一、ICHV在MDCK细胞上增殖的研究（论文文献综述）
遇透玲,田克恭,郑振峰,渠川玫,李俊梅[1]（1994）在《ICHV在MDCK细胞上增殖的研究》文中进行了进一步梳理采用免疫组化ＢＡ法进行了犬传染性肝炎病毒（ＩＣＨＶ）在ＭＤＣＫ细胞上定位的研究．结果表明，接毒后１０小时可见细小阳性反应颗粒出现于肿胀的病变细胞核中．ＨＥ染色所见包涵体形态与临床发病犬肝实质细胞包涵体形态相似，提示可能是ＩＣＨＶ感染细胞所引起的特征性变化．同时测定的病毒血凝滴度结果表明，包涵体的形成与病毒增殖有一定关系，８４～９６小时收毒较为适宜．
王娟[2]（2019）在《甲型H1N1、H3N2流感病毒在MDCK细胞系上的增殖特性研究》文中研究指明目前动物细胞生物反应器大规模培养技术被广泛应用于病毒类疫苗的生产中。国外应用该技术生产的流感病毒细胞疫苗已通过安全认证并在临床上得到广泛使用。而我国的流感疫苗生产仍以落后的鸡胚工艺为主。鸡胚苗因其生产存在劳动强度大、效率低、批量小、易污染、成本高,发病时还可能出现SPF鸡胚供应不足、应急能力差等缺陷,在生产实践中已日趋淘汰。为了提高流感疫苗的产量、质量和市场竞争力,尽快开发生物反应器大规模培养动物细胞生产流感病毒细胞苗的工艺技术,成为我国疫苗生产企业急待攻克的技术难关。当前,疫苗企业在开发流感细胞疫苗中发现,在大规模培养的动物细胞内,流感病毒增殖效率较低,不能在短时间内达到配制疫苗所要求的病毒滴度,限制了流感病毒细胞苗的开发速度。据报道犬肾来源的MDCK细胞对流感病毒敏感,在兽用疫苗生产中已得到应用。本文通过将两株甲型H1N1和H3N2流感病毒疫苗毒毒株,分别在SPF鸡胚中增殖、扩增,构建工作种毒库,进行了生物学鉴定。然后在MDCK贴壁细胞和悬浮细胞上进行培养、增殖适应与传代驯化,探索了两株流感病毒在MDCK细胞系上的培养、增殖条件与规律,确定了最佳病毒感染复数（MOI）、最佳接毒与收毒时间,提高了两株流感病毒在MDCK贴壁细胞和悬浮细胞上增殖后的血凝效价（HA）和病毒滴度(CCID50)。其中甲型H1N1株在MDCK贴壁细胞和悬浮细胞中增殖时,其HA均可达到28HA units/25μl;CCID50分别可达到7.50TU/ml和7.32TU/ml;甲型H3N2在两种MDCK细胞中复制,所得毒液的HA略低于H1N1,最高可达27HA units/25μl,CCID50最高分别可达7.12 TU/ml和6.79TU/ml,能够满足疫苗生产对抗原含量的要求。最后,根据优化后的病毒培养条件参数,分别将两株病毒在MDCK贴壁细胞和悬浮细胞上培养、扩增,然后收毒、冻存,进行生物学鉴定,建立了两株病毒的细胞毒工作代毒库和种子毒毒库,为后续利用生物反应器培养MDCK细胞生产流感病毒细胞疫苗,奠定了病毒基础,对以MDCK细胞为培养基质的流感病毒细胞疫苗的开发与生产具有重要意义。
李莉,杜鑫,张丽娜,杨柳,高晓庆,唐东雪,赵海源,蒋晓梅,张天舒,李金祥[3]（2018）在《重组禽流感病毒H7N9 H7-Re1株培养条件的优化》文中研究说明【背景】高致病性禽流感疫情的暴发造成了巨大的经济损失和环境卫生的破坏,现阶段疫苗接种仍是我国控制禽流感的主要措施之一,需要大量安全、高效和低成本的禽流感病毒疫苗。鸡胚法制备禽流感病毒疫苗的工艺存在原料来源受限、过程复杂、个体差异、培养周期长和不易放大培养等缺陷。而利用生物反应器大规模培养动物细胞生产病毒疫苗,不仅可以大幅度提高单位产量,实现高密度细胞和高病毒产率,同时可保证产品质量。目前我国用于禽流感防控的疫苗为重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗（H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株）。国内细胞全悬浮工艺生产禽流感灭活疫苗单罐产能最大为6 000 L,高病毒含量抗原的提供是生产高效疫苗的主要影响因素之一。【目的】为了能够提供稳定的、高效的生产抗原,开展种毒驯化试验。【方法】将重组禽流感病毒H7N9 H7-Re1株分别在MDCK细胞及悬浮MDCK细胞上增殖。在MDCK细胞上通过不同的病毒接种剂量、不同收获时间、不同TPCK-胰酶浓度的试验,确定了H7N9 H7-Re1株在MDCK细胞上最佳收获时间为64 h,最佳接毒剂量为0.008%或MOI为10-4,最佳TPCK-胰酶浓度为2μg·mL-1,根据确定的最佳培养条件连续传代,并对各代次病毒含量进行检测。【结果】在MDCK细胞上传至第5代时,HA可达1﹕256,每1 mL病毒含量达到108.5TCID50,每0.1 mL病毒含量达到108.5EID50,均高于其他代次。【结论】将第5代确定为MDCK细胞传代最佳代次,可考虑确定为生产用基础种毒代次。在悬浮MDCK细胞上对重组禽流感病毒传代进行了优化试验,确定了H7N9 H7-Re1株在悬浮MDCK细胞上最佳收获时间为48 h,最佳接毒剂量MOI为10-2,最佳TPCK-胰酶浓度为4—8μg·mL-1。在实际疫苗生产过程中,可选择MDCK细胞或悬浮MDCK细胞来扩繁种毒。
龙云凤[4]（2015）在《H3N2亚型流感病毒Vero细胞冷适应株遗传重配研究》文中进行了进一步梳理流感病毒是严重威胁人类健康的一种急性呼吸道传染病病原体,每年在全球引起较高的发病率和死亡率。接种疫苗是预防和控制流感流行的最有效手段。目前批准使用的流感疫苗主要有三类：灭活苗、减毒活疫苗和重组HA疫苗。国内使用的仅有灭活的裂解疫苗或亚单位疫苗。流感减毒活疫苗以类似自然感染途径的喷鼻接种,既可刺激机体产生体液免疫,又能引起局部黏膜免疫和细胞免疫应答,其免疫效果安全有效。流感减毒活疫苗的制备主要是基于流感病毒的基因组为分节段的RNA,可以利用遗传重配技术将减毒供体株和流行株进行重配,重配株获得来自流行株的表面抗原基因和减毒株的表型特征。在该领域研究最多的是俄罗斯和美国,美国采用俄罗斯提供的冷适应供体株A/Ann Arbor/6/60（H2N2）和B/Ann Arbor/1/66制备的第一支三价流感减毒活疫苗Flumist（?）于2003年在美国上市。目前使用的流感减毒活疫苗均以鸡胚作为培养基质。