建立检测猪水泡病抗体的间接ELISA方法的研究 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 猪水泡病病毒RT-PCR检测方法的建立 |
| 3.3.2 多重PCR检测口蹄疫、猪水泡病和水泡性口炎的研究 |
| 3.3.3 实时荧光定量TaqMan RT-PCR检测猪水泡病病毒的研究 |
| 3.3.4 应用重组抗原建立检测猪水泡病抗体的间接ELISA方法的研究 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 猪水泡病病毒RT-PCR检测方法的建立 |
| 3.4.2 多重PCR检测口蹄疫、猪水泡病和水泡性口炎的研究 |
| 3.4.3 实时荧光定量TaqMan RT-PCR检测猪水泡病病毒的研究 |
| 3.4.4 应用重组抗原建立检测猪水泡病抗体间接ELISA方法的研究 |
| 第四章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（3）猪瘟和猪水泡病基因标记疫苗的研究（论文提纲范文）
| 第一章 序言 |
| 1.1 研究背景及目的、意义 |
| 1.1.1 猪瘟、猪瘟病毒和猪瘟弱毒疫苗 |
| 1.1.2 猪水泡病和猪水泡病病毒 |
| 1.1.3 基因标记疫苗 |
| 1.1.4 本研究的目的及意义 |
| 1.2 国内外研究现状 |
| 1.2.1 猪瘟疫苗研究进展 |
| 1.2.2 猪水泡病疫苗研究概况 |
| 1.3 研究内容与方法 |
| 第二章 猪瘟基因标记疫苗的构建及体外表达 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.1.1 菌种、载体和主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.1.3 细胞和种毒 |
| 2.1.4 引物的设计与合成 |
| 2.1.5 目的片段的获得 |
| 2.1.6 重组质粒的构建、克隆及鉴定 |
| 2.1.7 转染质粒的提取 |
| 2.1.8 转染 |
| 2.1.9 各基因体外表达的检测 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 目的片段 |
| 2.2.2 表达质粒的鉴定 |
| 2.2.3 转染质粒浓度 |
| 2.2.4 各基因的体外表达 |
| 2.3 讨论 |
| 第三章 猪瘟基因标记疫苗对兔的免疫保护试验 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 质粒、疫苗与实验动物 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 免疫用质粒的制备 |
| 3.1.4 各猪瘟基因疫苗对家兔的免疫 |
| 3.1.5 阻断ELISA检测CSFV特异性抗体 |
| 3.1.6 T淋巴细胞增殖试验 |
| 3.1.7 病毒攻击保护试验 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 兔血清CSFV特异性抗体的动态变化 |
| 3.2.2 T淋巴细胞增殖试验 |
| 3.2.3 攻毒试验 |
| 3.3 讨论 |
| 第四章 猪瘟与猪水泡病二联基因疫苗研究 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 菌种、载体和主要试剂 |
| 4.1.2 细胞、种毒、质粒、疫苗和实验动物 |
| 4.1.3 猪瘟病毒E2基因与猪水泡病病毒P1区基因双表达质粒的构建 |
| 4.1.4 转染质粒的提取、转染和体外表达 |
| 4.1.5 免疫用质粒的制备 |
| 4.1.6 双表达基因疫苗对家兔的免疫 |
| 4.1.7 阻断ELISA检测CSFV特异性抗体 |
| 4.1.8 T淋巴细胞增殖试验和猪瘟活疫苗(Ⅱ)攻毒保护实验 |
| 4.1.9 乳鼠中和试验 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 猪瘟病毒E2基因与猪水泡病病毒P1区基因双表达质粒的鉴定 |
| 4.2.2 转染质粒浓度 |
| 4.2.3 间接免疫荧光染色检测猪水泡病抗原的表达 |
| 4.2.4 猪瘟E2蛋白的表达 |
| 4.2.5 双表达质粒免疫家兔的CSFV特异性抗体的动态变化 |
| 4.2.6 T淋巴细胞增殖试验 |
| 4.2.7 乳鼠中和试验 |
| 4.2.8 猪瘟活疫苗(Ⅱ)攻毒保护试验 |
| 4.3 讨论 |
| 第五章 猪水泡病基因标记疫苗的研究 |
| 5.1 材料和方法 |
| 5.1.1 材料 |
| 5.1.2 引物的设计和合成 |
| 5.1.3 猪水泡病基因疫苗的构建及体外表达 |