以鸡胚作为基质生产的流感减毒活疫苗,存在外源因子污染和将鸡传染病病原体借由活疫苗接种播散到人群中的风险；同时鸡胚供应周期长,当大流感来袭时难以满足大规模生产需求,尤其是禽流感病毒来袭时鸡胚来源更受影响。鉴于此,WHO鼓励开展以哺乳动物细胞代替鸡胚作为流感疫苗生产基质的研究。Vero细胞是WHO批准生产人用疫苗的传代细胞系,但对流感病毒不敏感,产毒量不稳定。目前未见以Vero细胞为基质生产的季节性流感病毒减毒活疫苗,选育流感病毒Vero细胞冷适应株对于流感减毒活疫苗的研发至关重要。目前世界各国选育出的Vero细胞冷适应株极为稀少,仅见一株A/Singapore/1/57ca（H2N2）报道。本实验室经过梯度降温培养的方法选育出一株Vero细胞冷适应流感病毒株A/Yunnan/1/2005Vca（H3N2）,已经在25℃连续传72代,病毒的滴度稳定在7.8-8.21gTCID5o/mL。经鉴定A/Yunnan/1/2005Vca（H3N2）具有冷适应表型（ca）、温度敏感表型（ts）和减毒表型（att）,并且该毒株在雪貂和小鼠模型上表现出较好的安全性和免疫原性,能有效刺激机体产生细胞免疫和体液免疫,并能保护免疫动物抵抗同亚型流感病毒的致死性攻击,提示A/Yunnan/1/2005Vca（H3N2）有可能是制备流感病毒Vero细胞减毒活疫苗株的理想候选供体株。在本研究中,以实验室选育的A/Yunnan/1/2005 Vca（H3N2）毒株与WHO提供的疫苗生产用流行株A/Solomom Islands/3/2006（H1N1）进行传统遗传重配方法学的研究,以建立稳定而快速的遗传重配技术,并对重配株病毒reA/SI/2006（H1N1）Vca进行生物学表型特征的鉴定与疫苗安全性和免疫原性的研究,以证明供体株A/Yunnan/1/2005Vca（H3N2）能作为流感病毒Vero细胞减毒活疫苗的母本毒株。以两种病毒同时感染Vero细胞、MDCK细胞和鸡胚三种培养基质,加羊抗A/Yunnan/1/2005Vca（H3N2）病毒血清中和供体株,并在Vero细胞25℃条件下培养筛选,最终分别在Vero细胞33℃和MDCK细胞25℃成功重配获得能在Vero细胞25℃生长的毒株reA/SI/2006（H1N1）Vca。采用血凝抑制实验和单向免疫扩散试验对重配毒进行型别鉴定,结果证实重配株病毒抗原性与流行株A/Solomom slands/3/2006（H1N1）一致。进一步的基因测序结果表明,重配株reA/SI/2006（H1N1）Vca表面抗原基因HA和NA来自流行株A/Solomom Islands/3/2006（H1N1）,6个内部基因来自供体株A/Yunnan/1/2005Vca（H3N2）。在经过优化的培养条件下,将重配毒株reA/SI/2006（H1N1）Vca在Vero细胞25℃连续传18代,病毒滴度在7.51gTCID50/mL以上,传代过程中病毒型别不发生改变。重配病毒reA/SI/2006（H1N1）Vca在25℃、33℃和39℃的感染性滴度分别为6.9、7.8和3.51gTCID50/mL,具有ca、ts表型。以106 TCID50的病毒量滴鼻接种BALB/c小鼠,免后连续7天测定小鼠鼻夹和肺组织的病毒载量,重配株病毒reA/SI/2006（H1N1）Vca组在前五天,上下呼吸道的病毒载量均比疫苗株低了至少31gTCID50/g,说明重配病毒具有减毒表型。以105TCID50、106TCID50和107TCID50三种剂量对BALB/c小鼠进行二次免疫,能有效刺激小鼠产生针对流行株病毒A/Solomom Islands/3/2006（H1N1）的血凝抑制抗体和中和抗体,并能促进粘膜sIgA的分泌。接种重配病毒reA/SI/2006（H1N1）Vca后,不仅完全保护小鼠免受同亚型流感病毒A/JN/2009（H1N1） 50MLD50病毒量的致死性攻击,而且能完全抑制攻击病毒在小鼠体内的复制。本研究表明,reA/SI/2006（H1N1）Vca是以遗传重配技术获得的既带有流行株的表面抗原基因,又能在Vero细胞25℃生长,并具有减毒表型特征的重配病毒,因此A/Yunnan/1/2005Vca（H3N2）可以用作流感病毒Vero细胞冷适应减毒活疫苗的母本株。
李晓叶[5]（2011）在《抗犬1型腺病毒单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立》文中指出犬1型腺病毒（Canine adenovirus type 1,CAV-1）又名犬传染性肝炎病毒（Canine infectious hepatitis virus,ICHV）,该病毒能够引起犬的一种急性败血性传染病,称为犬传染性肝炎,该病主要发生在犬,也可以见于其他犬科动物,在犬主要表现肝炎和眼睛疾患,在狐狸则主要表现为脑炎,该病对于犬不分品种、性别、季节都能发生,但主要发生于1岁以内的幼犬,常常引起急性坏死性肝炎,在临床上经常与犬瘟热混合感染,故使病情更加严重复杂。本病几乎发生在世界各地。鉴于CAV-1已经对我国犬科动物构成极大威胁,因此积极开展CAV-1流行病学和免疫预防治疗有着重要的理论价值和现实意义。本研究通过制备抗抗犬1型腺病毒单克隆抗体和建立双抗夹心ELISA检测方法,在检测CAV-1方面具有简单、特异性好、稳定、方便、敏感性高、快速检测等优点,从而对尽早控制CAV-1的传播和流行奠定基础。通过杂交瘤细胞的筛选,获得三株稳定分泌抗CAV-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为G3、C2、H2。根据H2与G3 McAb识别的抗原表位不同,分别用于包被酶标板和制备酶标结合物。用H2分泌的McAb与HRP标记G3 McAb建立双抗夹心ELISA检测方法。分别对双抗夹心ELISA检测的6个条件进行优化：CAV-1抗原最佳使用浓度、纯化的H2单克隆抗体最佳包被浓度、最佳封闭液、最佳封闭时间、HRP酶标G3McAb最佳反应浓度、HRP酶标G3 McAb最佳反应时间、底物作用时间。初步建立了检测CAV-1抗原的双抗夹心ELISA方法,为下一步研制检测CAV-1的诊断试剂盒奠定了基础。