| 5.1.4 猪水泡病基因疫苗的猪体试验 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 目的片段的获得和猪水泡病P1基因重组质粒的鉴定 |
| 5.2.2 转染质粒浓度 |
| 5.2.3 间接免疫荧光染色检测猪水泡病抗原的表达 |
| 5.2.4 间接ELISA检测SVDV特异性抗体 |
| 5.2.5 乳鼠中和试验检测猪血清SVDV中和抗体 |
| 5.2.6 攻毒保护试验 |
| 5.3 讨论 |
| 第六章 结论 |
| 第七章 猪水泡病及猪水泡病病毒研究进展(文献综述) |
| 7.1 猪水泡病 |
| 7.1.1 疾病的发现、命名与流行情况 |
| 7.1.2 病原学 |
| 7.1.3 流行病学 |
| 7.1.4 临床症状和组织嗜性 |
| 7.1.5 诊断 |
| 7.2 猪水泡病病毒 |
| 7.2.1 SVDV基因组结构 |
| 7.2.2 SVDV编码的蛋白及功能 |
| 7.2.3 SVDV的衣壳结构和抗原特性 |
| 7.2.4 SVDV受体及其侵入 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 作者简历 |
（4）猪水泡病病毒RNA的检测及VP1基因在原核中的表达（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 20种氨基酸的密码子表 |
| 20种氨基酸的英文名称及缩写 |
| 引言 |
| 1 病毒概述 |
| 2 本病的流行特点 |
| 3 SVDV的基因组结构和功能的研究概况 |
| 4 SVDV编码的蛋白质及其功能 |
| 5 SVDV的抗原结构 |
| 6 SVDV和CB5的关系及起源 |
| 7 SVDV鉴别诊断的研究概况 |
| 7.1 生物学诊断 |
| 7.2 反向间接血凝试验(RIHA) |
| 7.3 免疫荧光抗体试验 |
| 7.4 酶联免疫吸附试验(ELISA) |
| 7.5 PCR诊断 |
| 7.6 实时荧光定量PCR |
| 8 SVDV与相关小RNA病毒的同源性比较 |
| 8.1 致病性和非致病性SVDV株 |
| 8.2 SVDV和相关小RNA病毒的同源性 |
| 9 症状与病变 |
| 10 防制 |
| 10.1 被动免疫 |
| 10.2 弱毒疫苗 |
| 10.3 灭活苗 |
| 10.4 环境和猪舍消毒 |
| 试验一 反转录PCR检测猪水泡病病毒RNA |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 试验二 猪水泡病病毒结构蛋白VP1基因的核苷酸序列分析 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 试验三 猪水泡病病毒结构蛋白VP1基因的克隆及原核表达 |
| 1 材料 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 结论 |
| 附录 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士期间发表文章情况 |
（5）三种水疱性疾病GeXP检测方法的建立（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略表 |
| 第一章 引言 |
| 1.1 口蹄疫病毒的研究进展 |
| 1.1.1 口蹄疫病毒的病原学特征 |
| 1.1.2 口蹄疫病毒的流行病学特征 |
| 1.1.3 口蹄疫的临床症状 |
| 1.1.4 口蹄疫诊断的研究进展 |
| 1.2 猪水泡病病毒的研究进展 |
| 1.2.1 猪水泡病毒病毒的病原学特征 |
| 1.2.2 猪水泡病病毒的流行病学特征 |
| 1.2.3 猪水泡病病毒的临床症状 |
| 1.2.4 猪水泡病诊断的研究进展 |
| 1.3 水疱性口炎病毒的研究进展 |
| 1.3.1 水疱性口炎病毒的病原学特征 |
| 1.3.2 水疱性口炎病毒的流行病学特征 |
| 1.3.3 水疱性口炎的临床症状 |
| 1.3.4 水疱性口炎诊断的研究进展 |
| 1.4 GeXP多重基因表达分析系统及其应用 |
| 1.4.1 系统扩增的原理 |
| 1.4.2 系统的优势 |
| 1.4.3 系统在生命科学中的应用 |
| 1.4.4 展望 |
| 1.5 研究的目的意义 |
| 第二章 FMDV、VSV及SVDV引物设计及验证 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 毒株 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 试剂配制 |
| 2.1.4 主要仪器 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 细胞的冻存、复苏与传代 |