刘鹏,李佳林,马超,赵祖波[6]（2013）在《H1N1流感病毒在微载体培养MDCK细胞上增殖的研究》文中提出目的探索MDCK细胞在微载体上的培养条件,并研究H1N1型流感病毒在MDCK细胞上的增殖条件。方法在微载体上培养好MDCK细胞上用H1N1型流感病毒在不同的病毒感染复数（MOI）、胰酶浓度两个关键的病毒增殖条件进行流感病毒在细胞上的增殖研究。结果微载体质量浓度为6 g/L时,MDCK细胞培养密度可以达到4.5×106cells/mL。在MOI为0.05接种流感病毒,胰酶质量浓度4μg/mL,流感病毒在MDCK细胞上可获得较高的滴度。结论 MDCK细胞用微载体培养可以达到较高的细胞密度,可以作为规模化生产新型流感病毒疫苗的主要细胞基质进行进一步的研究。
黄锭[7]（2016）在《基于MDCK细胞高密度培养的甲型流感病毒疫苗生产工艺开发与优化》文中研究指明近年来,随着动物细胞培养技术的迅猛发展,其在生物医药生产方面的灵活性、高效性、安全性等优势日渐突显,正被广泛应用于包括病毒类疫苗在内的多种生物医药产品的生产,并将有望取代传统工艺而成为病毒疫苗的主流生产方式。然而以流感疫苗为例,采用动物细胞培养获得的病毒增殖效率与传统鸡胚法相比优势尚不明显,尤其在高密度细胞培养过程中流感病毒的增殖效率更是低下,使这种工艺的经济性面临严峻挑战。为此,迫切需要研究和认识细胞生理状态、培养环境营养供给和操作参数、病毒感染参数等条件对细胞生长、密度维持和病毒感染复制的影响,以优化细胞培养和流感病毒生产工艺,提升病毒生产效率在基于动物细胞大规模培养技术的流感疫苗生产工艺中,细胞生长和病毒扩增效率是决定病毒总产量的两个关键因子,因此本文首先从这两方面入手考察了细胞贴壁基质（微载体）和生长促进物（血清）对细胞生长的影响,以及病毒感染参数对病毒增殖的影响,初步建立了适合MDCK细胞生长和流感病毒生产的工艺。此外,由于病毒的增殖与细胞的生理状态之间具有直接的关系,而且培养过程中的营养和环境条件是影响细胞生理状态的重要因素。因此,本文继而通过深入考察培养环境的营养供给和生物反应器操作参数对病毒增殖的影响,以认识病毒增殖对培养环境营养供给和参数控制条件的需求,在此基础上进一步优化维持培养基的营养组成和生物反应器的操作参数,建立能够满足未来大规模工业化生产需要的MDCK细胞高密度培养和流感病毒高效生产工艺。本文首先通过考察微载体和血清对细胞生长的影响以及感染参数对病毒生产效率的影响,确定了基于MDCK细胞培养的流感疫苗生产的基本工艺。研究表明,Cytodex-1和Cytodex-3两种微载体均能支持MDCK细胞正常贴附生长,胎牛血清（FBS）支持细胞生长的作用显着优于新生小牛血清（NBS）。以2 g/L浓度的Cytodex-1或3 g/L的Cytodex-3为贴附基质,以DMEM为基础培养基,添加7.5%（v/v）的FBS便能确保MDCK细胞正常生长,细胞密度可达5.50×106 cells/ml;事关流感病毒感染复制的三个关键参数TPCK-胰酶浓度、MOI和TOI均对病毒增殖具有显着影响,采用5.0 mg/L的TPCK-胰酶浓度、0.01的MOI和72 h的TOI较为适宜；据此建立了基于MDCK细胞生物反应器培养的流感病毒基本生产工艺,流感病毒HA滴度值达到210.13±0.18 HA units/50μl,单位细胞病毒产率Svy为（6.09±0.44）×103virions/cell。上述生产工艺虽可满足工业化生产的基本需求,但其生产效率仍有较大提升空间。为了进一步提高生产效率,本文继而通过考察维持培养基的关键组分对产毒期MDCK细胞密度维持、代谢和病毒增殖的影响,分析了病毒增殖过程对营养代谢的需求,进一步优化了维持培养基。研究表明产毒期的换液操作可显着提高单位细胞的病毒产率,由此可知在细胞产毒阶段改善培养环境的营养供给对病毒高效增殖尤为重要。与此同时,本文发现在产毒期适当提高葡萄糖浓度可显着促进产毒期的细胞密度维持,提高谷氨酰胺浓度既有利于产毒期细胞密度的维持亦可促进病毒增殖,提高其它氨基酸浓度亦可促进病毒增殖。另外,本文发现在产毒期添加0.75 mmol/L浓度的丁酸钠（NaBu）可显着提高流感病毒的产率,其作用机制在于获得较高的Go/G1细胞比例的同时维持较低的细胞凋亡比例,从而有利于病毒感染和进入细胞,且延长病毒增殖时间。在此基础上开发和优化的维持培养基Optimized-MM,能显着提高流感病毒的生产效率,其中流感病毒的HA滴度、HA抗原蛋白浓度和Svy分别提高了（159.37±31.82）%、（34.29±2.03）%和（166.17±37.50）%。此外,为了优化流感病毒增殖的环境控制参数,本文还考察了细胞生长期和产毒期的生物反应器控制参数（DO、pH和温度）对流感病毒增殖的影响及其作用机制。研究发现,在本文考察的实验范围内,pH值和温度对流感病毒增殖效率的作用十分显着,产毒期7.2的pHpi值可显着提高流感病毒的增殖效率,在该条件下可以获得较高的Go/G1期细胞比例和较低的细胞凋亡比例,有利于提高病毒RNA酶量和减少抑病毒蛋白对病毒RNA酶活性的抑制作用,从而有利于病毒感染和病毒RNA合成,并在胞内实现大量增殖。将细胞生长期和产毒期的温度均控制为35℃时可显着提高流感病毒的增殖效率,实验发现在该条件下接毒前和产毒期间的细胞均可维持较高的G0/G1期细胞比例和较低的凋亡比例,可提高病毒RNA酶量和削弱抑病毒蛋白对病毒RNA酶活性的抑制作用,还可以增强胞内促病毒蛋白对病毒RNP出核转运的促进作用,从而有利于病毒感染、RNA合成和RNP的出核转运,在胞内实现病毒的高效增殖。最后,本文据上述研究进一步确定了培养环境的营养供给条件和生物反应器操作参数,进而在上述基本工艺的基础优化并建立了基于MDCK细胞培养的流感病毒生产新工艺。结果表明,虽然优化后MDCK细胞在生长期达到的细胞密度以及产毒期的密度维持与基本工艺并无明显差异,但在最后优化并建立的工艺中流感病毒的HA滴度、HA抗原蛋白浓度和Svy分别达到213.00±0.00 HA units/50μl、6.77±0.37μg/ml和（41.31±0.98）×103 virions/cell,分别是基本工艺的7.36±0.90、1.89±0.90和6.83±1.02倍,且病毒的稳定性也表现更好。通过本文的研究,开发了基于MDCK细胞大规模培养的流感病毒疫苗高效生产工艺,为流感病毒疫苗的工业化生产奠定了基础。另外,对培养环境营养组成和环境控制参数影响流感病毒增殖作用机制的研究所获得的深刻认识,对以细胞大规模培养技术为基础的各类病毒疫苗生产工艺的开发和优化均具重要借鉴作用。
席莉,刘旭光,李爽,李可新,李雪,邹钰莹,邹勇[8]（2018）在《甲型流感病毒在贴壁MDCK细胞上增殖条件的优化》文中研究说明目的确定甲型流感病毒在贴壁MDCK细胞上最佳增殖条件。方法将3株甲型流感病毒（H1N1 NYMC X-181、H1N1 NYMC X-275和H3N2 NYMC X-263B）在贴壁MDCK细胞上进行传代培养,以其血凝效价和半数细胞感染剂量（median cell culture infective dose,CCID50）为检测指标,分别对其增殖条件胰酶浓度（0.5、1.25、2.5、3.5和4.5μg/m L）、MOI（0.000 1、0.001、0.01、0.1、1）、培养温度（33、34、35、36、37℃）、吸附时间（0、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h）、培养时间（24、48、72、96、120 h）进行优化。结果 H1N1 NYMC X-181、H1N1 NYMC X-275和H3N2 NYMC X-263B 3株流感病毒在贴壁MDCK细胞上增殖的最适胰酶浓度分别为2.5、1.25、1.25μg/m L;最适MOI值均为0.01;最适培养温度均为34℃;最适吸附时间分别为1.5～2.0、1.5、1.5 h;最适培养时间均为72 h。结论确定了3株甲型流感病毒在贴壁MDCK细胞上的增殖条件,为后续相关疫苗的研发工作奠定了基础。
窦晓霞[9]（2019）在《生物反应器培养MDCK细胞增殖甲型H3N2流感病毒的研究》文中研究指明流感即流行性感冒,是由流感病毒引起的一种急性呼吸道传染性疾病。流感病毒属于正黏科病毒,可分为甲、乙、丙三种类型。甲型H3N2流感病毒是最常见的季节性流感病毒,也是目前多价流感疫苗中主要组成部分。流感疫苗以鸡胚培养法生产的传统疫苗为主,这种传统生产工艺虽然成熟,但存在产量不稳定、生产周期长、病毒易变异、易引起过敏反应等缺点。相对于鸡胚,生物反应器大规模生产细胞基质流感疫苗工艺生产过程操作简单且易于控制,生产周期短,自动化程度高,疫苗质量稳定、安全,具有绝对优势。而MDCK细胞为目前公认的对流感病毒敏感的细胞株之一。本研究将甘肃省动物细胞工程技术研究中心保存的MDCK细胞,按照《中华人民共和国药典》（三部）对生产疫苗用细胞要求,从生物学特性、微生物污染和遗传特性鉴定建立MDCK细胞库,其复苏活力为96%,培养48h细胞生长致密单层,形态多呈三角形和不规则多角形,与冻存前的形态基本一致;生长曲线呈“S”型,最大增殖密度为5.45×105cells/mL,倍增时间为23.2h,连续培养10代时形态和生长速度保持一致;真菌、细菌、支原体和内、外源病毒因子检测为阴性;染色体众数在78～82之间。通过生长特性研究筛选用于培养MDCK细胞的培养基和载体。结果表明,MDCK细胞用DMEM培养基培养倍增时间为20.2h,最大增殖密度9.58×105cells/mL,传代培养10代生长良好,优于DM/F12、MEM和M199培养基;生物反应器Cytodex-1微载体和片状载体培养MDCK细胞。结果表明,Cytodex-1微载体和片状载体均能支持MDCK细胞生长,但是在相同体积的反应器中片状载体培养MDCK细胞最大增殖密度6.18×106cells/mL明显高于Cytodex-1微载体3.21×106cells/mL,因此本研究选用片状载体培养MDCK细胞,进行后期试验研究。生物反应器片状载体培养建库的MDCK细胞增殖甲型H3N2流感病毒并对增殖条件进行优化。结果表明,本研究中生物反应器增殖甲型H3N2流感病毒最优TPCK-胰酶浓度为2.5μg/mL,最优MOI为0.01;当所收获的病毒液用于生产流感疫苗时,收毒时间以72h为宜;当所收获的病毒液作为继续扩增流感病毒的种毒时收毒时间以60h为宜。通过本研究,优化了高密度培养MDCK细胞增殖甲型H3N2流感病毒的条件,为生物反应器培养哺乳动物细胞生产流感疫苗的大规模生产提供参考依据。
余钧池,陈柳军[10]（2014）在《流感病毒在MDCK细胞中培养的条件优化》文中研究指明目的探讨流感病毒在MDCK细胞中的最佳培养条件。方法将流感病毒以吸附法和直接接种法接种在MDCK细胞上,比较接种效果;选择最佳病毒接种方案,分别通过调整细胞培养时间、培养温度、病毒生长液胎牛血清浓度、胰酶浓度、病毒接种量和染毒传代次数来优化选择最佳培养条件。结果直接接种法的培养效率较高;流感病毒在MDCK细胞中培养的最佳收获时间为96h;最佳培养温度为35.5℃;胎牛血清对病毒的增殖有明显的抑制作用;病毒生长液含有终浓度为2.5μg/mL的胰酶可提高病毒血凝效价;用于流感病毒培养的MDCK细胞的传代次数不宜超过4代。结论流感病毒在MDCK细胞中最佳培养条件是:在病毒生长液环境下直接接种流感病毒,放置35.5℃、5%CO2培养箱培养96h后收获。其中病毒生长液中无胎牛血清、胰酶终浓度为2.5μg/mL。
二、ICHV在MDCK细胞上增殖的研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、ICHV在MDCK细胞上增殖的研究（论文提纲范文）
（2）甲型H1N1、H3N2流感病毒在MDCK细胞系上的增殖特性研究（论文提纲范文）
| 项目基金来源 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1 甲型流感病毒疫苗的研究现状 |
| 1.1 甲型流感病毒的危害 |
| 1.2 甲型流感病毒的分子结构特点 |
| 1.3 甲型流感病毒感染机制 |