| 2.2.2 FMDV、VSV及SVDV的培养 |
| 2.2.3 引物设计与合成 |
| 2.2.4 病毒RNA模板提取 |
| 2.2.5 病毒RNA的RT-PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳 |
| 2.2.6 单重PCR的特异性验证 |
| 2.2.7 单克隆质粒标准品的制备 |
| 2.2.8 单重PCR的敏感性验证 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 单引物验证实验结果 |
| 2.3.2 单重PCR的特异性验证 |
| 2.3.3 单克隆质粒标准品的鉴定 |
| 2.3.4 单重PCR的灵敏度验证 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 FMDV、VSV及SVDV的GeXP检测方法的建立 |
| 3.1 材料与仪器 |
| 3.1.1 主要试剂 |
| 3.1.2 主要仪器 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 GeXP引物的设计与合成 |
| 3.2.2 GeXP单重PCR检测体系的建立 |
| 3.2.3 引物特异性及灵敏性分析 |
| 3.2.4 GeXP多重PCR的建立及灵敏性分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 GeXP单重PCR的特异性分析 |
| 3.3.2 GeXP单重PCR的灵敏性分析 |
| 3.3.3 GeXP多重PCR的灵敏性分析 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 GeXP多重PCR的初步应用及其检测试剂盒的组装 |
| 4.1 材料与仪器 |
| 4.1.1 实验试剂 |
| 4.1.2 主要仪器 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 样品处理及病毒RNA的提取 |
| 4.2.2 样品的GeXP多重PCR检测 |
| 4.2.3 试剂盒的组装 |
| 4.2.4 试剂盒使用说明书 |
| 4.2.5 试剂盒性能验证 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 样品检测 |
| 4.3.2 试剂盒组装 |
| 4.3.3 试剂盒储存稳定性验证 |
| 4.3.4 试剂盒的重复性检测 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 全文总结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（6）猪水泡病病毒VP1基因抗原区的原核表达（论文提纲范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 病毒 |
| 1.2 菌株和质粒 |
| 1.3 试剂 |
| 1.4 引物合成 |
| 1.5 VP1基因抗原区的获取 |
| 1.5.1 RNA提取: |
| 1.5.2 PCR扩增: |
| 1.6 VP1基因抗原区和pProEX-HTb重组表达质粒的构建 |
| 1.7 感受态细胞的转化和阳性克隆的筛选[4] |
| 1.8 重组质粒在大肠杆菌中的表达及其产物的鉴定 |
| 1.9 SDS-PAGE |
| 1.10 Western blot |
| 2 结果 |
| 2.1 质粒pProEX-VP1的PCR和酶切鉴定 |
| 2.2 SDS-PAGE和Western blot检测 |
| 3 讨论 |
（9）国内市售猪肉和食用植物油危害因素的风险评估研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1 猪肉和食用植物油安全问题的概述 |
| 1.1 猪肉安全问题的概述 |
| 1.2 食用植物油安全问题的概述 |
| 2 猪肉和食用植物油安全风险评估的现状 |
| 2.1 猪肉安全风险评估的现状 |
| 2.2 食用植物油安全风险评估的现状 |
| 2.3 猪肉和食用植物油安全风险评估的常用方法 |
| 3 风险评估系统开发涉及的计算机技术 |
| 3.1 Java EE技术 |
| 3.2 Java Web开发技术 |
| 3.3 MVC开发模式 |
| 4 本研究的意义和主要内容 |
| 第二章 市售猪肉中化学性危害因素和致病微生物的风险评估 |
| 1 数据与方法 |
| 1.1 数据准备 |
| 1.2 计算方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 市售猪肉中化学性危害因素的风险评估 |
| 2.1.1 进口猪肉中兽药残留的风险评估 |