| 1.4 甲型流感疫苗国内外研究现状 |
| 2 动物细胞培养技术的发展 |
| 2.1 细胞培养的概念 |
| 2.2 细胞培养的起源 |
| 2.3 动物细胞培养方法 |
| 2.3.1 贴壁培养 |
| 2.3.2 悬浮培养 |
| 2.4 细胞大规模培养的现状 |
| 3 MDCK细胞流感疫苗生产 |
| 3.1 MDCK细胞系的介绍 |
| 3.2 MDCK生产流感病毒疫苗的优点 |
| 3.3 MDCK细胞生产流感病毒疫苗的国内外研究 |
| 4 本研究的目的、内容及意义 |
| 第二章 流感病毒在MDCK贴壁细胞上的增殖特性研究 |
| 1 实验材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 细胞株和病毒株 |
| 1.1.2 实验试剂和主要仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 细胞复苏 |
| 1.2.2 贴壁培养型MDCK细胞传代 |
| 1.2.3 细胞活力测定 |
| 1.2.4 病毒种子库建立 |
| 1.2.5 病毒种子库生物学检定 |
| 1.3 敏感性试验 |
| 1.4 试验方案 |
| 1.4.1 细胞接种密度对流感病毒增殖效果的影响 |
| 1.4.2 TPCK-胰酶浓度对流感病毒增殖效果的影响 |
| 1.4.3 病毒感染复数对流感病毒增殖效果的影响 |
| 1.4.4 病毒感染时间对流感病毒增殖效果的影响 |
| 1.4.5 收毒时间对流感病毒增殖效果的影响 |
| 2 试验结果与分析 |
| 2.1 细胞复苏活力测定结果 |
| 2.2 病毒种子库生物学检定结果 |
| 2.3 敏感性试验结果 |
| 2.4 细胞接种密度对流感病毒增殖效果的影响结果 |
| 2.5 胰酶浓度对流感病毒增殖效果的影响 |
| 2.6 病毒感染复数对流感病毒增殖效果的影响结果 |
| 2.7 接毒时间对流感病毒的增殖效果影响结果 |
| 2.8 收毒时间对流感病毒的增殖效果影响结果 |
| 3 本章小结 |
| 第三章 流感病毒在MDCK悬浮细胞上的增殖特性研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要实验材料 |
| 1.1.1 细胞株和病毒株 |
| 1.1.2 实验试剂和主要仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 悬浮培养型MDCK细胞复苏与传代 |
| 1.2.2 细胞活力测定 |
| 1.2.3 敏感性试验 |
| 1.3 实验方案 |
| 1.3.1 MDCK悬浮细胞密度对流感病毒增殖效果的影响 |
| 1.3.2 病毒感染复数对流感病毒在MDCK悬浮细胞增殖效果的影响 |
| 1.3.3 流感病毒在MDCK悬浮细胞上最佳收毒时间 |
| 2 试验结果与讨论 |
| 2.1 MDCK悬浮细胞密度对流感病毒增殖效果的影响结果 |
| 2.2 病毒感染复数对流感病毒在MDCK悬浮细胞增殖效果的影响结果 |
| 2.3 流感病毒在MDCK悬浮细胞上最佳收毒时间 |
| 3 本章小结 |
| 第四章 流感病毒病毒库的建立及检定 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 菌种 |
| 1.2 器械及设备 |
| 1.3 培养基(培养用液) |
| 1.4 试剂 |
| 2 方法 |
| 2.1 无菌检查 |
| 2.1.1 培养基的配制及微生物促生长试验方法 |
| 2.1.2 待检样品检验 |
| 2.1.3 结果判定 |
| 2.2 支原体检查:培养法 |
| 2.2.1 培养基的配制及检验 |
| 2.2.2 样品检查 |
| 2.3 血凝滴度测定 |
| 2.4 病毒滴度测定 |
| 3 结果 |
| 3.1 无菌检查结果 |
| 3.1.1 灵敏度结果 |
| 3.1.2 样品检查结果 |
| 3.2 支原体检查结果 |
| 3.2.1 灵敏度检查结果 |
| 3.2.2 样品检查结果 |
| 3.3 血凝滴度测定 |
| 3.4 病毒滴度测定 |
| 第五章 全文总结与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 作者简介 |
| 硕士期间已发表论文 |
| 硕士期间参与的课题研究 |
| 致谢 |
（3）重组禽流感病毒H7N9 H7-Re1株培养条件的优化（论文提纲范文）
| 0 引言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 细胞和病毒 |
| 1.2 主要试剂及耗材 |
| 1.3 主要设备 |
| 1.4 MDCK细胞培养H7N9 H7-Re1株方法 |
| 1.4.1 MDCK细胞培养 |
| 1.4.2 病毒在MDCK细胞上增殖预试验 |
| 1.4.3 MDCK细胞上病毒培养条件优化 |
| 1.4.3. 1 MDCK细胞上最佳接毒剂量 (MOI或百分比) |
| 1.4.3. 2 MDCK细胞上最佳收毒时间的确定 |
| 1.4.3. 3 MDCK细胞上最佳TPCK-胰酶的确定 |
| 1.4.3. 4 MDCK细胞上最佳接种方法的确定 |
| 1.4.4 MDCK细胞上最佳病毒代次的确定 |
| 1.5 悬浮MDCK细胞培养H7N9 H7-Re1株 |
| 1.5.1 悬浮MDCK细胞培养 |
| 1.5.2 悬浮MDCK细胞上增殖预试验 |
| 1.5.3 悬浮MDCK细胞上最佳接毒剂量 (MOI) |
| 1.5.4 悬浮MDCK细胞上最佳收毒时间的确定 |
| 1.5.5 悬浮MDCK细胞上最佳TPCK-胰酶含量的确定 |
| 2 结果 |
| 2.1 病毒在MDCK细胞上病毒增殖试验 |
| 2.1.1 MDCK细胞病变观察 |
| 2.1.2 MDCK细胞预试验病毒含量 |
| 2.1.3 MDCK细胞上培养条件优化 |
| 2.1.3. 1 最佳接毒剂量 (MOI) 筛选 |