| 2.1.2 国产猪肉中兽药残留的风险评估 |
| 2.1.3 国产猪肉中重金属的风险评估 |
| 2.1.4 基于故障树的国产猪肉中化学性危害因素的风险评估 |
| 2.2 市售猪肉中致病微生物的风险评估 |
| 2.2.1 进口猪肉传入非洲猪瘟病毒和猪水泡病病毒的风险评估 |
| 2.2.2 国产猪肉中大肠杆菌的风险评估 |
| 2.2.3 国产猪肉中沙门氏菌的风险评估 |
| 3 讨论 |
| 4 本章小结 |
| 第三章 食用植物油中化学性危害因素的风险评估 |
| 1 数据与方法 |
| 1.1 数据准备 |
| 1.2 计算方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 食用植物油中苯并芘、黄曲霉毒素B1和重金属的风险评估 |
| 2.1.1 食用植物油中苯并芘的风险评估 |
| 2.1.2 花生油中黄曲霉毒素B1的风险评估 |
| 2.1.3 食用植物油中重金属的风险评估 |
| 2.2 食用植物油中化学性危害因素的综合风险评估 |
| 2.2.1 基于风险矩阵的食用植物油中化学性危害因素的风险等级评估 |
| 2.2.2 基于GRA-ISM的食用植物油中化学性危害因素的风险等级评估 |
| 2.2.3 食用植物油中化学性危害等级的预测 |
| 3 讨论 |
| 4 本章小结 |
| 第四章 猪肉和食用植物油安全风险评估系统的开发 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 风险评估系统的开发环境 |
| 1.2 风险评估系统的结构设计 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 系统主界面模块的实现 |
| 2.2 参数输入和结果显示模块的实现 |
| 2.3 业务控制模块的实现 |
| 2.4 猪肉和食用植物油安全风险评估模块的实现 |
| 2.4.1 进口猪肉中兽药残留的风险评估模型的实现 |
| 2.4.2 猪肉中大肠杆菌的风险评估模型的实现 |
| 2.4.3 食用植物油中苯并芘的风险评估模型的实现 |
| 2.4.4 食用植物油中化学性危害等级预测模型的实现 |
| 3 讨论 |
| 4 本章小结 |
| 第五章 全文总结 |
| 附录 |
| 参考文献 |
| 作者在攻读硕士学位期间公开发表的论文 |
| 作者在攻读硕士学位期间所参与的课题 |
| 致谢 |
（10）猪水泡病病毒VP2基因抗原区在大肠杆菌中的表达（论文提纲范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 毒株: |
| 1.1.2 菌株、质粒和血清: |
| 1.1.3 试剂: |
| 1.1.4 引物: |
| 1.2 病毒RNA的提取 |
| 1.3 VP2基因抗原区的RT_PCR和nPCR RT_PCR |
| 1.4 VP2基因抗原区与pGEX 4T_1重组表达质粒的构建 |
| 1.5 阳性克隆的筛选 |
| 1.6 VP2基因的诱导表达 |
| 1.7 SDS_PAGE分析 |
| 1.8 Western blot |
| 2 结果 |
| 2.1 PCR扩增结果 |
| 2.2 重组表达载体pGEX_VP2的鉴定 |
| 2.3 重组质粒pGEX_VP2在大肠杆菌中的表达 |
| 2.4 目的蛋白的Western blot检测 |
| 3 讨论 |
四、猪水泡病病毒的结构蛋白（论文参考文献）
- [1]动物RNA病毒反向遗传系统的研究和建立[D]. 郑海学. 中国农业科学院, 2007(05)
- [2]猪水泡病毒VP1基因克隆、表达及其检测技术的研究[D]. 钟金栋. 昆明理工大学, 2007(02)
- [3]猪瘟和猪水泡病基因标记疫苗的研究[D]. 冯霞. 中国农业科学院, 2005(10)
- [4]猪水泡病病毒RNA的检测及VP1基因在原核中的表达[D]. 田相军. 山东农业大学, 2005(02)
- [5]三种水疱性疾病GeXP检测方法的建立[D]. 卢昌. 中国农业科学院, 2014(11)
- [6]猪水泡病病毒VP1基因抗原区的原核表达[J]. 张永国,刘湘涛,韩雪清,张彦明,谢庆阁. 微生物学报, 2003(03)
- [7]猪水泡病毒分子生物学研究进展[A]. 钟金栋,花群义,夏雪山,杨云庆,周晓黎,董俊. 中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会论文集, 2005
- [8]猪水泡病病毒的分子生物学研究现状[J]. 周鹏程,谢庆阁. 中国兽医科技, 1998(03)
- [9]国内市售猪肉和食用植物油危害因素的风险评估研究[D]. 周广亚. 上海大学, 2020(02)
- [10]猪水泡病病毒VP2基因抗原区在大肠杆菌中的表达[J]. 冶贵生,刘湘涛,张彦明,马玉花,张淼涛,洪海霞,韩雪清. 微生物学报, 2004(05)