| 2.1.3. 2 最佳收毒时间筛选 |
| 2.1.3. 3 最佳TPCK-胰酶含量筛选 |
| 2.1.3. 4 最佳接毒方式筛选 |
| 2.1.3. 5 最佳病毒代次筛选 |
| 2.2 病毒在悬浮MDCK细胞上的增殖试验 |
| 2.2.1 MDCK细胞细胞病变观察 |
| 2.2.2 病毒在悬浮MDCK细胞上病毒含量 |
| 2.2.2. 1 预试验结果 |
| 2.2.2. 2 悬浮MDCK细胞最佳接毒剂量 |
| 2.2.2. 3 悬浮MDCK细胞最佳收毒时间 |
| 2.2.2. 4 最佳TPCK-胰酶浓度试验 |
| 3 讨论 |
| 3.1 接毒方式 |
| 3.2 接毒比例 |
| 3.3 收毒时间 |
| 3.4 TPCK-胰酶浓度 |
| 3.5 病毒培养条件 |
| 4 结论 |
| 4.1 |
| 4.2 |
（4）H3N2亚型流感病毒Vero细胞冷适应株遗传重配研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 流感病毒Vero细胞冷适应传统遗传重配方法的研究 |
| 前言 |
| 第一节 H3N2亚型流感病毒Vero细胞冷适应株和流行株在不同培养基质中的增殖研究及抗血清制备 |
| 1. 引言 |
| 2. 实验材料 |
| 3. 实验方法 |
| 4. 实验结果 |
| 5. 讨论 |
| 6. 小结 |
| 第二节 遗传重配技术研究 |
| 1. 引言 |
| 2. 实验材料 |
| 3. 试验方法 |
| 4. 实验结果 |
| 5. 讨论 |
| 6. 小结 |
| 第2章 重配株病毒生物学表型特征鉴定 |
| 引言 |
| 第一节 重配株病毒在SPF鸡和BALB/c小鼠上的致病性评价 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 试验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 第二节 重配株病毒生物学特性鉴定及培养条件优化 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 试验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 第三节 重配株病毒传代稳定性、ca、ts和att表型鉴定 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 试验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 第3章 重配株在BALB/c小鼠的免疫原性及保护效力评价 |
| 引言 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附录Ⅰ 重配株reA/SI/2006(H1N1)Vca碱基序列比对 |
| 附录Ⅱ 基本实验操作 |
| 附录Ⅲ 溶液配置 |
| 附录Ⅳ 缩略语表 |
| 附录Ⅴ 图表索引 |
| 致谢 |
（5）抗犬1型腺病毒单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立（论文提纲范文）
| 内容提要 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩写词表 |
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 犬1型腺病毒的研究进展 |
| 1.1 病原学 |
| 1.2 流行病学 |
| 1.3 临床研究 |
| 1.4 诊断 |
| 1.5 免疫 |
| 1.6 治疗 |
| 1.7 防疫措施 |
| 第二章 单克隆抗体的研究进展及其在动物疾病研究中的应用… |
| 2.1 单克隆抗体的研究进展 |
| 2.2 单克隆抗体在病毒性传染病研究中的应用 |
| 2.3 单克隆抗体面临的问题 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第一章 抗犬1型腺病毒单克隆抗体的制备及特性鉴定 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 第2章 病毒双抗夹心ELISA检测方法的建立 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 导师简介 |
| 作者简介 |
（6）H1N1流感病毒在微载体培养MDCK细胞上增殖的研究（论文提纲范文）
| 1 材料 |
| 1.1 材料 |
| 2 方法 |
| 2.1 细胞培养方法 |
| 2.2 H1N1型流感病毒在MDCK细胞微载体培养中的增殖培养 |
| 2.2.1 病毒感染复数 (MOI) 对H1N1流感病毒在MDCK细胞上增殖影响的检测 |
| 2.2.2 胰酶浓度对H1N1流感病毒在MDCK细胞增殖影响的检测 |
| 3 结果 |
| 3.1 微载体培养MDCK细胞 |
| 3.2 MDCK细胞微载体培养中不同MOI及胰酶浓度对H1N1型流感病毒增殖的影响 |
| 3.2.1 MOI对H1N1流感病毒增殖的影响 |
| 3.2.2 胰酶浓度对H1N1流感病毒增殖的影响 |
| 4 讨论 |
（7）基于MDCK细胞高密度培养的甲型流感病毒疫苗生产工艺开发与优化（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 前言 |
| 1.1 动物细胞大规模培养技术及其研究进展 |
| 1.1.1 动物细胞大规模培养技术概述 |
| 1.1.2 动物细胞大规模培养技术与现代生物医药产品生产 |
| 1.1.3 动物细胞大规模培养的核心技术 |
| 1.2 动物细胞大规模培养技术在病毒疫苗生产中的应用 |
| 1.2.1 病毒疫苗及其生产方式 |
| 1.2.2 动物细胞大规模培养技术应用于病毒疫苗工业化生产的主要进展 |
| 1.3 流感疫苗及其研发现状 |
| 1.3.1 流行性感冒及其危害 |
| 1.3.2 流感疫苗及其市场现状 |
| 1.3.3 流感疫苗的生产方式 |
| 1.4 基于动物细胞大规模培养技术的流感疫苗生产工艺 |
| 1.4.1 动物细胞大规模培养技术在流感疫苗生产中的应用 |
| 1.4.2 基于动物细胞培养的流感疫苗生产工艺的分类 |
| 1.4.3 流感病毒在动物细胞中的增殖过程 |
| 1.4.4 基于动物细胞技术的流感疫苗生产关键环节 |
| 1.4.5 影响单位细胞病毒产率的关键因素 |
| 1.5 本文的研究目的、内容及意义 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 细胞株 |
| 2.1.2 流感病毒株 |
| 2.1.3 培养基 |
| 2.1.4 微载体 |
| 2.1.5 培养器皿 |
| 2.2 细胞培养系统和培养方法 |
| 2.2.1 种子细胞培养 |
| 2.2.2 细胞传代 |
| 2.2.3 搅拌瓶及反应器的批式培养和相关样品处理 |
| 2.2.4 搅拌瓶及反应器中流感病毒感染过程 |
| 2.2.5 反应器操作与控制 |
| 2.3 检测分析方法 |
| 2.3.1 细胞计数 |
| 2.3.2 营养物及代谢副产物浓度测定 |
| 2.3.3 细胞周期测定 |
| 2.3.4 细胞凋亡测定 |
| 2.3.5 流感病毒血凝滴度测定 |
| 2.3.6 流感病毒半组织感染滴度测定 |
| 2.3.7 流感病毒血凝抗原蛋白浓度测定 |
| 2.3.8 流感病毒RNA相对含量测定 |
| 2.3.9 蛋白总含量测定 |
| 2.3.10 流感病毒蛋白及MDCK细胞内相关蛋白的相对含量测定 |
| 2.4 计算方法 |
| 2.4.1 计算细胞比生长速率 |
| 2.4.2 细胞比死亡速率 |
| 2.4.3 计算代谢速率 |
| 2.4.4 单位细胞的病毒产率 |
| 第3章 基于MDCK细胞培养的流感病毒生产工艺初探 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验方案 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 MDCK细胞的生长及其影响因素 |
| 3.3.2 流感病毒的感染复制及其影响因素 |
| 3.3.3 基于MDCK细胞生物反应器培养的流感病毒疫苗生产工艺初步开发 |
| 3.4 本章小结 |
| 第4章 营养代谢对MDCK细胞扩增流感病毒的影响 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验设计 |
| 4.2.1 换液操作 |
| 4.2.2 改变维持培养基 |
| 4.2.3 产毒期细胞的营养物消耗和副产物生成 |
| 4.2.4 添加特殊化学物 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 换液操作对流感病毒增殖的影响 |
| 4.3.2 维持培养基对流感病毒增殖的影响 |
| 4.3.3 细胞在流感病毒扩增过程中的营养物代谢及其需求分析 |
| 4.3.4 维持培养基中基础营养组分及浓度对流感病毒增殖的影响 |
| 4.3.5 化学添加物及其浓度对流感病毒增殖的影响 |
| 4.3.6 丁酸钠促进流感病毒增殖的作用机制 |
| 4.3.7 维持培养基组成的进一步调整和优化 |
| 4.4 本章小结 |
| 第5章 环境控制参数对MDCK细胞扩增流感病毒的影响 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 实验设计 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 环境条件对流感病毒增殖的影响 |
| 5.3.2 pH_(pi)影响流感病毒增殖的作用机制 |
| 5.3.3 温度影响流感病毒增殖的作用机制 |
| 5.4 本章小结 |
| 第6章 基于MDCK细胞培养的流感病毒生产工艺的确立 |
| 6.1 前言 |
| 6.2 实验设计 |
| 6.3 结果与讨论 |
| 6.3.1 优化前的工艺条件 |
| 6.3.2 优化后的工艺条件 |
| 6.3.3 MDCK细胞的生长和密度维持 |
| 6.3.4 工艺优化前后的流感病毒增殖 |
| 6.4 本章小结 |
| 第7章 全文总结与展望 |
| 7.1 全文总结 |
| 7.2 本文创新点 |
| 7.3 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 研究成果 |
（8）甲型流感病毒在贴壁MDCK细胞上增殖条件的优化（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 细胞及病毒 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 MDCK细胞的培养 |
| 1.4 甲型流感病毒在MDCK细胞上增殖条件的优化 |
| 1.4.1胰酶浓度的优化 |
| 1.4.2 MOI的优化 |
| 1.4.3 培养温度的优化 |
| 1.4.4 吸附时间的优化 |
| 1.4.5 培养时间的优化 |
| 1.5 检测方法 |
| 1.5.1 血凝效价 |
| 1.5.2 CCID50检测 |
| 2 结果 |
| 2.1 胰酶浓度的优化 |
| 2.2 MOI的优化 |
| 2.3 培养温度的优化 |
| 2.4 吸附时间的优化 |
| 2.5 培养时间的优化 |
| 3 讨论 |
（9）生物反应器培养MDCK细胞增殖甲型H3N2流感病毒的研究（论文提纲范文）
| 项目基金来源 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 动物细胞大规模培养技术概述 |
| 1.1 动物细胞培养技术的诞生与发展 |
| 1.2 生物反应器大规模培养动物细胞的方法 |
| 1.2.1 片状载体培养 |
| 1.2.2 微载体培养 |
| 1.2.3 全悬浮培养 |
| 1.3 动物细胞培养技术在病毒增殖中的应用 |
| 1.4 开展动物细胞增殖流感病毒的重要性 |
| 2 以细胞为基质增殖流感病毒 |
| 2.1 适用于增殖流感病毒的细胞 |
| 2.2 MDCK细胞增殖流感病毒的优点 |
| 2.3 MDCK细胞系特性 |
| 3 甲型H3N2流感病毒 |
| 3.1 甲型H3N2流感病毒的流行背景 |
| 3.2 甲型流感病毒的结构和生物学特征 |
| 3.3 甲型流感病毒在宿主细胞中的增殖过程 |
| 4 本研究的目的及意义 |
| 第二章 MDCK细胞库的建立和鉴定 |
| 1 材料和仪器设备 |
| 1.1 主要材料 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 MDCK细胞库的建立 |
| 2.2 MDCK细胞生物学鉴定 |
| 2.2.1 MDCK细胞复苏培养和活力测定 |
| 2.2.2 细胞形态观察及传代培养 |
| 2.2.3 细胞生长曲线的测定 |
| 2.2.4 无菌检查 |
| 2.2.5 支原体检查 |
| 2.2.6 病毒检测 |
| 2.2.7 染色体统计分析 |
| 2.3 数据处理方法 |
| 3 结果与分析及小结 |
| 3.1 结果与分析 |
| 3.1.1 MDCK细胞库的建立 |
| 3.1.2 MDCK细胞复苏培养和活力测定结果 |
| 3.1.3 细胞形态观察及传代培养结果 |
| 3.1.4 MDCK细胞生长曲线 |
| 3.1.5 无菌检查结果 |
| 3.1.6 支原体检查结果 |
| 3.1.7 病毒检测结果 |
| 3.1.8 染色体统计分析结果 |
| 3.2 小结 |
| 第三章 MDCK细胞培养培养基和载体的选择 |
| 1 材料和仪器设备 |
| 1.1 主要材料 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器设备 |
| 1.4 主要试剂的配制 |
| 1.4.1 培养基的配制 |
| 1.4.2 结晶紫染液的配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 培养基的筛选 |
| 2.1.1 传代适应培养 |
| 2.1.2 生长曲线的绘制 |
| 2.2 载体的选择 |
| 2.2.1 片状载体培养MDCK细胞 |
| 2.2.2 Cytodex-1微载体培养MDCK细胞探究 |
| 2.3 数据处理方法 |
| 3 结果与分析及小结 |
| 3.1 结果与分析 |
| 3.1.1 培养基的筛选 |
| 3.1.2 载体的选择 |
| 3.2 小结 |
| 第四章 生物反应器高密度增殖甲型H3N2流感病毒 |
| 1 材料和仪器设备 |
| 1.1 主要材料 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器设备 |
| 1.4 试验动物 |
| 1.5 主要试剂配制 |
| 1.5.1 1%红细胞悬液的配制 |
| 1.5.2 DMEM培养基的配制 |
| 1.5.3 病毒培养维持液的配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 血凝效价和半数组织感染量的测定 |
| 2.1.1 血凝效价的测定 |
| 2.1.2 半数组织感染量血凝效价的测定 |
| 2.2 生物反应器的准备及MDCK细胞的培养 |
| 2.3 维持液中胰酶浓度确定 |
| 2.4 甲型H3N2流感病毒接种最佳MOI |
| 2.5 生物反应器增殖甲型H3N2病毒最佳收毒时间 |
| 2.6 数据处理方法 |
| 3 结果与分析及小结 |
| 3.1 结果与分析 |
| 3.1.1 维持液中胰酶浓度的确定 |
| 3.1.2 甲型H3N2流感病毒接种最佳MOI |
| 3.1.3 生物反应器增殖甲型H3N2病毒收毒时间确定 |
| 3.2 小结 |
| 第五章 全文总结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 1.作者简介 |
| 2.参与的课题研究 |
| 3.已发表论文 |
| 致谢 |
（10）流感病毒在MDCK细胞中培养的条件优化（论文提纲范文）
| 1材料与方法 |
| 2结果 |
| 3讨论 |
四、ICHV在MDCK细胞上增殖的研究（论文参考文献）
- [1]ICHV在MDCK细胞上增殖的研究[J]. 遇透玲,田克恭,郑振峰,渠川玫,李俊梅. 中国畜禽传染病, 1994(01)
- [2]甲型H1N1、H3N2流感病毒在MDCK细胞系上的增殖特性研究[D]. 王娟. 西北民族大学, 2019(01)
- [3]重组禽流感病毒H7N9 H7-Re1株培养条件的优化[J]. 李莉,杜鑫,张丽娜,杨柳,高晓庆,唐东雪,赵海源,蒋晓梅,张天舒,李金祥. 中国农业科学, 2018(17)
- [4]H3N2亚型流感病毒Vero细胞冷适应株遗传重配研究[D]. 龙云凤. 北京协和医学院, 2015(11)
- [5]抗犬1型腺病毒单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立[D]. 李晓叶. 吉林大学, 2011(10)
- [6]H1N1流感病毒在微载体培养MDCK细胞上增殖的研究[J]. 刘鹏,李佳林,马超,赵祖波. 微生物学免疫学进展, 2013(01)
- [7]基于MDCK细胞高密度培养的甲型流感病毒疫苗生产工艺开发与优化[D]. 黄锭. 华东理工大学, 2016(08)
- [8]甲型流感病毒在贴壁MDCK细胞上增殖条件的优化[J]. 席莉,刘旭光,李爽,李可新,李雪,邹钰莹,邹勇. 中国生物制品学杂志, 2018(10)
- [9]生物反应器培养MDCK细胞增殖甲型H3N2流感病毒的研究[D]. 窦晓霞. 西北民族大学, 2019(01)
- [10]流感病毒在MDCK细胞中培养的条件优化[J]. 余钧池,陈柳军. 国际检验医学杂志, 2014(01)